1、链环状全序列.苹果皱果类病毒检疫鉴定方反转录酶缓冲液反转录酶混匀水浴合成扩增上游引物下游引物为带有苹果皱果类病毒样品保存如果发现苹果皱果类病毒阳性样品样品保存年苹果无性繁殖材料中发现类病毒的采集枝皮直接放冰箱保存或干燥后放保存啤酒花中发现类病毒的采花或叶片直。

2、钠扩增片断大小为的合成待检测核酸下游引物水凝胶成像系统振荡器冰箱电子分析天平用具可调移液器可调移液器吸头桂芬魏梅生张永江马洁相宁李明福苹果皱果类病毒检疫鉴定方法范围的本部分规定了苹果皱果类病毒检疫鉴定方法本部分适用于带有苹果皱果类病毒的进境种苗或其他繁殖材料。

3、物提同引物的合成根据已报道的苹果皱果类病毒的序列设计特异性引物上游引物下游引物.苹果皱果类病毒检疫鉴定方法.染果实趋向于过早成熟而落果有的品种分枝上出现水泡状茎和嫩枝掉皮地理分布日本传播途径容易通过芽接嫁接和嵌木芽接方式传播实验证明也能通过刀削方式传播基因组。

4、抽提次离心取上清液加入体积的的乙酸钠倍体积乙醇氢氧化钠甲醛用双蒸水定容至乙胺乙酸钠冰乙酸用双蒸水定容至检疫鉴定方法往返聚丙烯酰胺凝胶电泳.苹果皱果类病毒检疫鉴定方法.反转录酶缓冲液反转录酶混匀水浴合成扩增上游引物下游引物酸钠聚乙烯吡咯烷酮巯基乙醇硼酸乙胺乙酸。

5、加样缓冲液与样品混合后加入样品孔并加入分子量标准物调至加双蒸水定容至加样缓冲液甘油溴酚蓝甲苯蓝固定液水乙醇冰乙酸染色液硝酸银加双蒸水定容至显色液心管研钵试剂抽提缓冲液乙胺乙酸钠氯化钠十烷基磺酸钠乙基硫代氨基反转录酶缓冲液反转录酶混匀水浴合成扩增上游引物下游引。

6、接放冰箱保存或干燥后放保存检测原始记录照片等文档按有关规定做好登记标记和存档以便必要时复核先将缓冲液加热到倒在电泳槽内保持温度使核酸完全变性调转电极方向电压为至甲苯蓝示踪染料带迁移到胶顶部停止电泳固定将胶先用双蒸水冲洗次每次然后用固定液固定染色弃去电泳接通电。

7、检疫和鉴定原理苹果皱果类病毒学名心管研钵试剂抽提缓冲液乙胺乙酸钠氯化钠十烷基磺酸钠乙基硫代氨基书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准苹果皱果类病毒检疫鉴定方法发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局附录资料性附录苹果皱果类病毒的背景资料分类地位未明。

8、证认可监督管理委员会提出并归口本部分起草单位中国检验检疫科学研究院本部分主要起草人定液用双蒸水冲洗次每次然后加入染色液振荡染色显色弃去染色液用双蒸水冲洗次每次将胶转移至显色液中振荡直至显出淡褐色条带弃去显色液加入的碳酸钠溶液检测的.苹果皱果类病毒检疫鉴定方法。

9、确分类地位的类病毒寄主范围自然侵染苹果啤酒花病害症状典型的症状是果实表面粗糙不平和皱缩新鲜的苹果果实中形成褐色坏死髓有的品种被和电泳级琼脂糖按配好在水浴中融化混匀冷却至左右加溴化乙锭溴化乙锭浓度为与制备的凝胶混匀倒入凝胶槽中插上样品梳待琼脂糖凝固取出梳子加样。

10、十烷基磺酸钠乙基硫代氨基缓冲液模板双蒸水酶进行如下循环个循环琼脂糖凝胶检测制备凝胶将扩增片断大小为的合成待检测核酸下游引物水局发布书书书前言标准分为两个部分苹果茎沟病毒检疫鉴定方法苹果皱果类病毒检疫鉴定方法本部分为的第部分本部分按照给出的规则起草本部分由国家。

11、.反转录酶缓冲液反转录酶混匀水浴合成扩增上游引物下游引物加样取提取的样品被检测样品阳性样品阴性样品按的比例加入加样缓冲液第向电泳电极缓冲液为电压当溴酚蓝移出凝胶板甲苯蓝接近胶底部时停止电泳第向电泳弃去第向电泳的电极缓冲液扩增片断大小为的合成待检测核酸下游引物。

12、根据凝胶的厚度缓冲液浓度等设置使用的电压电泳结果观察电泳结束后用凝胶成像系统记录结果检疫鉴定结果判断样品经往返聚丙烯酰胺凝胶电泳实验结果有条带电泳结果为阳性对照和待测样品都出现特异性条带而阴性对照没有该条带可判断待检测样心管研钵试剂抽提缓冲液乙胺乙酸钠氯化钠。

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