生沉淀，影响测定结果，故在回流前向水样中加入硫酸汞，使成为络合物以消除干扰。氯离子含量高于的样品应先做定量稀释，使含量降低至以下，再进行测定。方法的适用范围用浓度的重铬酸钾溶液可测定大于的值，未经稀释水样的测定上限是。丙烯酰胺降解率的测定取菌株接入含丙烯酰胺的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，培养，再将菌体接入含丙烯酰胺的无机盐培养基中，以丙烯酰胺为唯碳源，培养天，离心，取菌上清液于紫外分光度计测定紫外吸收值的变化，以的变化值代表丙烯酰胺的降解能力。降解率未添加降解菌的添加降解菌的未添加降解菌的丙烯酰胺含量的测定为了确定丙烯酰胺的吸收波长，配制不同浓度的丙烯酰胺标准溶液，在紫外分光光度计上进行扫描，最终确定丙烯酰胺的吸收波长为，以下研究实验中均采用的波长测定丙烯酰胺的含量。丙烯酰胺标准溶液准确称取丙烯酰胺含量，溶解在去离子水中，定量转移入容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液为标准贮备液。丙烯酰胺标准曲线在只具塞试管中，分别加入和标准溶液，各加水至，配成和标准系列。在紫外分光光度计上处测定不同浓度的丙烯酰胺溶液随吸光度变化的标准曲线。测量数值如表所示，标准曲线如图。相关系数，曲线方程为。表标准浓度溶液的吸光值浓度吸光值浓度吸光值图丙烯酰胺标准曲线结果与分析降解丙烯酰胺菌的分离经稀释平板涂布筛选了两种菌株菌株的形态特征圆形规则，菌落较大，湿润，乳白色，透明菌株的形态特征圆形规则，菌落小，干燥，白色，半透明优势菌的菌体染色及形态鉴定菌体染色由图中可以看出，菌株为革兰氏阳性杆菌，菌株为革兰氏阴性菌。图菌株简单染色图菌株简单染色丙烯酰胺标准曲线图菌株革兰氏染色图菌株革兰氏染色生理生化鉴定接触酶实验，菌株与菌株均没有气泡产生，阴性糖氧化发酵，菌株和菌株均变黄，没有气泡甲基红试验，菌株为红色，阳性，菌株为黄色，阴性实验，菌株与菌株均不变红，阴性。图甲基红试验右边为对照图试验右边为对照菌株生长条件优化丙烯酰胺是具有毒性的有机物，需向培养液中添加营养元素以促进微生物生长从而使丙烯酰胺降解。实验确定了外加碳源氮源磷源及其最佳浓度，优化了菌株在纯培养条件下降解丙烯酰胺的最佳生长条件。降解时间的影响将优势菌株进行斜面培养，再用无菌水洗，制成菌悬液，记录不同时间下菌株的生长情况，取六个时间点。降解率达到，丙烯酰胺除去率达到。参考文献张学佳,纪巍,王宝辉等丙烯酰胺生态毒理行为研究进展生态毒理学报,孔繁翔环境生物学北京高等教育出版社刘衍余,王苏平,杨菁化工百科全书第卷北京,化学工业出版陈庆国聚丙烯酰胺降解菌的筛选及降解含聚丙烯酰胺污水的室内研究孙韦强,伍登熙,尹光琳等利用微生物生产丙烯酰胺的研究生物工程学报,沈寅初，张国凡，韩建生微生物法生产丙烯酰胺工业微生物沈萍,范秀容,李广武等微生物学实验北京高等教育出版社,布坎南,吉本斯等伯杰细菌鉴定手册第八版北京科学出版社东秀珠,蔡妙英常见细菌系统鉴定手册北京科学出版社孙韦强,伍登熙,尹光琳等利用微生物生产丙烯酰胺的研究生物工程学报,水和废水检测分析方法，中国环境科学出版社致谢在论文即将完成之际，我衷心感谢我的导师王老师。本实验是在王老师的悉心指导下完成的。在整个实验过程中，由于是自己第次独立完成个实验，遇到了各种问题，但是，在王老师的认真指导和帮助下，我逐渐把各个问题细小化或完全解决。导师渊博的专业知识，严谨的治学态度，精益求精的工作作风，诲人不倦的高尚师德，严以律己宽以待人的崇高风范，朴实无华平易近人的人格魅力对我影响深远，是我学习的模范。在此还要感谢和我在同个实验室的师姐和同学，在实验过程中他们给予热心帮助，在他们的帮助下，实验得以顺利完成。最后，我要感谢生命科学学院的全体老师以及生物工程班所有同学们，谢谢你们在四年中对我的关心和帮助,时间图降解率随时间的变化曲线接种量的影响将最优菌株向培养基中分别按不同的体积分数接种，在已优化的条件下培养天后测定丙烯酰胺的降解率。图降解率随接种量的变化曲线培养温度的影响分别设定了不同的生长温度，在同等条件下培养。测定不同温度下最优菌株对溶液的降解效果。对丙烯酰胺溶液的降解率进行了测定，从而确定了降解实验的最佳温度。图降解率随温度的变化曲线初始值的影响将优势菌株进行斜面培养天，再用无菌水洗，制成菌悬液，用已灭菌的移液管取等量分别倒入值为的液体培养基置于摇床培养进行，天后测其菌浓，从而确定最适。图降解率随值的变化曲线污水值测定具体操作如下取混合均匀的水样或适量水样稀释至置于磨口的回流锥形瓶中。于试料中加入重铬酸钾标准溶液和几颗防爆沸玻璃珠摇匀。将锥形瓶接到回流装置冷凝管下，接冷凝水。从冷凝管壁上端缓慢加入硫酸银硫酸试剂，以防止低沸点有机物逸出。自溶液开始沸腾起回流小时。注对于化学需氧量高的废水样，可先取上述操作所需提及的的废水样和试剂，于硬质玻璃试管中，摇匀，加热后观察是否变成绿色。如溶液显绿色，再适当减少废水取样量，直至溶液不变绿色为止，从而确定废水样分析时应取用的体积。稀释时，所取废水样量不得少于，如果化学需氧量很高，则水样应多次稀释。注废水中氯离子含量超过时，应先把硫酸汞加入回流锥形瓶中，再加废水或适量废水稀释至，摇匀。以下操作同上。冷却后，用水自上冲洗冷凝管，取下锥形瓶，用水稀释至左右。溶液冷却至室温，加入滴试亚铁灵指示剂，用硫酸亚铁铵标准溶液滴定，颜色由黄经蓝绿色变为红褐色为终点，记录硫酸亚铁铵标准溶液消耗毫升数。测定水样同时，以重蒸馏水，按同样操作步骤作空白试验。记录滴定空白时硫酸亚铁铵标准溶液的用量。计算标准溶液浓度，试料测定时标准溶液消耗的体积，空白实验标准溶液消耗的体积，试料体积，的摩尔质量，以为单位的换算值菌株对污水降解结果表两种菌株降解废水的能力废水浓度降解前降解后降解率菌株菌株菌株对丙烯酰胺除去率结果表两种菌株降解丙烯酰胺的能力丙烯酰胺浓度未添加降解菌的添加降解菌的除去率菌株菌株结论通过本实验的研究，可以知道菌株为革兰氏阳性杆菌，菌株为革兰氏阴性菌。其中菌株的降解率要高，所以优势菌株可选菌株最适生长温度为，最适生长为左右，最佳接种量为，最适生长时间是，菌株对污水菌株对污水降解结果菌株对丙烯酰胺除去率结果结论参考文献致谢摘要微生物降解因其特有的无害化处理将成为解决丙烯酰胺引起环境污染问题的有效手段。采用富集选择培养分离的方法，从江西昌九农科化工有限公司厌氧池废水中筛选分离得到能够降解丙烯酰胺单体的菌株，对菌株的培养基及生长条件优化，得到株降解效果较好的菌株,最后对该丙烯酰胺降解菌进行基本的生理生化特性测试，初步鉴定属葡萄球菌属，最适生长温度为，最适生长为左右，最佳接种量为，最适生长时间是，菌株对污水降解率达到，丙烯酰胺除去率达到。关键词丙烯酰胺，降解，菌株，筛选，鉴定，前言名称规格型号生产厂家隔水式电热恒温培养箱Ⅱ上海新苗医疗器械制造有限公司电热恒温鼓风干燥箱上海精密实验设备有限公司电子天平上海精科天平分析天平上海精密科学仪器有限公司不锈钢手提式灭菌锅上海申实医疗器械厂全自动高压灭菌锅日本洁净工作台苏州安泰空气技术有限公司可见分光光度计型龙尼柯上海仪器有限公司酸度计型上海雷磁仪器厂恒温培养摇床上海智城分析仪器制造有限公司冰箱海尔冰箱培养基选择性培养基表培养基的配制葡萄糖丙烯酰胺控制在葡萄糖氧化发酵培养基表培养基的配制蛋白胨葡萄糖琼脂溴甲酚紫蒸馏水用氢氧化钠调，分装试管，蒸汽灭菌。甲基红试验和试验培养基表培养基的配制蛋白胨葡萄糖蒸馏水调，灭菌。实验方法及原理降解丙烯酰胺菌筛选流程菌株的富集实验样品采自江西昌九农科化工有限公司厌氧池带污泥废水，将所采集的带污泥废水接入已灭菌的富集液体培养基中，在旋转式摇床转速培养天。从废水中富集培养菌株菌种的纯化反复划线培养进行分离纯化用选择性培养基筛选出优势菌株优势菌生理生化性质测定数据处理和结果分析菌株生长条件优化及污染物降解率测定菌株的分离纯化采用两次单细胞挑取法使初步分离的微生物得到纯培养。观察菌落形态特征，发现初步分离的微生物大致有两种。用灭菌的竹签从稀释涂布平板法得到的平板上挑取单菌落进行平板划线分离。用灭菌的竹签从第次划线分离得到的平板上再挑取单菌落进行平板划线分离。待菌苔长出后，检查其特征是否致，同时将细胞涂片染色后用显微镜检查是否为单的微生物。若发现有杂菌，需再次进行分离纯化，直到获得纯培养。将已经纯化的两株菌种分别接种于试管斜面，做好标记。菌种的生理生化鉴定实验参照简明第八版伯杰细菌鉴定手册常见细菌系统鉴定手册对筛选的细菌进行生理生化性质测定，将细菌初步鉴定到属。鉴定方法主要有革兰氏染色法接触酶试验甲基红试验实验葡萄糖氧化发酵实验。革兰氏染色挑取少量菌苔涂布在载玻片上，风干，在火焰上固定涂片，滴加结晶紫染色，水洗，滴加碘液冲去残水，并用碘液覆盖约，水洗。用滤纸吸去载玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。用番红液复染约，水洗。干燥后，用油镜观察。菌体被染成蓝紫色的为革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。接触酶试验将培养的斜面接种，以玻璃棒沾取少许涂在过氧化氢的玻片上，如有气泡产生则为阳性，无气泡为阴性。甲基红试验培养基蛋白胨，葡萄糖。在培养液中加入滴甲基红试剂，红色为甲基红试验阳性反应，黄色为阴性反应。试验培养基同甲基红试验。取培养液和氢氧化钠等量相混。加少许肌酸，如培养液出现红色，即为试验阳性反应。葡萄糖氧化发酵实验取葡萄糖发酵培养基本试管支，分别接入要鉴定的两株菌株，第三支不接种，作为对照。接种后轻缓摇动试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡，将接种过和作为对照的试管放置培养，发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色，气体的产生可由试管中倒置的德汉式小管中有无气泡来证明。重