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本项目将开发出具有自主知识产权的新型抗菌肽制剂。
项目完成时至少可达到国内领先水平。
项目技术方案论述生产技术工艺流程主要技术参数将采用技术从鱼类克隆的抗菌肽全长基因与表达载体连接构建重组载体重组载体转入酵母筛选抗菌肽高效表达酵母体系大量表达抗菌肽抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验重组表达载体的构建将我们从淡水鱼中诱导表达的抗菌肽基因与具有高效表达启动子的表达载体连接,构建表达抗菌肽。
研制出具有自主知识产权的高效广谱的抗菌肽制剂。
考核指标该酵母表达体系对抗菌肽的表达稳定,表达量的重复性。
抗菌肽的抗菌活性高,抗菌谱广。
分阶段描述项目执行过程中各阶段目标年月将抗菌肽基因与具有高效表达启动子的表达载体连接,构建重组表达载体。
月将重组载体转入解脂耶氏酵母结果显示不同的抗菌肽其抗菌活性和抗菌谱存在很大的差异,因此继续寻找高效广谱的生物抗菌肽,是广大生命科学工作者努力的方向。
项目技术先进性,对相关领域技术进步的推动作用本项目采用的是先进的分子生物学研究技术。
用基因克隆技术将我们从鱼肝脏中分离的抗菌肽基因与具有高效表达启动子的表达载体连接,构建重组分子。
然后用醋酸锂法将重组分子转入解脂耶氏酵母中,筛选高效表达抗菌肽的工程菌,以工程菌工业化发酵生产抗菌肽,进而开发出高效广谱的新型抗菌剂。
该项目的实施对相关领域技术进步有定的推动作用。
项目目前进展情况。
我们已进行了前期工作,用引起人畜共患病的多种微生物诱导鱼,继而采用差异显示技术从经微生物诱导的鱼的肝脏中分离到了三个特异表达的分子,并使用技术克隆了它们的全长基因。
这些工作为本项目的实施奠定了基础。
二技术方案论述项目技术关键点或创新点论述,项目完成时达到的技术水平目前,人们主要以两种方法获得抗菌肽。
其是直接从生物体内分离抗菌肽,用这种方法不能获得大量的抗菌肽。
其二是根据已以工程菌工业化发酵生产抗菌肽,可大规模生产,生产周期短,生产成本低且不受季节和气候变化等外在环境的影响。
工程菌发酵原料易得,不会破坏和浪费农业资源。
对人才培养情况本课题的实施将为我国培养名生物化学和分子生物学及微生物学专业的硕士研究生。
环境影响及效益。
以工程菌工业化发酵生产抗菌肽,在生产和推广应用过程中均不会影响生态环境。
选题的必要性项目所处技术领域产业政策自从青霉素被发现以来,人们对病原菌引起的感染性疾病不再束手无策,特别是内酰胺类抗生素的发现,对病原菌感染性疾病的治疗产生了革命性飞跃,抗生素已成为临床治疗病原菌感染的强有力武器。
但是,随着抗菌药物的广泛应用和滥用,耐药菌株不断增加,使抗感染治疗陷入耐药菌危机之中。
为了应对耐药菌感染,人们方面对传统抗生素进行结构改造以降低细菌的耐药性,另方面正在不断研究和开发新型抗菌药物。
近年来出现的抗菌肽就是类具有巨大发展潜力的新型抗菌药物,它是宿主产生的类抵抗外界病原体感染的小分子阳离子肽,广泛存在于昆虫植物动物及人体内,具有非特异性抗细菌真菌病毒等病原体作用已发现的抗菌肽基因的序列设计引物在不同的生物中通过技术克隆抗菌肽基因,该方法只能在不同生物中获得该抗菌肽的同源基因,而不能获得新的抗菌肽基因。
在本项目中,我们将前期工作中获得的抗菌肽基因与载体连接,构建抗菌肽酵母高效表达体系,以工程菌工业化发酵生产抗菌肽,用这种方法可获得大量新的高效广谱抗菌肽。
计算机检索结果表明,人们对昆虫抗菌肽进行了较多的研究,而对鱼类抗菌肽研究很少。
目前国内只有厦门大学最近采用传统方法从海水养殖的鲈鱼中分离出种抗菌肽基因,但并未对该基因的表达及其产物的抗菌活性进行分析,也没有开发出基于鱼类抗菌肽基因的广谱抗菌肽制剂。
本项目将开发出具有自主知识产权的新型抗菌肽制剂。
项目完成时至少可达到国内领先水平。
项目技术方案论述生产技术工艺流程主要技术参数将采用技术从鱼类克隆的抗菌肽全长基因与表达载体连接构建重组载体重组载体转入酵母筛选抗菌肽高效表达酵母体系大量表达抗菌肽抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验重组表达载体的构建将我们
