门细胞的检测信息。利用分析流式细胞术检测数据，分析各种细胞样本中巨核细胞在细胞中的比例，并根据活细胞总数计算总巨核细胞数量。采用软件进行。活细胞自动计数将各孔细胞收集至离心管中，取细胞悬液与等体积台盼蓝染色液混合，室温染色，取染色细胞到自动细胞计数板上，进行自动细胞计数。方法从小鼠股骨和胫骨取骨髓细胞，在血小板生成素及和干细胞因子或白介素和白介素联合诱导下，体外培养。然后用倒臵显微镜观察培养体系中的细胞生长情况，自动细胞计数仪检测细胞数量，流式细胞术分析培养体系中巨核细胞比例，并计算巨核细胞绝对数量。结果单因子或多因子联合诱导方法均能体外促进骨髓细胞分化成巨核细胞，轻微促进骨髓细胞分化成巨核细胞，和联合及和联合均显著促进骨髓细胞增殖和于和的联合诱导有显著提高。这表明，添加和可以抑制骨髓造血干祖细胞向非巨核细胞方向增殖和分化，能够进步促进巨核细胞生成和提高获得的巨核细胞数量及其纯度。在中药提取物及从中分离化合物的体外促血小板生成活性评价中，促进向巨核细胞分化是项重要的评价指标。由于向巨核细胞分化需要多种因子共同作用，如果仅仅加入中药提取物和化合物，巨核细胞很难增殖，从而也难以评价中药提取物和化合物的活性。如果仅加入诱导向巨核细胞分化，由于其作用太弱，也很难评价中药提取物和化合物的活性。本研究结果提示，和联合诱导或和联合诱导均能促进骨髓细胞分化成巨核细胞，可以用来评价中药分化成巨核细胞的骨髓细胞在体外诱导方法研究细胞学论文分化成巨核细胞。在文献报道中，巨核细胞可以由以及联合白介素，和白介素，等细胞因子来诱导分化，。可以作用于早期造血干细胞，促进造血干细胞增殖，同时也是促进红系巨核系祖细胞和巨核祖细胞分化为巨核细胞的必需因子。是的配体，对的造血干祖细胞均有刺激作用，可以促进造血干祖细胞增殖。和等细胞因子对造血干祖细胞的调节作用复杂，对巨核细胞生成都具有定的促进作用。本研究利用单独诱导巨核细胞生成，以观察其诱导巨核细胞生成的能力利用和联合诱导巨核细胞生成，以在促进造血干祖细胞增殖的达倍以上种细胞因子联合处理后，细胞数量也呈显著增加状态，增加约倍左右，但相对和联合处理，细胞增加更少些表。各种诱导条件处理的细胞经流式细胞术分析发现，不经细胞因子处理及单独处理细胞样本中，和显示主要为细胞碎片和联合处理细胞样本及种因子联合处理细胞样本中，和显示具有明显的存活细胞群体，存活细胞数量及其和特征有所不同图。通过设门分析细胞中和的表达发现，巨核细胞在细胞中比例差异较大，处理孔细胞中巨核细胞比例高于对照孔，和联合处理孔及种因子联合处理孔中巨核细胞后弃上清，并重复次最后加入流式染色缓冲液重悬细胞，尼龙膜过滤后进行上机检测。设臵上述染色方案的前向和侧向散射光电压值以及各种荧光染色的电压值，并调试好各荧光通道之间的荧光补偿收集各样本细胞的前侧向散射光及各种荧光染色信号在测定过程中，通过调整前侧向散射光设臵门，以去除细胞碎片，收集万个门细胞的检测信息。利用分析流式细胞术检测数据，分析各种细胞样本中巨核细胞在细胞中的比例，并根据活细胞总数计算总巨核细胞数量。采用软件进行统计分析，采用检验比较两组数据间差异，所有实验重复次以上，定量实验数据以平均数标准差表示，材料和方法细胞培养液胎牛血清胰蛋白酶青霉素和链霉素混合液均购自美国公司红细胞裂解液购自北京佰瑞达生物科技有限公司标记的大鼠抗小鼠抗体标记的大鼠抗小鼠抗体标记的大鼠抗小鼠抗体种抗体的同型对照抗体和氨基放线菌素死细胞染色液均购自美国公司大鼠抗小鼠抗体购自美国公司重组小鼠促血小板生成素，干细胞因子，白细胞介素，和白细胞介素，均购自美国公司牛血清白蛋白购自美国，再加等量的含胎牛血清的培养液终止裂解，室温离心，去上清利用胎牛血清的培养液调整细胞浓度为，然后接种到孔板，细胞悬液孔除对照孔不加任何细胞因子外，设立种不同刺激孔单细胞因子终浓度孔，双细胞因子终浓度和终浓度孔，以及终浓度终浓度终浓度和终浓度种细胞因子联合作用孔，各种处理各设臵个复孔，各孔加入相应细胞因子至以上终浓度，培养液总体积将细胞臵于培养箱中培养，半量更新培养液，并重新添加次细胞因子。分化成巨核细胞的骨髓细胞在体外诱导方法研究细胞学论文。目前，冉，屠鹏飞，朱枝祥体外诱导骨髓细胞分化成巨核细胞的方法学研究中国实验血液学杂志，。分化成巨核细胞的骨髓细胞在体外诱导方法研究细胞学论文。材料和方法细胞培养液胎牛血清胰蛋白酶青霉素和链霉素混合液均购自美国公司红细胞裂解液购自北京佰瑞达生物科技有限公司标记的大鼠抗小鼠抗体标记的大鼠抗小鼠抗体标记的大鼠抗小鼠抗体种抗体的同型对照抗体和氨基放线菌素死细胞染色液均购自美国公司大鼠抗小鼠抗体购自美国公司重组小鼠促血小板生成素，干细胞因子的巨核细胞总数显著增加。在和存在条件下，进步添加和，使巨核细胞比例进步提高，但是抑制了骨髓细胞增殖，不过巨核细胞总数相对于和的联合诱导有显著提高。这表明，添加和可以抑制骨髓造血干祖细胞向非巨核细胞方向增殖和分化，能够进步促进巨核细胞生成和提高获得的巨核细胞数量及其纯度。在中药提取物及从中分离化合物的体外促血小板生成活性评价中，促进向巨核细胞分化是项重要的评价指标。由于向巨核细胞分化需要多种因子共同作用，如果仅仅加入中药提取物和化合物，巨核细胞很难增殖，从而也难以评价中药提取物和化合物的活性。如果仅加入诱导向巨核细胞分化，由于其作用太弱，也很难评价中药巨核祖细胞红系巨核系祖细胞共同髓系祖细胞造血干祖细胞分化而来。为了获得尽量多的巨核细胞和提供药物评价的可操作性，本研究直接利用骨髓细胞来诱导分化成巨核细胞。在文献报道中，巨核细胞可以由以及联合白介素，和白介素，等细胞因子来诱导分化，。可以作用于早期造血干细胞，促进造血干细胞增殖，同时也是促进红系巨核系祖细胞和巨核祖细胞分化为巨核细胞的必需因子。是的配体，对的造血干祖细胞均有刺激作用，可以促进造血干祖细胞增殖。和等细胞因子对造血干祖细胞的调节作用复杂，对巨核细胞生成都具有定的促进作用，分化成巨核细胞的骨髓细胞在体外诱导方法研究细胞学论文床常用的促血小板生成药物，主要有促血小板生成素，和小分子受体激动剂，。这类药物虽然有较好疗效，但国外制药企业专利保护昂贵的价格及生物制剂服用的不便，严重制约了血小板减少症的治疗。在传统中药中，鸡血藤仙鹤草虎杖和阿胶等具有促血小板升高的疗效，但是这些中药中促血小板升高的活性物质及其作用机制还缺乏系统研究，严重制约了这些药物在血小板减少症中的应用。本研究将通过体外培养骨髓细胞，利用不同细胞因子组合诱导向巨核细胞分化，比较各种诱导方法对向巨核细胞分化的影响，以选择优化的骨髓细胞向巨核细胞分化方法用于中药及从中药提取分离化合物的促血小板作用筛选活性评价和作用机制研阿胶等具有促血小板升高的疗效，但是这些中药中促血小板升高的活性物质及其作用机制还缺乏系统研究，严重制约了这些药物在血小板减少症中的应用。本研究将通过体外培养骨髓细胞，利用不同细胞因子组合诱导向巨核细胞分化，比较各种诱导方法对向巨核细胞分化的影响，以选择优化的骨髓细胞向巨核细胞分化方法用于中药及从中药提取分离化合物的促血小板作用筛选活性评价和作用机制研究。骨髓细胞的制备和培养颈脱臼处死小鼠，乙醇水溶液浸泡小鼠全身后，超净台无菌取小鼠股骨和胫骨，利用注射器吸取含胎牛血清的培养液将骨腔内骨髓细胞冲到无菌离心管中，室温离心，去上清加红细胞裂解液重悬细胞的体外培养，只剩余约万个活细胞处理后细胞数量有所上升，但仅增加不到倍的数量和联合处理后，细胞数量显著增加，并增加达倍以上种细胞因子联合处理后，细胞数量也呈显著增加状态，增加约倍左右，但相对和联合处理，细胞增加更少些表。各种诱导条件处理的细胞经流式细胞术分析发现，不经细胞因子处理及单独处理细胞样本中，和显示主要为细胞碎片和联合处理细胞样本及种因子联合处理细胞样本中，和显示具有明显的存活细胞群体，存活细胞数量及其和特征有所不同图。通过设门分析细胞中和的表达发现白细胞介素，和白细胞介素，均购自美国公司牛血清白蛋白购自美国公司。氧化碳细胞培养箱购自日本洋公司倒臵荧光显微镜购自德国公司自动细胞计数仪购自美国公司流式细胞仪购自美国公司。目前，临床常用的促血小板生成药物，主要有促血小板生成素，和小分子受体激动剂，。这类药物虽然有较好疗效，但国外制药企业专利保护昂贵的价格及生物制剂服用的不便，严重制约了血小板减少症的治疗。在传统中药中，鸡血藤仙鹤草虎杖取物和化合物的活性。本研究结果提示，和联合诱导或和联合诱导均能促进骨髓细胞分化成巨核细胞，可以用来评价中药提取物和化合物的促进向巨核细胞分化的作用。特别是和联合诱导，只要中药提取物和化合物能够激活这种因子下游信号通路，就应该会进步促进巨核细胞和血小板形成。因此，本研究将利用和联合诱导生成巨核细胞用于后续的中药提取物和化合物的促血小板形成活性的筛选药效评价和机制研究。参考文献张蓓，胡丕丽，丘惠娟，等升板方治疗化疗后血小板减少的疗效观察癌症冯云云，王新华，岳伟中西医结合治疗小儿特发性血小板减少性紫癜疗效观察川中医李芸芊，。本研究利用单独诱导巨核细胞生成，以观察其诱导巨核细胞生成的能力利用和联合诱导巨核细胞生成，以在促进造血干祖细胞增殖的情况下，尽可能多的获得巨核细胞最后继续添加和这种诱导分化体系中经常加入的细胞因子，观察其对巨核细胞分化的影响。研究结果显示，相对于对照，