层分化，而内皮细胞则来源于中胚层。据此，作者又检测了中胚层和内胚层标记基因的表达变化，结果发现诱导分化前期猪诱导多能性干细胞的中胚层标记基因和的表达量同时上调，表明猪诱导多能性干细胞在原条标记基因激活后开始向中胚层分化。是种受体酪氨酸激酶，也叫血管内皮生长因子受体，是侧板中胚层的标记基因，其特异性表达是侧板中胚层分化为内皮的基础。在很多研究中作为内皮祖细胞或内皮细胞的标记基因用于监测细胞是否向侧板中胚层分化，。研究表明，人胚胎干细胞向内皮细胞分化过程中，添加血管内皮生长因子后的表达量明显上调，而在添加血管内细胞系中不能被重复，。图在诱导分化前期猪诱导多能性干细胞和人胚胎干细胞的谱系特异性基因的表达图猪诱导多能性干细胞和人胚胎干细胞定向诱导后内皮细胞标记基因的表达图注图中代表不同组之间差异有显著性意义图流式细胞术检测猪诱导多能性干细胞和人胚胎干细胞定向诱导分化后的阳性细胞比率图中展示的是代表性结果图免疫荧光检测血管内皮细胞标记基因的表达标尺为图注猪永生化主动脉血管内皮细胞作为猪诱导多能性干细胞来源内皮细胞的阳性对照人静脉血管内皮细胞作为人胚胎干细胞来源内皮细胞的阳性对照图猪诱导多能性干细胞来源内皮细胞和人胚胎干细胞来源内皮细胞的功能学检测标尺为图注猪诱导多能性干细胞来源内皮细胞和有关诱导多能性细胞向血管内皮细胞定向分化体系的研究细胞学论文蛋白试剂盒，检测其低密度脂蛋白的吸收能力。细胞培养液中添加终质量浓度为的，于培养后更换培养液，显微镜下检测细胞是否呈现红色荧光，以此证明细胞是否具有吸收低密度脂蛋白的能力。有关诱导多能性细胞向血管内皮细胞定向分化体系的研究细胞学论文。综上所述，猪诱导多能性干细胞和人胚胎干细胞经过定向诱导分化得到的细胞不仅具有内皮细胞的形态学特点基因表达模式，还具有内皮细胞的功能特征。讨论许多心血管疾病的主要成因是血管内皮细胞发生了不可修复的损伤，极大地影响了人类健康细胞移植被认为是最有前景的治疗方法。在猪这种器官大小和生理特征与人类似的模式动物上开展相关研究，对于最终利用细胞和清洗次，每次，加入清洗液稀释的抗在孵育，清洗液清洗次，加入的，货号在避光条件下染核，最后加入防荧光猝灭剂封固，在显微镜下观察。流式分析在定向诱导的第天，使用胰蛋白酶消化贴壁细胞并重悬于，货号中。细胞计数后，根据厂商提供的操作流程，将抗体和猪诱导多能性干细胞在室温孵育和人胚胎干细胞在室温孵育，然后特异性基因的表达分析采用单层细胞培养法将猪诱导多能性干细胞和人胚胎干细胞向内皮细胞定向诱导分化，分化分为个阶段，第阶段第天，干细胞向中胚层诱导分化第阶段第天，中胚层向血管内皮诱导分化第阶段第天，内皮细胞状态的稳定。在诱导分化的第阶段，采用方法检测猪诱导多能性干细胞和人胚胎干细胞诱导后的胚层谱系特异性基因表达。结果发现，对于原条期标记基因和，猪诱导多能性干细胞在诱导第天上调，在第天迅速下降，见图，人胚胎干细胞与猪诱导多能性干细胞类似，但基因表达水平变化幅度更大，见图纵坐标分别为百级和千级对于中胚层标记基因和，猪诱导多能性干细胞在诱导第天持续上调，见图，而人目前，人和小鼠的血管内皮细胞培养及诱导分化体系已经比较成熟。干细胞定向分化为内皮细胞的方法主要有基质细胞共培养法拟胚体分化法以及单层细胞分化法等种方法。年，等采用基质细胞共培养法与小鼠骨髓间充质细胞共培养，将人诱导多能性干细胞诱导分化为内皮细胞。基质细胞共培养法效率极低，而且获得的细胞不纯。年，等采用拟胚体分化法，将胚胎干细胞诱导为拟胚体，然后添加血管内皮生长因子诱导其分化为内皮细胞。拟胚体分化法实验周期较长，诱导效率低，通常只有左右，。年，等采用单层细胞分化法，在包被的培养板上使用不含碱性成纤维生长因子的培养基诱导细胞分化，几天后更换为内皮细胞培养液继续培养，最终通过流式分选获得的胚层标记基因的表达，对流式分选后获得的血管内皮细胞进行鉴定。结果与结论通过无血清单层细胞诱导法从猪诱导多能性干细胞定向诱导分化获得的内皮细胞具有与猪永生化主动脉血管内皮细胞类似的基因表达模式及生物学功能能够吸收低密度脂蛋白并在上形成微血管样结构该诱导体系下，猪诱导多能性干细胞的分化效率高于人胚胎干细胞的分化效率，这可能与诱导过程中种细胞谱系基因表达模式上的差异相关。关键词人胚胎干细胞分化干细胞猪细胞学血管内皮细胞诱导多能性干细胞文章快速阅读文题释义单层细胞诱导内皮细胞分化法在基质包被的培养板上单层培养干细胞，并且在不同的时间点将不同的化学分子或细胞因子添加到培养液中对细胞进行处理，促使细胞向中胚层分化后再进步分胞移植治疗方面，使用自体来源的诱导多能性干细胞进行移植治疗，既可避免异体移植引起的免疫排斥反应，又可回避使用人胚胎干细胞的伦理问题。材料细胞猪诱导多能性干细胞为作者所在实验室现存的细胞猪永生化主动脉血管内皮细胞购买于爱必梦生物技术有限公司，货号人胚胎干细胞及人静脉血管内皮细胞由苏州大学心血管病研究所胡士军教授提供小鼠胎儿成纤维细胞由哈尔滨医科大学雷蕾教授提供。细胞培养液培养液由非必须氨基酸人源白血病抑制因子碱性成纤维生长因子和青霉素链霉素，货号配制而成。人多潜能干细胞培养对猪诱导多能性干细胞和人胚胎干细胞进行单层细胞诱导分化，使干细胞经历个分化阶段最终成为血管内皮细胞，检测并比较分化过程中种干细胞的胚层标记基因的表达，对流式分选后获得的血管内皮细胞进行鉴定。结果与结论通过无血清单层细胞诱导法从猪诱导多能性干细胞定向诱导分化获得的内皮细胞具有与猪永生化主动脉血管内皮细胞类似的基因表达模式及生物学功能能够吸收低密度脂蛋白并在上形成微血管样结构该诱导体系下，猪诱导多能性干细胞的分化效率高于人胚胎干细胞的分化效率，这可能与诱导过程中种细胞谱系基因表达模式上的差异相关。关键词人胚胎干细胞分化干细胞猪细胞学血管内皮细胞诱导多能性干细胞文章快速阅读文题释义单层细胞诱导内皮细胞分化法在基质包被的。目前，人和小鼠的血管内皮细胞培养及诱导分化体系已经比较成熟。干细胞定向分化为内皮细胞的方法主要有基质细胞共培养法拟胚体分化法以及单层细胞分化法等种方法。年，等采用基质细胞共培养法与小鼠骨髓间充质细胞共培养，将人诱导多能性干细胞诱导分化为内皮细胞。基质细胞共培养法效率极低，而且获得的细胞不纯。年，等采用拟胚体分化法，将胚胎干细胞诱导为拟胚体，然后添加血管内皮生长因子诱导其分化为内皮细胞。拟胚体分化法实验周期较长，诱导效率低，通常只有左右，。年，等采用单层细胞分化法，在包被的培养板上使用不含碱性成纤维生长因子的培养基诱导细胞分化，几天后更换为内皮细胞培养液继续培养，最终通过流式分选有关诱导多能性细胞向血管内皮细胞定向分化体系的研究细胞学论文化为内皮谱系。内皮细胞是指排列在血管或淋巴管内表面的单层细胞，其中血管内表面的内皮细胞称为血管内皮细胞。人体血管内皮细胞功能障碍或丧失功能，通常会引起动脉粥样硬化，与心血管疾病的风险成正相关。内皮细胞是指排列在血管或淋巴管内表面的单层细胞，其中血管内表面的内皮细胞称为血管内皮细胞。人体血管内皮细胞功能障碍或丧失功能，通常会引起动脉粥样硬化，与心血管疾病的风险成正相关。诱导多能性干细胞是种新型的多能性干细胞，它具有和胚胎干细胞类似的特征，能够快速增殖的同时具有分化为多种细胞类型的能力。更重要的是，在干细胞移植治疗方面，使用自体来源的诱导多能性干细胞进行移植治疗，既可避免异体移植引起的免疫排斥反应，又可回避使用人胚胎干细胞的伦理问，货号上，传代时使用，∶接种。人静脉血管内皮细胞和猪永生化主动脉血管内皮细胞使用培养液培养，传代时使用胰蛋白酶消化，∶接种。摘要背景诱导多能性干细胞是种新型的干细胞来源，具有多向分化潜能。猪作为人类心血管及代谢性疾病研究的良好模型，对其多能性细胞向血管内皮细胞定向分化体系的建立，将为创建心血管疾病模型提供保障。目的建立种无血清单层诱导分化方法，使猪诱导多能性干细胞定向分化为阳性血管内皮细胞，并对获得的内皮细胞进行鉴定。方法使用骨形态发生蛋白碱性成纤维生长因子血管内皮生长因子等对猪诱导多能性干细胞和人胚胎干细胞进行单层细胞诱导分化，使干细胞经历个分化阶段最终成为血管内皮细胞，检测并比较分化过程中种干细胞指标干细胞在分化第阶段的胚层标记基因表达干细胞在分化第阶段的内皮标记基因表达干细胞在流式分选后的阳性细胞百分比分选后的猪诱导多能性干细胞来源内皮细胞和人胚胎干细胞来源内皮细胞的鉴定。统计学分析使用的软件为版本，数据以表示，不同组别之间的差异分析采用方法，为差异有显著性意义。利用软件绘图。结果干细胞向血管内皮细胞定向诱导分化第阶段胚层谱系特异性基因的表达分析采用单层细胞培养法将猪诱导多能性干细胞和人胚胎干细胞向内皮细胞定向诱导分化，分化分为个阶段，第阶段第天，干细胞向中胚层诱导分化第阶段第天，中胚层向血管内皮诱导分化第阶段第天，内皮细胞状态的稳定。在诱导分化的第阶段，采用方法检测猪诱导多能性干细胞基，货号培养液，货号基础培养基，货号。抗体，货号，货号，货号，货号，货号，货号。实验方法细胞培养猪诱导多能性干细胞使用培养液培养在小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上，传代时使用胶原酶消化，∶接种。人胚胎干细胞使用人多潜能干细胞培养基培养在∶稀释后的培养板上单层培养干细胞，并且在不同的时间点将不同的化学分子或细胞因子添加到培养液中对细胞进行处理，促使细胞向中胚层分化后再进步分化为内皮谱系