1、察。迟缓反应需观察。蒙氏柠檬酸盐培养分氯化钠酸镁酸氢铵酸氢钾檬酸钠脂溴麝香草酚蓝溶液蒸馏水法先将盐类溶解于水内,调至,加入琼脂,加热溶化。然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,灭菌。制成斜面备用。验方法挑取少量琼脂培养物接种,于培养,每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色。液酸盐培试肉汤分酪蛋白胨麝香草酚蓝溶液馏水粘液酸法慢慢加入氢氧化钠以溶解粘液酸,混匀。其余成分加热溶解,加入上述粘液酸,冷却至左右校正糖苷酶培养体法法分邻硝基苯半乳糖苷磷酸钠缓冲液蛋白胨水法将溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于试管内,每管,用橡皮塞塞紧。验方法自琼脂斜面挑取培养物满环接种,于培养和观察结果。如果半乳糖苷酶产生,则于变黄。

2、域上部,在其中个区域下部加滴抗血清,在另区域下部加入滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合,并对着黑色背景进行观察,如果抗血清中出现凝结成块的颗粒,而且生理盐水中没有发生自凝现象,那么凝集反应为阳性。如果生理盐水中出现凝集,视作为自凝。这时,应挑取同培养基上的其他菌落继续进行试验。如果待测菌的生化特征符合志贺氏菌属生化特征,而其血清学试验为阴性的话,则按注进行试验。清学分型选做项目先用种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集,则再用相应各群多价血清分别试验。先用群福氏志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集,再用其群和型因子血清分别检查。如果群多价血清不凝集,即使能与种志贺氏菌分型血清发。

3、此酶则不变色。板法法分蛋白胨氯化钠氯吲哚半乳糖苷琼脂馏水法将各成分加热煮沸于水中,冷却至左右校正至,高压灭菌。倾注平板避光冷藏备用。验方法挑取琼脂斜面培养物接种于平板,划线和点种均可,于培养观察结果。如果半乳糖苷酶产生,则平板上培养物颜色变蓝色,如无此酶则培养物为无色或不透明色,培养后有部分转为淡粉红色。基酸脱羧酶试验培分蛋白胨母浸膏葡萄糖溴甲酚紫乙醇溶液型或型赖氨酸和鸟氨酸蒸馏水法除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶,分别加入赖氨酸和鸟氨,高压灭菌。另将各种糖类分别配好溶液,同时高压灭菌。将糖溶液加入于培养基内,以无菌操作分装小试管。注蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。验方法从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于培养,般。

4、形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察,则继续培养至再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表。,挑取可疑菌落,半固体,营养琼脂斜面或志贺氏菌显色培养基生化鉴定报告血清学分型志贺氏菌属分群及分型结果检样或样品志贺氏菌增菌肉汤,厌氧培养表志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板志贺氏菌的菌落特征琼脂无色至浅粉红色,半透明光滑湿润圆形边缘整齐或不齐琼脂粉红色至无色,半透明光滑湿润圆形边缘整齐或不齐志贺氏菌显色培养基按照显色培养基的说明进行判定步生化试选择性琼脂平板上分别挑凝。宋内氏志贺氏菌没有抗原。集反应在玻片上划出个约的区域,挑取环待测菌,各放环于玻片上的每区。

5、先用已知菌种鉴定后方可使用,此试剂在条件下可储存个月,挑取可疑菌落,半固体,营养琼脂斜面或志贺氏菌显色培养基生化鉴定报告血清学分型志贺氏菌属分群及分型结果检样或样品志贺氏菌增菌肉汤,厌氧培养表志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板志贺氏菌的菌落特征琼脂无色至浅粉红色,半透明光滑湿润圆形边缘整齐或不齐琼脂粉红色至无色,半透明光滑湿润圆形边缘整齐或不齐志贺氏菌显色培养基按照显色培养基的说明进行判定步生化试选择性琼脂平板上分别挑取个以上典型或可疑菌落,分别接种半固体和营养琼脂斜面各管白胨水,以过滤法除菌,分装于试管内,每管,用橡皮塞塞紧。验方法自琼脂斜面挑取培养物满环接种,于培养和观察结果。如果半乳糖苷酶产生,则于变黄色,如。

6、色,如无此酶则不变色。板法法分蛋白胨氯化钠氯吲哚半乳糖苷琼脂馏水法将各成分加热煮沸于水中,冷却至左右校正至,高压灭菌。倾注平板避光冷藏备用。验方法挑取琼脂斜面培养物接种于平板,划线和点种均可,于培养观察结果。如果半乳糖苷酶产生,则平板上培养物颜色变蓝色,如无此酶则培养物为无色或不透明色,培养后有部分转为淡粉红色。基酸脱羧酶试验至,分装试管,每管约,于高压灭菌。控肉汤分酪蛋白胨麝香草酚蓝溶液馏水法所有成分加热溶解,冷却至左右校正至,分装试管,每管约,于高压灭菌。验方法将待测新鲜培养物接种测试肉汤和质控肉汤,于培养观察结果,肉汤颜色蓝色不变则为阴性结果,黄色或稻草黄色为阳性结果。白胨水靛基质试分蛋白胨或胰蛋白胨化钠馏水法按上述成分配制,分。

7、凝集,仍不得判定为志贺氏菌属。志贺氏菌属生化特性见表。表志贺氏菌属个群的生化特征生化反应群痢疾志贺氏菌群福氏志贺氏菌群鲍氏志贺氏菌群宋内氏志贺氏菌半乳糖苷酶尿素赖氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶水杨苷叶苷靛基质甘露醇棉子糖甘油注表示阳性表示阴性表示多数阴性表示多数阳性表示迟缓阳性表示有不同生化型。.食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验。检验程序志贺氏菌检验程序见图。图志贺氏菌检验程序操作步菌以无菌操作取检样,加入装有灭菌志贺氏菌增菌肉汤的均质杯,用旋转刀片式均质器以均质或加入装有志贺氏菌增菌肉汤的均.食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验.。氨基酸按加入,氨基酸按加入,再校正至。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内,每管,上。

8、装,高压灭菌。冷却至,倾注平板。注如不立即使用,在条件下可储存周。糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂分酵母膏氨酸糖糖糖氧胆酸钠氯化钠代硫酸钠檬酸铁铵红脂馏水法除酚红和琼脂外,将其他成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,校正至。另将琼脂加入蒸馏水中,分装试管,每管约,于高压灭菌。验方法将待测新鲜培养物接种测试肉汤和质控肉汤,于培养观察结果,肉汤颜色蓝色不变则为阴性结果,黄色或稻草黄色为阳性结果。白胨水靛基质试分蛋白胨或胰蛋白胨化钠馏水法按上述成分配制,分装小试管,高压灭菌。注此试剂在条件下可储存个月。基质试剂凡克试剂将对甲氨基苯甲醛溶解于戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸。波试剂将对甲氨基苯甲醛溶解于乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸。验方法挑取少量培养物接种,在培养,必要时。

9、滴加层石蜡油,高压灭菌。验方法从琼脂斜面上挑取培养物接种,于培养,观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。阴性对照管应为黄色,空白对照管为紫色。发酵管分牛肉膏白胨化钠酸氢钠溴麝香草酚蓝溶液蒸馏水萄糖发酵管按上述成分配好后,按加入葡萄糖,左右校正至,分装于有个倒置小管的小试管内,高压灭菌。他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶,高压灭菌。另将各种糖类分别配好溶液,同时高压灭菌。将糖溶液加入于培养基内,以无菌操作分装小试管。注蔗糖不纯,加热后会自行入欧波试剂约,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后,应。

10、水法先将盐类和糖溶解于水内,校正至,再加琼脂加热溶解,然后加入指示剂。混合均匀后分装试管,高压灭菌。制成斜面备用。验方法用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不到混浊,以每接种环内含菌数在之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种琼脂斜面见附录中。固体琼脂见附录中。萄糖铵培养基见附录中。素琼脂见附录中。取出后冷却至,加入除菌过滤的新生霉素溶液,分装备用。注如不立即使用,在条件下可储存个月。生霉素溶分新生霉素蒸馏水法将新生霉素溶解于蒸馏水中,用过滤膜除菌,如不立即使用,在条件下可储存个月。用时每志贺氏菌增菌肉汤加入新生霉素溶液,混匀。康凯分蛋白胨糖胆盐氯化钠性红晶紫脂馏水法将以上成分混合加热溶解,冷却至左右校正至,分。

11、培养。加入柯凡克试剂约,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色或加入欧波试剂约,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后,应先用已知菌,置培养,分别观察结果。是糖铁琼脂中斜面产碱底层产酸发酵葡萄糖,不发酵乳糖,蔗糖不产气福氏志贺氏菌型可产生少量气体不产硫化氢半固体管中无动力的菌株,挑取其已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔,进行生化试验和血清学分型。化试验及附加生化化试验用已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔,进行生化试验,即半乳糖苷酶尿素赖氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和叶苷的分解试验。除宋内氏志贺氏菌鲍氏志贺氏菌型的鸟氨酸阳性宋内氏菌和痢疾志贺氏菌型,鲍氏志贺氏菌型的半乳糖苷酶。

12、小试管,高压灭菌。注此试剂在条件下可储存个月。基质试剂凡克试剂将对甲氨基苯甲醛溶解于戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸。波试剂将对甲氨基苯甲醛溶解于乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸。验方法挑取少量培养物接种,在培养,必要时可培养。加入柯凡克试剂约,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色或加养琼脂斜分蛋白胨肉膏化钠琼脂蒸馏水法将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入氢氧化钠溶液约,冷却至左右校正至。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装小号试管,每管约。于灭菌,制成斜面。注如不立即使用,在条件下可储存周。固体分蛋白胨肉膏氯化钠脂馏水法按以上成分配好,加热溶解,并校正至,分装小试管,灭菌,直立凝固备用。萄糖铵培分氯化钠酸镁酸氢铵酸氢钾萄糖脂溴麝香草酚蓝水溶液蒸。

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