壤肥力降低，生态环境恶化，产品质量下降等问题。大多数重金属镉铬铅等在低浓度时对生物体具有很高的毒性，在环境中不易被降解，能通过食物链在生物体内累积并危害其健康。芽孢杆菌内产芽孢，抗逆性强，是广泛存在自然界中的非致病细菌，对人畜及环境安全无害，对多种病原菌均有抑培养基对菌株进行液体发酵培养后，测定发酵液的值为，显著高于正交试验中的种组合，说明该优化培养基能显著提高菌株生物量。图氮源及其浓度对菌株生长的影响图无机盐及其浓度对菌株生长的影响注图中不同字母表示差异在水平具有统计学意义。材料与方法试验材料菌种和质粒菌株由海南大学热带农林学院微生物实验室从海南儋州分离并保存。大肠杆菌感受态菌株和载体均购自公司。主要试剂和仪器凝胶回收纯化试剂盒反应用的各种试剂均购自大连公司日本提取用试剂盒购自天根生化科技北京有限公司。基础培养基蛋白胨酵母提取物氯化钠。全自动生物显微镜，广东省中科进口有限公司德国紫外分光光度计新世纪，北京普析通用仪器有限责淀粉芽孢杆菌摇瓶发酵条件优化农药，洪鹏，安国栋，胡美英，等解淀粉芽孢杆菌发酵条件优化中国生物防治学报，刘宁，郭庆港，安海，等番茄灰霉病生防细菌的鉴定及发酵条件的优化中国农业科技导报，郭龙涛，邱思鑫，蔡学清，等内生解淀粉芽孢杆菌液体发酵条件的研究热带作物学报，魏立娟，郭海，崔凌霄，等高寒草地矮生嵩草内生解淀粉芽胞杆菌的发酵条件优化植物保护，魏娇洋，冯龙，李亚宁，等内生解淀粉芽孢杆菌发酵条件的优化北方园艺，赵晓燕，杨欢，陈建刚，等株烟草青枯病生防菌的筛选鉴定及其发酵优化湖北农业科学，刘文波，熊燕红，秦春秀，等解淀粉芽孢杆菌的培养基优化及抑菌活性中国植保导刊，符可芯，杨叶，曾耿狄热带土壤中解淀粉芽孢杆菌的鉴定及发酵条件优化中国农业科技导解淀粉芽孢杆菌的发酵条件优化与鉴定分析微生物学论文科学学会年学术年会论文集海口，陈贵英，李维，陈顺德，等环境铜污染影响及修复的研究现状综述绿色科技，刘国红，林营志，林乃铨，等芽胞杆菌分类研究进展福建农业学报，刘红娟，党志，张慧，等蜡状芽孢杆菌抗重金属性能及对镉的累积农业环境科学学报，康薇，罗闻真，瞿颖，等株耐铜细菌的鉴定及其铜吸附能力湖北理工学院学报，郜雅静，李建华，靳东升，等重金属污染土壤的微生物修复技术探讨山西农业科学，张丽，张玉歌，顾燕，等微生物法修复重金属污染土壤的应用及展望广东化工，东秀珠，蔡妙英常见细菌系统鉴定手册北京科学出版社，瞿佳，赵玲侠，孙晓宇，等株抗铅细菌的分离鉴定与抗铅性能研究西北农业学报，曹凤明，杨小红，马鸣超，等枯草芽孢杆菌近缘种群鉴定方法研究进展微生物学通报，张瑞福，颜春荣，张种量为解淀粉芽孢杆菌的最佳接种量。魏立娟等以接种量为解淀粉芽孢杆菌菌株的最佳接种量。与前人研究结果不同，菌株的最佳接种量为，说明菌株对培养条件的要求较低，在大规模发酵过程中可降低成本。菌株的生长量随着转速的升高而成先上升后下降的趋势，与魏娇洋等研究结果致。在碳源优化结果中，菌株以麦芽糖为碳源时生物量最高，蔗糖次之。两者的生物量差异不显著，麦芽糖的市场价较高，选取蔗糖为菌株的最适碳源。与赵晓燕等研究解淀粉芽孢杆菌的最佳碳源为玉米淀粉不同，菌株以玉米淀粉为碳源时的生物量最低，可能是由菌株间的生物学特性差异所致。在氮源优化结果中，菌株以等无机氮源为培养基氮源时菌株基本不生长，与刘文波等研究结果致。在单有机氮源中，菌麦幼苗遭受的镉胁迫具有缓解作用。目前用于重金属污染修复的芽孢杆菌主要有枯草芽孢杆菌巨大芽孢杆菌蜡状芽孢杆菌胶质芽孢杆菌等。本课题组在前期研究中分离到株对具有良好富集作用的细菌菌株，通过形态观察生理生化试验以及同源性分析，确定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。为了提高菌株的生物量及找出其最适培养条件，采用单因素试验和正交试验对菌株的培养条件和培养基组分进行优化，为该菌在土壤修复中的进步研究奠定基础。大多数研究认为芽孢杆菌属的最佳发酵在左右，解淀粉芽孢杆菌的最适初始为，短小芽孢杆菌的最佳初始为，枯草芽孢杆菌的最适初始为，解淀粉芽孢杆菌最适培养为，解淀粉芽孢杆菌的最佳初始为。与前人研究结果不同，本研究中菌株的最适初始为确定培养基的最佳氮源之后，改变基础培养基中最佳氮源的浓度，碳源和无机盐组分不变，来进步研究不同浓度的氮源对菌株生长的影响，每个处理重复次。无机盐及其浓度分别以的作为培养基中的无机盐，以不添加无机盐为对照，其他条件和测定方法同。确定培养基的最佳无机盐之后，改变基础培养基中最佳无机盐的浓度，碳源和氮源组分不变，来进步研究不同浓度的无机盐对菌株生长的影响，每个处理重复次。正交试验设计以单因素试验中筛选出的蔗糖为碳源，酵母粉和蛋白胨为氮源，为无机盐，根据正交表进行因素水平的正交试验表，获得菌株生长的最优培养基组合，并验证优化培养基组合对菌株生物量的提高效果。数据统计与分析采用软件对数据进行统计分析，用软件作图。表培养基各组分配比优化株生物量的差异趋于平稳，以接种量处理时，菌株的生物量最高，显著高于其他接种量，因此最佳接种量为。图接种量对菌株生长的影响注图中不同字母表示差异在水平具有统计学意义。转速对菌株生长的影响如图所示，转速在之间菌株均可以正常生长。随着转速的增加，菌株的生物量呈先上升后下降的趋势。转速为时，菌株的生物量与其他转速无显著性差异，为了节约成本，以为最适转速。装液量对菌株生长的影响如图所示，随着装液量的增加，菌株的生物量呈下降趋势，试验结果表明，菌株发酵的最佳摇瓶装液量为摇瓶中装液，即摇瓶中最佳装液量为。解淀粉芽孢杆菌的发酵条件优化与鉴定分析微生物学论文。装液量将培养基调至最适，用的锥形瓶依次装有培养液，按最适接种量接种，在内生解淀粉芽孢杆菌发酵条件的优化北方园艺，赵晓燕，杨欢，陈建刚，等株烟草青枯病生防菌的筛选鉴定及其发酵优化湖北农业科学，刘文波，熊燕红，秦春秀，等解淀粉芽孢杆菌的培养基优化及抑菌活性中国植保导刊，符可芯，杨叶，曾耿狄热带土壤中解淀粉芽孢杆菌的鉴定及发酵条件优化中国农业科技导报，基金现代农业产业技术体系建设专项年海南省普通高等学校研究生创新科研课题项目。解淀粉芽孢杆菌的发酵条件优化与鉴定分析微生物学论文。确定培养基的最佳氮源之后，改变基础培养基中最佳氮源的浓度，碳源和无机盐组分不变，来进步研究不同浓度的氮源对菌株生长的影响，每个处理重复次。无机盐及其浓度分别以的作为培养基中的无机盐，以不添加无机盐为对，张丽，张玉歌，顾燕，等微生物法修复重金属污染土壤的应用及展望广东化工，东秀珠，蔡妙英常见细菌系统鉴定手册北京科学出版社，瞿佳，赵玲侠，孙晓宇，等株抗铅细菌的分离鉴定与抗铅性能研究西北农业学报，曹凤明，杨小红，马鸣超，等枯草芽孢杆菌近缘种群鉴定方法研究进展微生物学通报，张瑞福，颜春荣，张楠，等微生物肥料研究及其在耕地质量提升中的应用前景中国农业科技导报，汪远，詹儒林，何红，等红树内生细菌菌株的抗菌物质及对采后芒果炭疽病的防效中国生物防治学报，杨定祥，林巧玲，卢乃会，等拮抗辣椒疫霉菌海洋细菌菌株的筛选鉴定及其防病促生作用微生物学通报，庞亚琴，任彩婷，徐秋曼解淀粉芽孢杆菌对镉胁迫下小麦幼苗生长的影响天津师范大学学报自然科学版，马佳，李颖，胡栋，等芽胞杆菌生物防取蔗糖为菌株的最适碳源。与赵晓燕等研究解淀粉芽孢杆菌的最佳碳源为玉米淀粉不同，菌株以玉米淀粉为碳源时的生物量最低，可能是由菌株间的生物学特性差异所致。在氮源优化结果中，菌株以等无机氮源为培养基氮源时菌株基本不生长，与刘文波等研究结果致。在单有机氮源中，菌株以酵母粉为氮源时生物量最高，牛肉膏次之，最后是胰蛋白胨。在复合氮源中，以酵母粉胰蛋白胨组合为氮源时菌株的生物量最高，其次是牛肉膏胰蛋白胨组合，最后是酵母粉胰蛋白胨组合。因此推测胰蛋白胨在菌株的发酵过程中的主要作用是提供生长因子，其具体作用需进步研究。本研究鉴定的解淀粉芽孢杆菌菌株对具有良好的富集作用，可开发为铜污染土壤的修复菌种。为了使菌株土壤环境中可以稳定生存及繁殖解淀粉芽孢杆菌的发酵条件优化与鉴定分析微生物学论文最适温度最适转速的条件下振荡培养，每个处理次重复，测定值。培养基成分优化选用培养基作为基础培养基，进行培养基成分优化的单因素筛选试验。碳源及其浓度分别添加的葡萄糖玉米淀粉马铃薯淀粉麦芽糖蔗糖作为培养基中的碳源，以不加碳源为对照，将上述处理的培养基调至，装液量为锥形瓶容量为，灭菌。以的接种量接种至锥形瓶中，臵于振荡培养，每个处理次重复，测定值。确定培养基的最佳碳源之后，改变基础培养基中最佳碳源的浓度，氮源和无机盐组分不变，来进步研究不同浓度的碳源对菌株生长的影响，每个处理重复次。氮源及其浓度分别添加的牛肉浸膏胰蛋白胨酵母粉酵母粉胰蛋白胨两种氮源的比例为∶等氮源，替换培养基中的氮源，以不加氮源为对照，其他条件和测定方法玉米淀粉马铃薯淀粉麦芽糖蔗糖作为培养基中的碳源，以不加碳源为对照，将上述处理的培养基调至，装液量为锥形瓶容量为，灭菌。以的接种量接种至锥形瓶中，臵于振荡培养，每个处理次重复，测定值。确定培养基的最佳碳源之后，改变基础培养基中最佳碳源的浓度，氮源和无机盐组分不变，来进步研究不同浓度的碳源对菌株生长的影响，每个处理重复次。氮源及其浓度分别添加的牛肉浸膏胰蛋白胨酵母粉酵母粉胰蛋白胨两种氮源的比例为∶等氮源，替换培养基中的氮源，以不加氮源为对照，其他条件和测定方法同。图温度对菌株生长的影响注图中不同字母表示差异在水平具有统计学意义。接种量对菌株生长的影响由图可知