1、，每孔加。同时将标准阴性阳性血消分别作倍稀释作对照，培育。洗板重复。加酶标抗用稀释液将兔抗猪辣根过氧化物酶结合物稀释至工作浓度，每孔加入，培育。洗板重复。加底物每孔加入底物溶液见，室温下避光反应。终止反应当标准阳性血清对照孔呈黄色，标准阴性血清对照孔无色或略微显色时，每孔加入终止液见终止反应，内测定光密度。染色底物溶液。见。试验程序取样和样品处理无菌采取被检猪血液，分离血清，试验前血清灭活。在国际贸易中，用细胞稀释液将血清作∶稀释终浓度少再放置，每孔加含多聚甲醛的，再在室温孵育。去掉多聚甲醛，用氯化钠冲洗将微量板在放置用含丙酮的固定，干燥。加犆犛犉高免猪抗血清每孔加高免猪抗血清，血清用含有吐温和叠氮钠的氯化钠溶液稀释，在孵育。抗血清的工作稀释度应在滴定前。

2、的氯化钠溶液洗板次。加工作浓度的抗猪犐犵犌犎犚犘犗结合物每孔加工作浓度的抗猪取样和样品处理无菌采取被检猪血液，分离血清，试验前血清灭活。在国际贸易中，用细胞稀释液将血清作∶稀释终浓度∶，或根据双边协议的要求稀释血清。犘犓细胞悬液的制备将细胞瓶中培养的细胞，用细胞消化液进行消化，在显微镜下用细胞计数器计算细胞密度，而后用细胞生长液制成个细胞的细胞悬液，置备用。病毒滴度的测定在孔微量细胞板中每孔加入细胞培养液，用稀释液将冻存毒作稀释，每稀释度病毒接种孔，每孔，正常细胞对照孔不加病毒，仅加稀释液。而后每孔加细胞悬液，置氧化碳培养箱中培养后收获，进行猪瘟过氧化物酶联试验，并按法计算，判读半数感染量。猪瘟犜犺犻狏犲狉狏犪犾各以的碳酸氢钠调至。犃细胞生长液。

3、品，可判为阳性细胞浆内无亮绿色荧光的样品为阴性。胎牛血清应确保无及其抗体。每个样品应设第个含血清但不含病毒的对照孔，以检测血清的细胞毒性和或非特异性染色。接毒每孔加已用生长液稀释到含的病毒悬液，在微量振荡器上混合。孵育将微量板置于氧化碳培养箱中孵育。加生长液每孔加含细胞的生长液。细胞在氧化碳的环境中生长融合，通常犛犖犜内形成单层。病毒回归及对照试验每次实验需同时作病毒回归工作毒及其稀释物及阴性参照血清阳性参照血清和正常细胞作为对照，每个对照做孔。具体操作同。洗板弃掉生长液，用氯化钠冲洗微量板次。用吸水纸吸干微量板中的水分。固定单层细胞可用以下任何种方法进行固定将微量板在孵育后每次，甩干孔内残液，于吸水纸上拍打吸干。加被检血清和对照血清用稀释液将待检血清作倍稀。

4、犛犖犜洗涤和固定用醋酸钠溶液冲洗。蒸馏水冲洗后将切片固定在载玻片上。观察光学显微镜下检查结果，扁桃体隐窝上皮细胞有暗红着色判为阳性。结果判定结果判定见表。表犆犛犉犞野毒株疫苗株和犅犞犇犅犇毒株的鉴别多克隆抗体特异性单克隆抗体毒株疫苗株毒株判定野毒疫苗毒株非瘟病毒注表示阳性，表示阴性。病毒分冲洗微量板次。用吸水纸吸干微量板中的水分。固定单层细胞可用以下任何种方法进行固定将微量板在孵育后，至少再放置，每孔加含多聚甲醛的，再在室温孵育。去掉多聚甲醛，用氯化钠冲洗将微量板在放置用含丙酮的固定，干燥。加犆犛犉高免猪抗血清每孔加高免猪抗血清，血清用含有吐温和叠氮钠的氯化钠溶液稀释，在孵育。抗血清的工作稀释度应在滴定前测定，如滴定为∶的血清，使用时作∶稀释。洗板用含吐温。

5、。测定光密度值在酶标仪上测定波长的密度。判断标准阳性对照孔平均矫正时，阴性对照孔平均时试验成立，按以下标准判定结果样品的矫正为阳性样品的矫正为阴性，样品的。浸润将切片在中浸润片刻，用吸水纸吸去多余的水分，放在湿盒中的架子上。加猪瘟荧光抗体结合物滴加工作浓度的猪瘟荧光抗体结合物到切片上，在密闭的湿盒中作用。若需要加第结合物，置室温下，用洗次。然后滴加工作浓度的结合物，在密闭的湿盒中作用。室温下再用洗次，每次。犛犖犜封片自然干燥后，用碳酸盐甘油缓冲液封片。荧光显微镜观察结果。结果判定阳性切片细胞胞浆内呈现亮绿或黄绿色荧光。在扁桃体隐窝上皮细胞肾脏皮质远端及近端小管和髓质集尿管细胞回肠腺体上皮细胞脾脏动脉周围淋巴样鞘的类淋巴细胞等细胞的细胞浆内呈现亮绿色荧光的样。

6、测定，如滴定为∶的血清，使用时作∶稀释。洗板用含吐温的氯化钠溶液洗板次。加工作浓度的抗猪犐犵犌犎犚犘犗结合物每孔加工作浓度的抗猪结合物，该溶液用含吐温和叠氮钠的氯化钠溶液稀释。孵育。洗板重复。加底物每孔加染色加犎犚犘犗抗体结合物用冲洗切片，将单抗结合物工作液滴加到整个切片，每种单抗加个切片，另切片滴加多抗结合物工作液作为对照。湿盒中作用。洗涤用洗板次，每次。加底物溶液室温下用新配置的染色底物溶液染色。犛犖犜洗涤和固定用醋酸钠溶液冲洗。蒸馏水冲洗后将切片固定在载玻片上。观察光学显微镜下检查结果，扁桃体隐窝上皮细胞有暗红着色判为阳性。结果判定结果判定见表。表犆犛犉犞野毒株疫苗株和犅犞犇犅犇毒株的鉴别多克隆抗体特异性单克隆抗体毒株疫苗株毒株判定野毒疫苗毒。

7、按配制的细胞稀释液中，加入犊牛血清。犃细胞消化液将胰酶氯化钠氯化钾葡萄糖碳酸氢钠依次溶于蒸水中。为使胰酶充分溶解，可置水浴加热或磁力搅犛犖犜拌，应使液体完全清亮。然后加入酚红见，再加入青霉素和链霉素溶液各，加蒸水至。过滤除菌，分装后保存，使用时倍蒸水稀释。犃丙酮固定液预冷丙酮犊牛血清白蛋白蒸馏水犃酚红溶液将酚红置研钵中，取氢氧化钠，先加入少量氢氧化钠研磨，使其完全溶解，再加入其余的氢氧化钠。加蒸水至。用滤纸过滤，灭菌古典猪瘟检疫规程.细胞浆内呈现弱的黄绿色荧光的样品为可疑可疑结果经过重复试验，细胞浆内仍呈现弱的黄绿色荧光可判为阳性。单克隆抗体免疫过氧化物酶试验仪器和试剂显微镜。冷冻切片机。结合毒株疫苗株毒株的种特异性单克隆抗体。结合的抗免疫球蛋白多克隆抗体。

8、油混合即成碳酸盐甘油缓冲液，用时需高压灭菌。犃染色底物液氨基乙基卡巴胺犖，犖乙基甲酰胺注意有毒液的乙酸胺过滤除菌液双氧水用前现配液中加入液混匀，然后加入液。犃细胞稀释液将溶于去离子水中，高压蒸汽灭菌。保存备用。使用时每加入谷氨酰胺青霉素和硫酸链霉素少再放置，每孔加含多聚甲醛的，再在室温孵育。去掉多聚甲醛，用氯化钠冲洗将微量板在放置用含丙酮的固定，干燥。加犆犛犉高免猪抗血清每孔加高免猪抗血清，血清用含有吐温和叠氮钠的氯化钠溶液稀释，在孵育。抗血清的工作稀释度应在滴定前测定，如滴定为∶的血清，使用时作∶稀释。洗板用含吐温的氯化钠溶液洗板次。加工作浓度的抗猪犐犵犌犎犚犘犗结合物每孔加工作浓度的抗猪结合物，该溶液用含吐温和叠氮钠的氯化钠溶液稀释。。

9、染色底物配制见。马血清。丙酮分析纯醋酸钠吐温。见。试验程序取样取个或更多切成的阳性扁桃体冰冻切片，如果取不到扁桃体也可用其他阳性器官。固定在丙酮中将切片用飞片法固定，空气中干燥。犎犚犘犗抗体结合物工作液的制备分别制备种单克隆抗体结合物和多克隆抗体结合物工作液，稀释液为含吐温和马血清，底物溶液见，室温染色。结果判定当阴性血清对照孔样品血清对照孔和细胞对照孔细胞出现完全或部分染成红棕色，而阳性血清对照孔细胞没有出现颜色，试验结果成立。细胞层被完全或部分染成红棕色或细胞的胞浆染成暗红色判为阴性，细胞层或细胞的胞浆没有染上颜色判为阳性。古典猪瘟检疫规程。洗板重复。加底物每孔加入底物溶液见，室温下避光反应。终止反应每孔加入终止液见终止反应，分钟内测定光密度。

10、微量细胞板中每孔加入细胞培养液，用稀释液将冻存病毒作稀释，每稀释度病毒接种孔，每孔，正常细胞对照孔不加病毒，仅加稀释液。而后每孔加细胞悬液，置氧化碳培养箱中培养后收获，进行猪瘟荧光抗体染色试验，并按法计算，判读荧光组半数感染量。猪瘟犜犺犻狏犲狉狏犪犾病毒工作液的制备以细胞稀释液稀释原毒成含实验病毒工作量。中和试验在孔细胞培养板上，排各孔加入细胞稀释液，其余各排每孔加入稀释犛犖犜液，向排各孔内加入被检血清，每个样品加孔。将被检血清混匀后吸出至排，依次倍比稀释至排正为可疑。矫正样品阴性对照。犛犖犜附录犃规范性附录溶液配制犃犿狅犾犔狆犎磷酸盐缓冲液犘犅犛磷酸氢钠磷酸氢钠氯化钠加双蒸水溶解至。犃犿狅犾犔狆犎碳酸盐甘油缓冲液磷酸氢钠磷酸钠蒸馏水份碳酸缓冲液加份甘。

11、孵育。洗板重复。加底物每孔加染色细胞浆内呈现弱的黄绿色荧光的样品为可疑可疑结果经过重复试验，细胞浆内仍呈现弱的黄绿色荧光可判为阳性。单克隆抗体免疫过氧化物酶试验仪器和试剂显微镜。冷冻切片机。结合毒株疫苗株毒株的种特异性单克隆抗体。结合的抗免疫球蛋白多克隆抗体。染色底物配制见。马血清。丙酮分析纯醋酸钠吐温。见。试验程序取样取个或更多切成的阳性扁桃体冰冻切片，如果取不到扁桃体也可用其他阳性器官。固定在丙酮中将切片用飞片法固定，空气中干燥。犎犚犘犗抗体结合物工作液的制备分别制备种单克隆抗体结合物和多克隆抗体结合物工作液，稀释液为含吐温和马血清，箱。恒温培养箱。高压灭菌锅。管，载玻片盖玻片。荧光抗体，由指定单位提供。阳性阴性参照血清，由指定单位提供。细。

12、株非瘟病毒注表示阳性，表示阴性。病毒分多余的水分，放在湿盒中的架子上。加猪瘟荧光抗体结合物滴加工作浓度的猪瘟荧光抗体结合物到切片上，在密闭的湿盒中作用。若需要加第结合物，置室温下，用洗次。然后滴加工作浓度的结合物，在密闭的湿盒中作用。室温下再用洗次，每次。犛犖犜封片自然干燥后，用碳酸盐甘油缓冲液封片。荧光显微镜观察结果。结果判定阳性切片细胞胞浆内呈现亮绿或黄绿色荧光。在扁桃体隐窝上皮细胞肾脏皮质远端及近端小管和髓质集尿管细胞回肠腺体上皮细胞脾脏动脉周围淋巴样鞘的类淋巴细胞等细胞的细胞浆内呈现亮绿色荧光的样品，可判为阳性细胞浆内无亮绿色荧光的样品为阴性细胞浆内呈现弱的黄绿色荧光的样品为可疑可疑度，而后用细胞生长液制成个细胞的细胞悬液，置备用。病毒滴度的测定在。

参考资料：

[1]关于进一步党建深化税收征管改革的意见PPT 编号326（第33页，发表于2022-06-26）

[2]关于进一步党建深化税收征管改革的意见PPT 编号14978（第33页，发表于2022-06-26）

[3]国家安全教育日主题宣传PPT 编号16192（第20页，发表于2022-06-26）

[4]国家安全教育日主题宣传PPT 编号9052（第20页，发表于2022-06-26）

[5]国家安全教育日主题宣传PPT 编号228（第20页，发表于2022-06-26）

[6]国家安全教育日主题宣传PPT 编号180（第20页，发表于2022-06-26）

[7]国家安全教育日主题宣传PPT 编号186（第20页，发表于2022-06-26）

[8]国家安全教育日主题宣传PPT 编号228（第20页，发表于2022-06-26）

[9]国家安全教育日主题宣传PPT 编号264（第20页，发表于2022-06-26）

[10]国家安全教育日主题宣传PPT 编号156（第20页，发表于2022-06-26）

[11]国家安全教育日主题宣传PPT 编号168（第20页，发表于2022-06-26）

[12]国家安全教育日主题宣传PPT 编号258（第20页，发表于2022-06-26）

[13]红色党政关于进一步深化税收征管改革的意见党建党课PPT 编号180（第35页，发表于2022-06-26）

[14]红色党政关于进一步深化税收征管改革的意见党建党课PPT 编号180（第35页，发表于2022-06-26）

[15]红色党政关于进一步深化税收征管改革的意见党建党课PPT 编号174（第35页，发表于2022-06-26）

[16]红色党政关于进一步深化税收征管改革的意见党建党课PPT 编号180（第35页，发表于2022-06-26）

[17]红色党政关于进一步深化税收征管改革的意见党建党课PPT 编号180（第35页，发表于2022-06-26）

[18]红色党政关于进一步深化税收征管改革的意见党建党课PPT 编号168（第35页，发表于2022-06-26）

[19]红色党政关于进一步深化税收征管改革的意见党建党课PPT 编号204（第35页，发表于2022-06-26）

[20]红色党政关于进一步深化税收征管改革的意见党建党课PPT 编号168（第35页，发表于2022-06-26）