雏番鸭的肝脏和脾脏，接种于血平板上，在条件下培养后，挑取疑似菌落涂片，革兰氏染色镜检后，接种于普通琼脂平板上。再挑取单个菌落接种于麦康凯平板和普通琼脂平板上，培养，观察分离菌的生长特性。生化鉴定使用肠杆菌科细菌微量生化发酵管，按照伯杰氏细菌手册进行生化特性鉴定。图基因的扩增结果图分离菌株的基因系统进化树药敏结果药敏试验结果显示，分离菌株仅对丁胺卡那敏感，对庆大霉素和恩诺沙星中度敏感，对阿莫西林强力霉素卡那霉素新霉素等种抗不稳排浅绿或者灰白稀粪等。剖检时可见肝脏严重出血，肺脏喉头气管充血出血，肠道粘膜脱落，肾肿。本研究从送检的病死雏番鸭内脏中分离到株细菌，对其进行基因扩增生化鉴定药敏试验以及动物致病试验。综合鉴定，该菌为强耐药性和致病性的奇异变形杆菌。目前关于番鸭源奇异变形杆菌的研究报道较少。本研究通过相关毒力基因检测分析，了解其毒力基因型，旨在确定引起此次雏番鸭暴发死亡的病原，以便开展更有效的防控工作，同时为番鸭源奇异变形杆菌临床诊断临床用药及遗传变异研究提供参考。材料与方法主要实验材料病料样品来源于年月安有关株番鸭源奇异变形杆菌毒力基因研究与分离鉴定病毒学论文体系为，反应条件变性变性，延伸，退火，个循环延伸。通过琼脂糖凝胶电泳鉴定。按照胶回收试剂盒的说明书回收纯化产物，连接至载体，转化感受态细胞，选择阳性克隆，提取质粒送至南京擎科生物科技有限公司测序。将测序成功的基因序列运用程序进行检索，选取株核苷酸同源性较高的序列，采用与测序结果进行同源性分析，运用软件进行多序列比对分析，使用的邻接法构建系统发育树。毒力相关基因的扩增及序列分析参照文献，设死雏番鸭内脏中分离到株细菌，对其进行基因扩增生化鉴定药敏试验以及动物致病试验。综合鉴定，该菌为强耐药性和致病性的奇异变形杆菌。目前关于番鸭源奇异变形杆菌的研究报道较少。本研究通过相关毒力基因检测分析，了解其毒力基因型，旨在确定引起此次雏番鸭暴发死亡的病原，以便开展更有效的防控工作，同时为番鸭源奇异变形杆菌临床诊断临床用药及遗传变异研究提供参考。材料与方法主要实验材料病料样品来源于年月安徽省凤阳县番鸭养殖场送检的日龄病死番鸭。细菌的药敏纸片购自杭州微生物试剂有限公司酵母浸粉胰蛋白胨麦康凯琼基因与美国株同源性分别为和，系统发育树显示基因和基因与美国株均在同分支，且基因与美国株在同分支，而基因与美国分离的两株参考株同源性最低，距离最远。基因与挑选的株参考菌株所对应的基因序列同源性，系统发育树显示，其与瑞典株形成簇，并与意大利株处于同分支，同源性均高达，而与美国株处在两个不同的分支，距离较远，同源性最低。进化树分析显示，分离菌株与参考菌株对应毒力基因的同源性在，且进化树都分为两大分支，表明株与参考菌株间存在定的差异性，这可能与不同的血清型和图基因的扩增结果图分离菌株的基因系统进化树药敏结果药敏试验结果显示，分离菌株仅对丁胺卡那敏感，对庆大霉素和恩诺沙星中度敏感，对阿莫西林强力霉素卡那霉素新霉素等种抗生素均不敏感表。表明具有多重耐药性。表分离菌株的药敏试验结果毒力相关基因的扩增及序列分析利用特异性引物对分离菌株的种毒力基因进行扩增，经凝胶电泳显示，扩增片段分别为，与预期结果相符图。菌株的奇异变形杆菌的分离鉴定及其毒力基因分析中国动物传染病学报，基金国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽农业大学稳定和引进人才科研项目安徽农业大学大学生科技创新基金项目。图分离菌的形态特征表引物序列及扩增条件导出到生化鉴定结果分离菌的生化鉴定结果显示，分离菌株发酵葡萄糖，产酸产气尿素硫化氢明胶及试验阳性吲哚叶苷试验阴性不发酵麦芽糖乳糖蔗糖山梨醇和卫矛醇。初步判定该分离菌为奇异变形杆菌，命名为株。基因的扩增及遗传进化分析以提取细菌为模板扩增分况有关。本研究也发现同株菌对同类抗生素出现了不同敏感性的问题，符合这特征。由于人和动物携带该菌机率高，当机体抵抗力下降时，可以使人和动物感染，防控难度较大，因此加强对该病原菌的防控及毒力相关基因研究显得十分重要。本研究通过分离鉴定药敏检测及毒力基因分析等为番鸭源奇异变形杆菌的临床诊断临床用药及遗传变异研究提供参考。参考文献刘燕云，柴家前奇异变形杆菌研究进展中国兽医学报，任梅渗，王印，杨泽晓，等猪源奇异变形杆菌的分离鉴定与生物学分析中国人兽共患病学报，杨巧玲，高健，罗立平，等犬源性奇异变形杆菌的毒力碱基缺失鹅源和番鸭源的奇异变形杆菌均被检测出种毒力基因，且部分毒力基因和都存在不同程度的变异，均具备较强的致病力。由于先前的报道并未系统性的比较毒力基因携带及变异情况与菌株毒力强弱的关系，因此我们只能推测毒力基因携带及变异情况与菌株的致病力是具有定的相关性的，而对毒力特征的掌握可为奇异变形杆菌的致病性传播性提供宝贵的参考以及为后续防控奠定定的基础。本研究中的药敏结果与王豪举等从病羊脏器分离到的株奇异变形杆菌耐药性结果相近，即奇异变形杆菌对丁胺卡那霉素敏感，对喹诺酮类的异变形杆菌的同源性达以上，进步证实分离菌为奇异变形杆菌，同源性比对和进化树结果显示和个代表菌株的同源性为。进化树中分离菌株与日本株形成簇，并与美国株处于相对独立的遗传分支，亲缘关系较近，但与印度株河南株北京株距离很远，这株参考株处于独立的遗传分支，其余菌株位于同大分支。表明株奇异变形杆菌或许由于在地理位臵上分布广，没有展现明显的地域特异性或物种特异性。有研究显示，羊源和虎源奇异变形杆菌的系统发育树分析也得出相似结论，。笔者根据已报道的基因序列设计奇异变形杆菌的有关株番鸭源奇异变形杆菌毒力基因研究与分离鉴定病毒学论文离菌的基因。结果显示，扩增出条约的特异性条带，与预期结果致图，测序结果显示其大小为。将测序获得的基因序列使用中的进行检索，结果与奇异变形杆菌的同源性达以上，挑选株核苷酸同源性较高的参考菌株进行同源性分析和系统发育分析，结果显示分离株与日本株和美国株的同源性均为系统发育树显示分离株与日本株亲缘关系较近，形成簇，并且与美国株处于同分支图，可进步证明分离株为奇异变形杆菌。有关株番鸭源奇异变形杆菌毒力基因研究与分离鉴定病毒学论文俞慕华株奇异变形杆菌耐药分析河南预防医学杂志，郭翠平，马明杰，刘建民，等山东省禽源大肠杆菌中超广谱内酰胺酶的基因型检测中国动物传染病学报，陶胜来临床分离奇异变形杆菌的耐药性及分子流行病学研究合肥安徽医科大学，杨立军，韩先干，尹会方，等福建省龙岩市禽致病性大肠杆菌的血清型毒力因子及耐药研究中国动物传染病学报，刘晓丹，刘宝，胡智成，等阴沟肠杆菌质粒介导氨基糖苷类耐药基因检测及同源性分析中国抗生素杂志，俞赵荣，杨侃侃，王元红，张谦，苏莉，鲁智敏，张学琪，刘自敏，李传峰，刘光清，王勇，李永东株番鸭蔗糖山梨醇和卫矛醇。初步判定该分离菌为奇异变形杆菌，命名为株。基因的扩增及遗传进化分析以提取细菌为模板扩增分离菌的基因。结果显示，扩增出条约的特异性条带，与预期结果致图，测序结果显示其大小为。将测序获得的基因序列使用中的进行检索，结果与奇异变形杆菌的同源性达以上，挑选株核苷酸同源性较高的参考菌株进行同源性分析和系统发育分析，结果显示分离株与日本株和美国株的同源性均为系统发育树显示分离株与日本株亲缘关系较近，形成簇试验中国兽医杂志，朱明华，朱瑞良，马荣德，等鸡奇异变形杆菌的分离鉴定和基因序列测定与系统进化分析中国兽医学报，陈曦，王远微，王永，等山羊腹泻粪便中奇异变形杆菌的分离鉴定及系统发育分析中国畜牧兽医，范克伟，余佳，杨守深，等华南虎源奇异变形杆菌的分离鉴定及其系统发育分析中国兽医科学，尹有勤，马德慧，李岩松，等鹅源奇异变形杆菌的分离鉴定及毒力基因检测微生物学通报，王豪举，倪莉，杨红军，等山羊奇异变形杆菌的分离鉴定及和基因的分析中国兽医学报，黄锐敏，陈辉，氟罗沙星和环丙沙星青霉素类的青霉素和阿莫西林均产生不同程度的耐药而黄锐敏等从食物中毒分离到的株奇异变形杆菌对环丙沙星敏感，对头孢拉啶产生耐药说明不同来源的奇异变形杆菌对抗生素的敏感性存在差异，并且存在多重耐药性。有研究显示产生多重耐药性的原因可能与奇异变形杆菌携带编码内酰胺酶基因有关，其耐药机制有待进步研究，。刘晓丹等对氨基糖苷类的菌株进行检测，结果显示株氨基糖苷类耐药菌株中有株对阿米卡星耐药，株对庆大霉素耐药，株对妥布霉素耐药，发现同株菌对同类抗生素出现不同敏感性的问题，这可能与耐药基因的携带种毒力基因引物，通过扩增和毒力基因序列分析研究分离菌毒力基因携带及变异情况。结果显示，种毒力基因在分离菌株中均被检测到，氨基酸序列分析显示基因均未发生突变变异，基因序列存在少部分的碱基突变。同时，尹有勤等也对鹅源奇异变形杆菌的种毒力基因氨基酸分别进行分析，发现基因均未检出突变变异，和基因存在少部分碱基点突变并且与美国株处于同分支图，可进步证明分离株为奇异变形杆菌。讨论奇异变形杆菌是种重要的人兽共患的条件性致病菌，可对畜禽养殖业造成了巨大经济损失。目前，国内不断有奇异变形杆菌感染动物致死的报道，本研究是安徽首例番鸭感染奇异变形杆菌致死的报道。由奇异变形杆菌引起的发病率和病死率逐年增加，防控形势十分严峻，因此加强对该菌的防治和管控显得尤为重要。本研究在依据细菌的菌落形态生长特性生化特征对分离菌进行细菌分类鉴定的基础上，采用基因序列同源性分析进行细菌的分子鉴定。检索表明，分离菌与奇有关株番鸭源奇异变形杆菌毒力基因研究与分离鉴定病毒学论文所对应的基因序列同源性，系统发育树显示，其