1、“.....充分洗涤弃除红细胞。用无菌眼科剪剪碎鼠胚躯干，加适量胰酶消化后终止消化，常规离心弃上清，加适量含胎牛血清的培养液，反复吹打后接种臵细胞培养瓶中，饱和湿度培养，培养天后传代。表引物序列实验分别在上述阻断实验进行天时，在细胞培养孔中加入溶液，继续孵育，每孔加入溶解液并混匀，继续孵育使结晶物充分融解，选择察或通路抑制剂对成釉分化的影响，从而探明与信号通路在细胞成釉分化中的作用。探讨在诱导多能干细胞成釉分化与信号通路的关联性细胞学论文。材料与方法小鼠系细胞购自中国科学院广州生物医药与健康研究院。成品上皮细胞培养液购自美国公司，通路抑制剂购自美国公司，通路抑制剂及通路抑制剂，以及探讨在诱导多能干细胞成釉分化与信号通路的关联性细胞学论文皮细胞培养液继续培养。可重复此法，直至贴壁的完全是上皮细胞而没有成纤维细胞。当成纤维样细胞全部去除后......”。

2、“.....避光条件下用无血清上皮细胞培养液每天换液次，臵换出来的用小滤器过滤后冷藏备用。为确保实验的可重复性，将所有混匀后分装，用于下述实验。骨形态发生蛋白属于转化生长因子家族成员，是组能广泛参与调节多种细胞的增生迁移分化和凋亡的生物学过程的功能蛋白，其在早期胚胎发生和随后的器官形成中发挥关键调控作用。信号通过激活其路主要调控细胞生长与分化，和信号转导通路参与炎症细胞凋亡等应激反应。然而，与信号通路在细胞被诱导向成釉细胞分化过程中的调控作用，目前仍未见文献报道。本研究采用诱导细胞成釉分化，检测分化过程中与信号分子磷酸化水平，并观察或通路抑制剂对成釉分化的影响，从而探明与信号通路在细胞成釉分化中的作用。探讨在诱导多能干细胞成釉分化与信号通路的关联性细胞学论文司，试剂盒购自美国公司，反转录试剂盒及法实时定量试剂盒购自日本公司，和抗体均购自美国生物技术公司......”。

3、“.....分离培养小鼠胚胎成纤维细胞将怀孕天孕鼠断颈处死，无菌条件下取出胎鼠，小心分离其躯干并臵于盛有的平皿内，充分洗涤弃除红细胞。用无菌眼科剪剪碎鼠胚躯干，加适量胰酶消化后终止消化，常规离心表引物序列实验分别在上述阻断实验进行天时，在细胞培养孔中加入溶液，继续孵育，每孔加入溶解液并混匀，继续孵育使结晶物充分融解，选择波长，在酶标仪上测定各孔吸光度值，记录结果。采用统计学软件对数据进行方差分析，采取盲法获取及计算以上数据，即由两个对实验设计不了解的实验员各计数次，并间隔周。经标准致性检验显示，两人所得数据高度吻合，因此两人计数的平均值被用于统计分析。采用检验进行两两亚组间比较，以为差异有统计学意义。材料与方胞成釉分化过程中发挥关键调控作用。后期需要体内实验进步证实信号通路对细胞成釉分化的影响及相关机制。刘治，覃文聘，高鹏，谭蕾......”。

4、“.....。试剂盒提取样品总，反转录试剂盒反转录合成，再以为模板，以为内参照，采用试剂盒检测各组细胞及的表达水平，反应条件严格按产品说明书进行所用引物均由日本公司合成，纤维细胞生长因子等多种细胞因子。然而，本研究并未鉴定本实验所采用的中的活性细胞因子成分，为了保证实验结果的重复性，实验中将所获得的混合在起用于后续实验，从而确保实验的可重复性，后续实验可采用检测法鉴定中的活性细胞因子成分。研究显示，是有效诱导细胞分化的必要生长因子。尽管的激活被认为是经典信号转导通路，但研究显示亦可激活信号通路，包括及。本实障碍，具有良好的临床应用前景。等通过分离小鼠下切牙根尖端颈环组织构建了牙源性上皮细胞系，并将该上皮细胞与鼠源性细胞共培养，结果显示上皮细胞可显著诱导细胞分化为成釉细胞样形态，并表达及等多种成釉细胞标志物然而，等研究发现......”。

5、“.....采用上皮剩余细胞的条件培养基培养细胞能够更有效地诱导其形成成釉细胞样细胞。等证明了成釉细胞无血清条件培养液可统计学意义不同培养基因素时间因素交互效应，。采用对照培养基或培养细胞天对照组组及天对照组组，两组间细胞增生活动在不同时间点比较差异均无统计学意义，当培养天时，组细胞增殖活动较对照组显著降低对照组组然而，在组中加入或信号通路抑制剂组细胞增殖活动与单纯组细胞在天比较，差异探讨在诱导多能干细胞成釉分化与信号通路的关联性细胞学论文体引物序列见表。最后以目的基因与的起始拷贝数的比值表示目的基因的相对表达量。实验重复次。多聚甲醛固定细胞，洗后滴加，孵育，洗后加入山羊血清孵育，不冲洗，甩干后直接加入相应抗∶，孵育过夜洗次，滴加或标记的抗∶，避光孵育衬染细胞核，荧光显微镜观察及软件处理图......”。

6、“.....。例如调控胚胎期釉质结节的表达，以及成釉细胞成釉蛋白釉质素及整合素的表达外胚层敲除小鼠则表现出牙釉质缺陷和牙尖缺失。通路被证实在介导的组织增长，胶原蛋白改建以及牙源性干细胞分化发挥关键调控作用。由于中含有等细胞因子，本实验在后续研究中将进步探明及通路在诱导细胞成釉分化中的作用。综上所述，本研究结果显示信号通路在诱导的表达及蛋白，主要表达在胞核及胞质图。定量研究结果显示对照组组组组及组细胞和，阳性细胞百分比组间比较，差异有统计学意义，其中组细胞及阳性细胞百分比均较对照组显著增高，抑制剂可显著逆转诱导细胞成釉分化的作用，表现为组细胞结果显示，成釉细胞条件培养基培养细胞天后，可显著促进磷酸化和分子的表达，表明上述通路被激活。进步信号通路抑制剂阻断实验结果显示，仅抑制剂可显著反转促细胞成釉分化的效应......”。

7、“.....上述结果表明信号通路在诱导的细胞的成釉分化过程中发挥主要调控作用。后期实验中应采用体内功能验证实验进步证实信号通路在细胞成釉分化过程中的作用。效诱导细胞向成釉细胞方向分化，表达成釉细胞标志物及。本实验结果显示培养细胞天后，其成釉细胞标志物和基因和蛋白表达水平均较对照组增高，这与等之前的结果致。这些结果表明，利用成釉细胞条件培养基培养细胞可诱导其分化为更接近成釉细胞的成熟细胞。牙齿的发育和形成是非常复杂生理过程，受到多种生长因子的调控，而这种动态过程不太可能仅由种因子进行控制。因此，本研究采用诱导细胞成釉分化，已有实验证实包统计学意义，图。图实验检测用于牙齿再生的干细胞主要包括牙源性干细胞和非牙源性干细胞，前者包括牙髓干细胞牙周膜干细胞及脱落乳牙干细胞等，但由于患者特异性的牙源性干细胞的来源及细胞数量有限，限制了其在临床上的广泛应用，......”。

8、“.....其中骨髓间充质干细胞仍存在来源有限的问题而胚胎干细胞长期受着伦理上的争议以及免疫排斥的缺陷，也不适合应用于临床治疗，。本实验所采用的细胞来源于成熟体细胞，因此克服了细胞来源受限伦理和免疫排斥上和阳性细胞百分比均较单纯组显著降低，但仍高于对照组。组及组细胞组组组组和组组阳性细胞百分数与单纯组比较，差异无统计学意义，表。表实时定量检测与对照组比较与组比较图免疫荧光染色观察表免疫组化半定量比较与对照组比较与组比较结果不同培养基组在不同时间下值差异探讨在诱导多能干细胞成釉分化与信号通路的关联性细胞学论文软件处理图。图细胞免疫荧光染色及阳性细胞定量与为胚胎干细胞特异标记分子，为分化的胚胎干细胞标志物图法检测及定量对照培养基或培养细胞后蛋白表达水平与对照组比较，图法检测及定量对照培养基或培养细胞后通路分子蛋白表达水平与对照组比较......”。

9、“.....组及抑制剂组细胞均波长，在酶标仪上测定各孔吸光度值，记录结果。采用统计学软件对数据进行方差分析，采取盲法获取及计算以上数据，即由两个对实验设计不了解的实验员各计数次，并间隔周。经标准致性检验显示，两人所得数据高度吻合，因此两人计数的平均值被用于统计分析。采用检验进行两两亚组间比较，以为差异有统计学意义。试剂盒提取样品总，反转录试剂盒反转录合成，再以为模板，以为内参照，采用试剂盒检测各组细胞及及抗体均购自美国公司。细胞裂解液及蛋白定量试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司，试剂盒购自美国公司，反转录试剂盒及法实时定量试剂盒购自日本公司，和抗体均购自美国生物技术公司，检测试剂盒购自上海碧云天生物技术公体磷酸化蛋白，从而启动细胞内信号转导，继而直接或间接通过结合蛋白或重新合成蛋白质来调节靶基因的转录。此外......”。