先进行背根神经节的暴露手术，并将质粒注射进入背根神经节内，见图然后用特制的铂金镊子电极对背根神经节进行电穿孔转染，电穿孔后背根神经节的形态未发生明显改变，见图。至今为止，电穿孔实验的存活率接近实验数量已达只，术后观察小鼠运动及的轴突进行计数统计。同样分别对周围神经损伤部位前和通过损伤部位且表达荧光蛋白的轴突进行计数统计。后肢运动功能评分电穿孔后第天对实验鼠进行评分，评估背根神经节电穿孔对小鼠行为的影响。先让小鼠在测试环境中活动适应，随后对其进行评分测试，见表。表后肢运动功能评分表后肢运动功能评分主要观察指标电穿孔转染质粒后，探讨染神经元技术与背根神经节电穿孔的有机融合生理学论文，。为此需要标记更多的轴突以便观察与统计再生的轴突。转基因技术和病毒载体的应用使得轴突再生的研究得以发展，。在中枢神经系统模型中，利用病毒转染脑皮质神经元，再通过顺行示踪剂生物素化葡聚糖胺次注射标记再生轴突，。在周围神经系统中，再生轴突可通过霍乱毒素，对坐骨神经进行逆行标记。但这种方法均需要定时间转染节电穿孔对小鼠行为的影响。先让小鼠在测试环境中活动适应，随后对其进行评分测试，见表。表后肢运动功能评分表后肢运动功能评分主要观察指标电穿孔转染质粒后，被转染的背根神经节神经元及其轴突表达荧光蛋白，统计荧光标记的神经轴突数量。探讨染神经元技术与背根神经节电穿孔的有机融合生理学论文。提高电穿孔电压可增加损伤部活体背根神经节内用电压，脉冲，间歇，次的转染条件对小鼠背根神经节进行电穿孔转染。首先进行背根神经节的暴露手术，并将质粒注射进入背根神经节内，见图然后用特制的铂金镊子电极对背根神经节进行电穿孔转染，电穿孔后背根神经节的形态未发生明显改变，见图。至今为止，电穿孔实验的存活率接近实验数量已达只，术后观察小鼠运时间及地点年至月在苏州大学骨科研究所完成。材料质粒实验使用的质粒载体为，购买于上海吉玛生物有限公司通过试剂盒天根进行提取，提取完成后可见白色沉淀附着于离心管管底，然后对质粒进行浓缩，无菌水将提取的质粒溶解成质量浓度为。显微注射器通过微拔管器仪，型在下将的毛细玻璃管拉伸，拉成直径原因多见，。损伤后周围神经仍旧保留内源性再生能力，以背根神经节轴突再生为主，因此精准高效的轴突标记显得尤为重要。背根神经节电穿孔技术就是种标记周围神经轴突的方法，据文献报道电穿孔时脉冲频率和电压的高低会影响电穿孔效率，脉冲频率过高会导致细胞死亡。为此，作者拟通过改变电压的方式，探究电压高低与转染效率之间的关系，以此来提高对神经元及其轴聚甲醛溶液浸泡保存。摘要背景背根神经节电穿孔技术是种研究神经再生的高效基因转染方法，以往背根神经节电穿孔的电压条件使得标记的神经元及轴突数目较少，统计误差较高。目的提高神经元及其轴突的标记率，为周围神经再生的研究提供理论依据。方法以增强型绿色荧光蛋白为观察指标优化背根神经节电穿孔技术在神经元轴突再生方面的应用。将小鼠随机分为组轻挑起游离的坐骨神经，右手使用号镊子在标记处夹闭，此后松开镊子，可在夹伤处清楚看到损伤的夹痕且神经外膜完整连续未发生神经离断术后无菌生理盐水冲洗伤口，逐层缝合。取材固定对上述周围神经损伤后第天的小鼠进行麻醉，充分暴露心脏，静脉输液针穿刺左心室，并固定针尖，在右心耳的位臵刺出个针尖大小的孔道，缓慢向左心室内注射磷酸盐缓冲液，将致细胞死亡。为此，作者拟通过改变电压的方式，探究电压高低与转染效率之间的关系，以此来提高对神经元及其轴突的标记率，从而增加背根神经节电穿孔技术在神经再生领域的应用性。作者前期预实验结果表明，在电压下电穿孔后出现背根神经节组织电灼伤，组织破损较严重，故而选择了与中间的电压，即进行实验。该实验使用和两种电压，在体内对背根神经节探讨染神经元技术与背根神经节电穿孔的有机融合生理学论文突的标记率，从而增加背根神经节电穿孔技术在神经再生领域的应用性。作者前期预实验结果表明，在电压下电穿孔后出现背根神经节组织电灼伤，组织破损较严重，故而选择了与中间的电压，即进行实验。该实验使用和两种电压，在体内对背根神经节进行电穿孔，通过坐骨神经夹伤模型对优化的电穿孔条件进行验证。材料和方法设计优化电压水平，对比观察动物实依据。关键词再生研究周围神经标记率生理学电压电穿孔背根神经节轴突交通建筑业工农业机械化的快速发展，以及自然灾害医源性损伤等原因，使得周围神经损伤的发病率逐年上升。上述损伤原因中，交通事故导致的周围神经损伤约占，其中岁以下患者约为。近年来中国周围神经损伤的发病率虽呈现下降趋势，但仍为美国的倍。医源性损伤多以过度牵拉压迫性损伤术中直接损伤行为功能损害结果表明，电压能够使神经元及其轴突的标记率增高，其结果能够为周围神经元轴突再生研究提供依据。关键词再生研究周围神经标记率生理学电压电穿孔背根神经节轴突交通建筑业工农业机械化的快速发展，以及自然灾害医源性损伤等原因，使得周围神经损伤的发病率逐年上升。上述损伤原因中，交通事故导致的周围神经损伤约占，其中岁以下患者约为。近年分别行背根神经节电穿孔手术，检测在和电压干预下神经元及其轴突的标记率。结果与结论和电压未造成神经元明显死亡与电压相比，电压条件下标记的神经元及其轴突数量显著增加，且通过损伤部位的轴突数量明显增多电压对实验动物未造成行为功能损害结果表明，电压能够使神经元及其轴突的标记率增高，其结果能够为周围神经元轴突再生研究提供鼠体内的血液充分冲出这个过程需要持续大约，小鼠肝脏呈现白色时换多聚甲醛溶液继续向左心室灌注此过程需持续大约，小鼠呈现僵直状态，去除皮肤及内脏等组织，使用咬骨钳咬除椎体并暴露出背根神经节，取出电穿孔转染的背根神经节组织剥离周围神经损伤侧的肌肉组织，显露出坐骨神经，使用显微外科剪完整取出坐骨神经。将取出的组织臵于多进行电穿孔，通过坐骨神经夹伤模型对优化的电穿孔条件进行验证。材料和方法设计优化电压水平，对比观察动物实验。周围神经损伤对上述组电穿孔术后第天的小鼠进行深度麻醉，剃除股骨及其周围的毛发，手术区域进行消毒处理。小鼠侧卧于手术台，充分暴露出坐骨神经，仔细用镊子钝性游离坐骨神经与其周围组织缝合线在游离神经外膜处缝合并打结，左手持镊子轻来中国周围神经损伤的发病率虽呈现下降趋势，但仍为美国的倍。医源性损伤多以过度牵拉压迫性损伤术中直接损伤等原因多见，。损伤后周围神经仍旧保留内源性再生能力，以背根神经节轴突再生为主，因此精准高效的轴突标记显得尤为重要。背根神经节电穿孔技术就是种标记周围神经轴突的方法，据文献报道电穿孔时脉冲频率和电压的高低会影响电穿孔效率，脉冲频率过高会探讨染神经元技术与背根神经节电穿孔的有机融合生理学论文增强型绿色荧光蛋白为观察指标优化背根神经节电穿孔技术在神经元轴突再生方面的应用。将小鼠随机分为组，分别行背根神经节电穿孔手术，检测在和电压干预下神经元及其轴突的标记率。结果与结论和电压未造成神经元明显死亡与电压相比，电压条件下标记的神经元及其轴突数量显著增加，且通过损伤部位的轴突数量明显增多电压对实验动物未造使用镊子刺激小鼠后肢引起的疼痛反射均未出现明显异常。时间及地点年至月在苏州大学骨科研究所完成。材料质粒实验使用的质粒载体为，购买于上海吉玛生物有限公司通过试剂盒天根进行提取，提取完成后可见白色沉淀附着于离心管管底，然后对质粒进行浓缩，无菌水将提取的质粒溶解成质量浓度为。显微注射器通过微拔管器被转染的背根神经节神经元及其轴突表达荧光蛋白，统计荧光标记的神经轴突数量。统计学分析所有数据均使用软件进行统计学分析，以表示。统计时使用检验以明确各组之间的统计学差异，为差异有显著性意义，为差异有非常显著性意义。结果实验动物数量分析只小鼠，最终数据均进入结果分析，术中及术后无脱落。质粒成功传递进入活及后期繁琐复杂的切片和染色。此外，研究者对病毒基因的纯化可实现精准的时空控制，但却不能对感兴趣的基因进行人为操作。病毒进入细胞需要载体的帮助，这些载体可以激活宿主的免疫防御系统，此时可能会对实验结果产生不利的影响。轴突数量统计背根神经节电穿孔转染质粒后，在神经元内部及其轴突表达绿色荧光蛋白，使用软件，对每根表达荧光前后的神经元轴突标记率与组相比，组损伤部位之前和损伤部位之后的轴突数均明显增多，差异有显著性意义见图。讨论周围神经损伤多以轴突病变为主，神经元作为机体内种不可增殖的永久细胞，其轴突本身的再生能力有限。神经元轴突的再生有以下影响因素第，周围的抑制性外环境第，自身再生能力弱。周围神经损伤后虽保留内源性再生能力，但功能恢复不全及使用镊子刺激小鼠后肢引起的疼痛反射均未出现明显异常。轴突数量统计背根神经节电穿孔转染质粒后，在神经元内部及其轴突表达绿色荧光蛋白，使用软件，对每根表达荧光的轴突进行计数统计。同样分别对周围神经损伤部位前和通过损伤部位且表达荧光蛋白的轴突进行计数统计。后肢运动功能评分电穿孔后第天对实验鼠进行评分，评估背根神经径的微量注射针。探讨染神经元技术与背根神经节电穿孔的有机融合生理学论文。统计学分析所有数据均使用软件进行统计学分析，以表示。统计时使用检验以明确各组之间的统计学差异，为差异有显著性意义，为差异有非常显著性意义。结果实验动物数量分析只小鼠，最终数据均进入结果分析，术中及术后无脱落。质粒成功传递进入