曼地亚红豆杉质量评价及提取新工艺、新剂型的研究与开发申报书

模拟移动床技术用核心分离系统后，产品的紫杉醇含量大于。

，紫杉醇，及其它紫杉烷类组分实现了，连续快速高效的分离。

酶解技术利用红豆杉中特有的紫杉烷类成分，成功的得到具有抗癌作用的紫杉醇及多烯紫杉醇，该项技术使得红豆杉中紫杉醇的收率得到很大的提高，最大限度的利用了红豆杉中这抗癌资源。

主要技术指标曼地亚红豆杉提取分离纯化方面完成包括紫杉醇在内的种以上紫杉烷类成分的提取分离纯化工作。

建立包括紫杉醇在内的种以上紫杉烷类成分的连续化系统化规模化纯化工艺。

得到包括紫杉醇在内的种以上紫杉烷标准品，用于检测等工艺研究。

完成总紫杉烷组分的提取分离纯化工作，总紫杉烷含量在以上。

质量评价体系可操作性强，指纹图谱能清晰地反应不同种类药材的质量差异及各有效组分的含量情况与提取有效成分种类相结合，建立紫杉烷类提取物指纹图谱。

脂质体凝胶剂含量形态观察粒径大小和分布包封率黏度表面电位可工业化生产。

六主要创新点及预期获得知识产权简况创新点综合利用多种提取纯化技术，大大缩短提取过程和时间，避免了紫杉醇在高温下转化为其它物质，提高了包括紫杉醇在内的多种紫杉烷类成分的提出率。

分离纯化新设施创新了模拟移动床技术特点为分离效率高，且填料和溶剂的用量小产品纯度高，适合工业化生产要求。

改变了紫杉醇的传统给药途径，增加了新的给药途径和适应症及新剂型，扩展了紫杉醇的应用范围。

预期获得知识产权申报个具有自主知识产权的提取纯化工艺专利申报国家专利包括新的适应症专利和新制剂专利七项目研究的技术路线提取技术路线红豆杉超声提取固相萃取除杂常规分离模拟移动床半合成或酶解模拟移动床或常规分离紫杉醇多烯紫杉醇紫杉烷类单体成分紫杉烷组分。

制剂技术路线资料检索，方案设计制剂工艺配比研究小试研究中试放大及稳定性考察动物药理毒理研究临床研究质量评价技术路线资料检索样品采集研究方法制定红豆杉样品提取分离紫杉醇及紫杉烷类化合物含量测定方法和高效液相色谱指纹图谱检测方法的建立方法学验证样品检测相应信息进行数字化处理绘制标准指纹图谱制定样品的农残重金属检测方法实验整体复核实验总结成果申报。

八实施进度初步计划查阅与本项目相关的国内外文献，设计本项目研究方案。

完成样品采集及对照品的购置工作。

以华源三药种植基地的曼地亚红豆杉为样本，对其中各有效组分进行提取分离纯化方法的研究初步建立红豆杉高效液相指纹图谱检测方法并对所建立的方法进行验证参照中药注射剂指纹图谱研究的技术要求制剂工艺配比的筛选。

分离纯化系统工艺的优化和改进采用所建立的指纹图谱方法对不同种属产地和采收期的红豆杉进行检测，得到各类型红豆杉的液相分析色图谱新制剂临床前动物药理毒理研究。

分离系统的试运行和参数优化采用计算机汇总数据对红豆杉液相色谱图谱进行分析，制定出标准的紫杉烷类化合物高效液相指纹图谱。

新制剂临床研究。

项目总体总结报告。

九项目预期目标与效果前景分析简况项目预期目标建立完善的红豆杉样品前处理方法，能快速完全地对紫杉醇和紫杉烷类化合物进行提取分离纯化得到种以上的紫杉烷类提取物及标准品。

通过收集不同品系产地采收期的曼地亚红豆杉样品，绘制各类红豆杉的指纹图谱建立完善的曼地亚红豆杉质量评价体系。

利用提取纯化不同阶段的提取物，研究制备新型制剂种。

项目预期效果通过该项目研究建立的紫杉烷类化合物指纹图谱及红豆杉质量评价体系，将广泛地应用于红豆杉质量评价和紫杉醇类制剂的质量控制，弥补了我国在紫杉醇质量研究方面的个空白，增加了我国紫杉醇类制剂的技术含量，大大提高我国紫杉醇类制剂的在国际市场上的竞争力。

通过本项目的研究，采用指纹图谱的方式来表征红豆杉中的紫杉烷类抗癌活性成分，它提供的有关质量的信息比单成分含量更为丰富和更有应用价值。

红豆杉中紫杉烷类化合物标准指纹图谱的建立将为生产企业及研究单位评价红豆杉的质量提供全面可靠的依据，同时也为以红豆杉为原料的中药新制剂的研究开发和质量标准的制定奠定基础。

优化的红豆杉的提取分离纯化工艺，实现紫杉醇的高效分离，同时为红豆杉中其它紫杉烷的利用提供了强有力的技术支持，使宝贵的红豆杉资源得到节约，从而创造巨大的经济效益。

预计可提高红豆杉中紫杉醇收率综合利用率仅我公司就可增加效益亿元降低紫杉醇制剂生产成本，扩大制剂原料来源，使其成为国内治疗癌症首选药物。

通过本项目研究，拟完成新型制剂研究个分离纯化紫杉烷类组分个预期申报专利个培养高层次科技人才人其中培养硕士研究生人，引进博士后人十环境能力建设利用该项目对中心的提取纯化制剂检测设施和装备进行全面提升，并利用该项目系统研究，进步提高中心的综合研究实力，并培养批高层次高素质的科研人才，重点加强以下设施和装备的建设提取分离设施模拟移动床台超声提取设备台制剂设备冷冻干燥机台质量检测设备液质联用台气相色谱台通过上述建设可行成年处理公斤紫杉醇中试提取分离制剂生产线条仪器设备明细如下单位元仪器设备名称来源价格新进仪器设备资金来源拨款自筹高效液相色谱原有气相色谱新进液质联用新进超声提取设备新进模拟移动床色谱新进冷冻干燥机新进合计资金情况表工程技术研究中心投资与申请资金情况中心总投资万元已完成投入万元投入来源及到位情况依托单位投入万元到位万主管部门投入万元国家财政投入万元省财政投入万元市财政投入万元银行贷款万元其他万元新申请财政专项资金的用途及预算合计万元其中科研开发项目投入万元中试及产业化项目投入万元环境条件投入万元其他投入万元其他万元支出预算万元调研培训费用设备购置费用能源材料费用公务业务费用验收鉴定费用环境条件改善其他费用设备购置明细设备名称型号数量单价金额用途气相农残检测液质质量评价超声提取立提取移动床分离纯化冻干机平干燥及制剂研究推荐意见依托单位推荐意见负责人签字公章年月日省直主管部门推荐意见负责人签字公章年月日地方科技财政部门推荐意见负责人签字公章年月日负责人签字公章年月日作提取紫杉醇的红豆杉之。

年生的曼地亚红豆杉叶子和树枝中紫杉醇含量与生长年天然红豆杉树皮的紫杉醇含量相当。

天然红豆杉包括国内种在内的全球个红豆杉品种，紫杉醇含量般在之间，而曼地亚红豆杉的紫杉醇含量则高达，是国内品种的倍。

曼地亚红豆杉植株各部分均含有紫杉醇，仅枝叶的含量就达，根系高达，这意味着曼地亚红豆杉可全株用于提取紫杉醇，植株利用率高，其综合经济价值更高。

红豆杉相关领域国内外发展形状与趋势红豆杉作为具有巨大经济效益和研究价值的药用植物，在国内外已大量的栽培，但其系统的质量评价及指纹图谱研究目前仍是空白。

在紫杉的含量测定方面的研究虽然很多，但大部分都集中测定紫杉醇的含量，而忽略了其他有效成分或可用做合成中间体的成分。

而本项目将建立同时测定多个成分的定量分析方法，实现多组分的含量控制。

紫杉醇的分离纯化工作开展较早，最早的分离工艺是年采用逆流分配色谱法，从太平洋红豆杉树皮中提取了紫杉醇，其历时两年，这种工艺十分烦琐，收率极低。

随着紫杉醇科学技术的不断进展，分离工艺也获得了很大的改进，收率大为提高，分离时间大大缩短。

国外由于占有定的资源优势，其提取分离方法较为先进，主要有固相萃取法超临界流体萃取法鲜法匀浆高效提取方法及高效液相色谱法超临界流体色谱法电泳色谱法等提取分离方法。

但这些工艺大都存在的缺点是收率低工艺流程长生产能力小，无法适应工业化生产等特点。

国内因受资源限制，目前仍处于经典溶媒萃取和色谱分离，且大部分提取方法只能应用于对树皮的提取，从枝叶中提取分离除杂仍停留在传统方法，特别是对曼地亚红豆杉中紫杉烷类和其它成分的分离尚未见报道。

因此开发新的高效特异性的分离方法，对于紫杉醇的提取纯化有重要意义。

目前以紫杉醇为原料作为抗癌药的制剂主要为注射剂和静脉输液，如紫杉醇注射液和多西紫杉醇注射液，目前国外已完成的和正在研究的制剂有紫杉醇注射液多西紫杉醇注射液紫杉醇粉针剂紫杉醇脂质体注射液注射用紫杉醇纳米粒纳米粒胶体注射液紫杉醇支架聚谷氨酸紫杉醇紫杉醇紫杉醇，维生素型紫杉醇乳剂微胶囊化紫杉醇紫杉醇吸入剂紫杉醇植入剂紫杉醇凝胶剂等多种制剂，国内已完成的和正在研究的制剂有紫杉醇注射液多西紫杉醇注射液紫杉醇粉针剂紫杉醇脂质体注射液注射用紫杉醇纳米粒以及注射用紫杉肽。

从国内外研发状况来看，国外紫杉类制剂的开发品种多，并且给药途径多样，除了注射给药外，正在开发的有外用制剂口服制剂以及吸入剂，而国内研发还停留在注射给药上，对口服给药以及局部外用透皮给药制剂的研发未见报道。

因此从制剂角度上来讲国内对紫杉类相关制剂的研发与国外还存在较大的差距。

二我省现有技术基础我省可做中药指纹图谱的研究的有沈阳药科大学中医研究院，中科院大化研究所和国药中心等几家，但都没有开展红豆杉指纹图谱研究鞍山科技大学和中科院大化研究所及国药中心开展了紫杉醇紫杉烷的提取分离纯化研究只有国药中心开展了紫杉醇紫杉烷提取及质量评价的部分工作。

三立题必要性曼地亚红豆杉基地目前国内约近十家，通过对各基地不同采收期生长环境植株的抽样，其结果显示紫杉醇含量和其它组分的批间差异非常大，显然单纯采用紫杉醇或几个化合物的含量来评价红豆杉的优劣是不合理的。

在寻求综合评价红豆杉质量的过程中，我们自然想到了指纹图谱技术。

虽然指纹图谱不能取代含量测定，但是对红豆杉而言它提供的有关质量的信息却比单成分紫杉醇的含量更为丰富和更有应用价值。

指纹图谱分析作为种鉴别中药真伪及评价质量致性和产品稳定性的年内发展成万株。

技术优势中心现已具有红豆杉提取纯化方面的大量经验，技术比较成熟。

在紫杉醇含量检测方面已经有整套可行稳定的高效液相检