遗传改良进程。图基因的扩增结构与重组载体基因的生物信息学分析蛋白质在线分析软件分析结果显示，蛋白的预测分子量为，等电点，不稳定系数，属于不稳定蛋白基因组中而且还能稳定表达。过氧化氢胁迫条件下，转基因烟草幼苗具有较高的发芽率。为了进步确定基因与氧化胁迫的关系，又对个月大的转基因烟草进行氧化胁迫，甲基紫精处理。结果表明，在正常生长条件下，转基因株系除了含量外，测定的其他各种生理指标均与野生型无显著差异，转基因株系中只有和叶绿素含量与野生型中的有显著差异而在氧化胁迫处理条件下，转基于烟草的抗氧化能力的提升进行二穗短柄草基因过度表达的研究遗传学论文米高粱小米黍蛋白的序列致性分别为和。而与拟南芥的的同源性最低，序列相似性仅为。采用邻位相连法构建进化树。如图所示，穗短柄草基因编码的氨基酸序列与早熟禾亚科的小麦大麦和黑麦属于同个进化支，亲缘关系最近，然后与其他禾本科植物聚为大支。摘要为了研究穗短柄草基因在转基因烟草中的功能，构与重组载体基因的生物信息学分析蛋白质在线分析软件分析结果显示，蛋白的预测分子量为，等电点，不稳定系数，属于不稳定蛋白。蛋白的亲水疏水性预测分析结果表明蛋白含有个碱性氨基酸残基和个酸性氨基酸残基，脂肪系数为，平均亲水系数为，因此，该蛋白很可能为种亲水蛋白。跨膜结果分析显示，蛋白无跨膜区，无信号肽序列，为和测序正确后，获得植物表达载体图，然后将该重组质粒转入农杆菌中，经菌落检测正确的再通过叶圆盘法转化烟草。转基因的烟草经卡那霉素筛选后共得抗性苗株，移栽后剩余株成活随机挑选株提取其和野生型烟草基因组的，其中以野生型烟草作为阴性对照进行鉴定。基因的烟草中有株扩增出预期大小致的目的条带，表明然后分别对质粒和改造的植物表达载体进行和双酶切目标片段回收与大肠杆菌转化，和酶切检测后阳性菌液送往苏州金唯智测序并提取质粒。测序成功的植物重组表达载体转入农杆菌感受态细胞中，检测正确的阳性菌株用于后续植物材料的转化。基因的生物信息学分析利用中的在线开放阅读框分析工具对农杆菌感受态细胞购自上海士锋生物科技有限公司试剂购自公司胶回收试剂盒和质粒提取试剂盒购自天根生化科技有限公司高保真酶限制性内切酶和连接酶购自公司载体为系统生物学研究院所保存引物合成与测序均在苏州金唯智完成。基因的克隆及植物表达载体构建将成熟饱满的穗短柄草种子剥皮后小心播种于含有层纱布与营养液的培养皿中，因烟草植株非生物胁迫处理分别在培养基上含有的培养基上萌发野生型和表达量较高的株转基因株系的种子，左右观察其表型。同时将转基因烟草的个转基因株系与野生型种子播种于培养基上发芽。待发芽左右，将长势致的转基因烟草和野生型烟草同时移栽到营养钵中，按时浇水。个月后对其进行模拟氧化胁迫的甲基紫精处理，处理后，测定过氧化氢酶过氧化物酶超氧化物歧化酶丙醛和叶绿素含量剂盒和质粒提取试剂盒购自天根生化科技有限公司高保真酶限制性内切酶和连接酶购自公司载体为系统生物学研究院所保存引物合成与测序均在苏州金唯智完成。基因的克隆及植物表达载体构建将成熟饱满的穗短柄草种子剥皮后小心播种于含有层纱布与营养液的培养皿中，并臵于培养室进行培养。取生长状态良好的穗短柄草幼苗，利用试剂对其总进行提取，按照康为杆菌转化，和酶切检测后阳性菌液送往苏州金唯智测序并提取质粒。测序成功的植物重组表达载体转入农杆菌感受态细胞中，检测正确的阳性菌株用于后续植物材料的转化。基因的生物信息学分析利用中的在线开放阅读框分析工具对测序得到的核酸序列进行开放阅读框分析利用预测蛋白的理化性基于烟草的抗氧化能力的提升进行二穗短柄草基因过度表达的研究遗传学论文臵于培养室进行培养。取生长状态良好的穗短柄草幼苗，利用试剂对其总进行提取，按照康为世纪公司的反转录试剂盒进行第链的合成。根据基因登录号核苷酸序列，利用软件设计条巢式引物和，对其进行扩增目的片段连接大肠杆菌转化与测序。测序正确的克隆提取质粒，并命名为出冷却后离心取上清在，波长处分别测定其吸光度值。丙醛含量的计算公式为提取液的总体积测定时用的体积样品质量。叶绿素的含量测定分别参照李飞鸿等的提取方法进行。每个品系试验重复次。材料和方法试验材料菌株与试剂穗短柄草和烟草材料为系统生物学研究院保存。大肠杆菌感受态细胞载体反转录试剂盒及实时荧光定量试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司回收目的片段，经菌落和测序正确后，获得植物表达载体图，然后将该重组质粒转入农杆菌中，经菌落检测正确的再通过叶圆盘法转化烟草。转基因的烟草经卡那霉素筛选后共得抗性苗株，移栽后剩余株成活随机挑选株提取其和野生型烟草基因组的，其中以野生型烟草作为阴性对照进行鉴定。基因的烟草中有株扩增出预期大小致的目的条带其中按照南京建成生物工程研究所的试剂盒操作说明书进行。丙醛含量测定参照和的方法进行。取野生型和转基因烟草正常生长和氧化处理条件下的少许叶片，用值磷酸缓冲液在研钵中研磨叶片，随后把研磨液转入离心管中，并用磷酸缓冲液多次冲洗研钵使其定容至高速离心后，取上清液对照为蒸馏水并加入的硫代巴比妥溶液摇匀后沸水浴中煮沸，然后取世纪公司的反转录试剂盒进行第链的合成。根据基因登录号核苷酸序列，利用软件设计条巢式引物和，对其进行扩增目的片段连接大肠杆菌转化与测序。测序正确的克隆提取质粒，并命名为。基于烟草的抗氧化能力的提升进行二穗短柄草基因过度表达的研究遗传学论文。转利用进行亚细胞定位预测利用进行保守结构域分析利用进行多序列比对并利用进行进化分析。材料和方法试验材料菌株与试剂穗短柄草和烟草材料为系统生物学研究院保存。大肠杆菌感受态细胞载体反转录试剂盒及实时荧光定量试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司农杆菌感受态细胞购自上海士锋生物科技有限公司试剂购自公司胶回收，表明基因已整合到烟草基因组中图。从初步筛选得到的阳性植株中随机选出株提取，以反转录获得为模板，利用进步检测，结果显示转基因的烟草有个株系能扩增出预期大小目的条带图，说明基因不仅整合到烟草基因组中而且还能稳定表达。然后分别对质粒和改造的植物表达载体进行和双酶切目标片段回收与大肠基于烟草的抗氧化能力的提升进行二穗短柄草基因过度表达的研究遗传学论文采用邻位相连法构建进化树。如图所示，穗短柄草基因编码的氨基酸序列与早熟禾亚科的小麦大麦和黑麦属于同个进化支，亲缘关系最近，然后与其他禾本科植物聚为大支。基于烟草的抗氧化能力的提升进行二穗短柄草基因过度表达的研究遗传学论文。植物重组表达载体的构建转基因烟草植株的获得与分子鉴定用和酶分别双酶切重组质粒改造的植物表达载体蛋白的亲水疏水性预测分析结果表明蛋白含有个碱性氨基酸残基和个酸性氨基酸残基，脂肪系数为，平均亲水系数为，因此，该蛋白很可能为种亲水蛋白。跨膜结果分析显示，蛋白无跨膜区，无信号肽序列，为非分泌蛋白。将基因编码的氨基酸序列在进行搜索查找其同源的蛋白序列，选取黑麦大麦小麦小米水稻筇竹慈竹玉米黍高粱个与其同源性较基因的烟草植株相对于野生型具有较高的过氧化氢酶过氧化物酶超氧化物歧化酶和叶绿素的含量和较低的丙醛和过氧化氢含量。这些结果表明，过表达基因增强了植物对氧化胁迫的耐受性。关键词穗短柄草氧化胁迫表达载体构建遗传学遗传转化穗短柄草是种与拟南芥有类似优势且与小麦大麦以及草坪草牧草的亲缘关系比水稻更近的新型模式植物，是冷季型禾本科早熟禾亚科中唯完成全基因克隆了该基因，并进行了生物信息学分析。该基因开放阅读框，编码个氨基酸，编码蛋白的分子量为，只含有个典型的结构域，属于超家族的家族。多序列比对与进化分析显示它与黑麦的亲缘关系较近。亚细胞定位分析表明，基因定位于细胞核。将其构建到植物表达载体上，并通过农杆菌介导法转入烟草中。和筛选鉴定显示基因不仅整合到烟分泌蛋白。将基因编码的氨基酸序列在进行搜索查找其同源的蛋白序列，选取黑麦大麦小麦小米水稻筇竹慈竹玉米黍高粱个与其同源性较高的蛋白序列以及模式植物拟南芥的序列进行多序列比对图，结果显示蛋白与黑麦大麦小麦和具有较高的相似性，序列致性分别为。其次与筇竹慈竹基因已整合到烟草基因组中图。从初步筛选得到的阳性植株中随机选出株提取，以反转录获得为模板，利用进步检测，结果显示转基因的烟草有个株系能扩增出预期大小目的条带图，说明基因不仅整合到烟草基因组中而且还能稳定表达。基于烟草的抗氧化能力的提升进行二穗短柄草基因过度表达的研究遗传学论文。图基因的扩增结对测序得到的核酸序列进行开放阅读框分析利用预测蛋白的理化性质利用进行亚细胞定位预测利用进行保守结构域分析利用进行多序列比对并利用进行进化分析。植物重组表达载体的构建转基因烟草植株的获得与分子鉴定用和酶分别双酶切重组质粒改造的植物表达载体，回收目的片段，经菌落