得到大小约为的条带图，与预期的结果相符合。重组质粒进行双酶切约为的条带图，表明重组质粒构建成功。蛋白是种高度糖基化的蛋白质，主要以同型聚体的形式存在，机体可以产生针对的特异性中和抗体，而且蛋白具有活性，能够降解单链和双链，该功能在限制宿主对双链的先天免疫应答中起重要作用，可以作为病毒感染的指标。蛋白含有的主要抗原表位，可以诱导保护性免疫应答，其基因序列是高度保守的，可以作为基因工程疫苗和免疫诊断的合适候选抗原。在不同分离株中蛋白具有遗传和抗原保守性，也可以作为鉴定动物的有用标记，。完整蛋白常作为诊断抗原用来检测抗体，然泻黏膜病的效果观察兽医导刊，丁金花，马旭升，蔡卓轩，等牛病毒性腹泻病毒蛋白原核表达及间接方法的建立石河子大学学报自然科学版，王攀文蛋白质结合位点预测方法研究及在复合物预测结构预测中的应用北京工业大学马凡舒，张蕾，王洋，等细胞抗原表位预测方法的研究进展中国畜牧兽医，于健徐寒梅连接肽在融合蛋白设计中的选择及应用药物生物技术，何金科，杨亚军，邓肖玉，何延华，池营，肖陈城，陈创夫牛病毒性腹泻病毒多表位蛋白的设计及验证动物医学进展，基金新疆建设兵团重大科技项目石河子大学青年创新人才培育计划项目。牛牛病毒性腹泻病毒多表位蛋白设计验证研究分析病毒学论文筛选出个细胞优势表位。以往的研究表明，牛类分子具有血清学特异性的等位基因为。本试验选用牛类分子等位基因作为预测蛋白的参数。用筛选出个细胞表位。细胞和细胞抗原是用于设计疫苗或诊断方法的基本要求，而预测细胞表位需要预测抗原肽与类分子的结合，这是细胞识别的必要先决条件。然而，由于现有的预测方法不包括类等位基因，需要使用等位基因来代替。本研究选用等位基因，和预测细胞的表位。比较不同服务器预测结果中，发现蛋白分子质量约为，可用于电泳和蛋白质印迹。理论等电点为，可用于等电聚焦，通过离子交换色谱分离和纯化蛋白质。蛋白的不稳定性指数为，归类为稳定蛋白超过表示蛋白质不稳定。蛋白的亲水性值为，归类为亲水性蛋白质范围在和之间，负值表示亲水性蛋白质。在大肠埃希菌体内半衰期大于。这些理化参数帮助我们在今后的研究中分离纯化和提取蛋白质。蛋白质翻译后修饰在调节蛋白质理化性质折叠构象稳定性活性及细胞控制机制中起重要作用。和服务器预测结果表明，蛋白序列上有个潜在的标准扩增结果多表位蛋白的诱导及表达形式的鉴定结果显示，在诱导后和得到大小约为蛋白，与理论值相符，并且在时蛋白表达量达到最大图。超声破碎的菌液经分析，结果显示以可溶性和包涵体两种形式表达，但以包涵体为主图。图重组质粒双酶切鉴定结果标准重组质粒多表位蛋白的纯化鉴定结果包涵体蛋白用标签镍柱纯化后得到条带单大小约为蛋白图，与理论值相符。结果显示，在处出现明显的反应条带图，与预期结果致的，表明纯化的多表位蛋白能够与阳性血清发生特异性反应。讨论在生物信息学快优势表位的筛选和多表位蛋白的构建首先，评估每个服务器预测表位的长度和位臵，排除些太短不能形成抗原表位的肽段。然后，列出来自每个预测软件的前个高评分表位。最后，留下每个预测软件评分最高的表位，其余的筛选重叠部分作为优势表位。将筛选出来的优势表位用柔性连接构建成多表位肽段。密码子优化最终获得多表位疫苗构建体需要进行优化以适应其在宿主内表达，使用服务器进行密码子优化，选择大肠埃希菌宿主，使密码子适应宿主，使多表位蛋白更高的表达。在优化过程中，需要避免非依赖性转录终止，原核生物核糖体结合位点和限制酶的切割位点。多表位基因合成及重组质粒的构建将优化后的密码基因为，肽段长度为。选择类等位基因为，肽段的长度为，每个图表选取前个高分表位。预测蛋白翻译后修饰位点分析蛋白有个丝氨酸个苏氨酸个酪氨酸。分析蛋白有个酰基化位点，共有个潜在的位点表。蛋白的跨膜结构域和亚细胞定位预测结果显示，蛋白不具有跨膜结构域。亚细胞定位结果显示，细胞质，线粒体，细胞核，空泡，分泌系统的囊泡。牛病毒性腹泻病毒多表位蛋白设计验证研究分析病毒学论文。蛋白细胞表位预测使用种预测展，基金新疆建设兵团重大科技项目石河子大学青年创新人才培育计划项目。牛病毒性腹泻病毒多表位蛋白设计验证研究分析病毒学论文。优势表位的筛选和多表位蛋白的构建首先，评估每个服务器预测表位的长度和位臵，排除些太短不能形成抗原表位的肽段。然后，列出来自每个预测软件的前个高评分表位。最后，留下每个预测软件评分最高的表位，其余的筛选重叠部分作为优势表位。将筛选出来的优势表位用柔性连接构建成多表位肽段。密码子优化最终获得多表位疫苗构建体需要进行优化以适应其在宿主内表达，使用服务器进行密码子优化，选择大肠埃希菌宿主，使密码子适应宿主，使选用等位基因，和预测细胞的表位。比较不同结果后，筛选出个细胞表位。在多表位蛋白的设计中，需要用链接肽将不同功能的短肽进行连接。本研究选用柔性肽将细胞和细胞优势表位连接组装成多表位蛋白，进行密码子优化和电子克隆确保其在大肠埃希菌中高效表达。总之，本研究通过生物信息学方法筛选出的多表位蛋白并在大肠埃希菌中高效表达，显示多表位蛋白具有良好的反应原性，可作为候选疫苗和诊断抗原，为后续的研究奠定了基础。参考文献孟庆森，王炜，黄慧文，等牛病毒性腹泻病毒的研究进展当代畜牧，陈备娟，高全新起重要作用。和服务器预测结果表明，蛋白序列上有个潜在的位点个磷酸化位点和个酰化位点，表明这些位点可能调节些蛋白功能并影响蛋白质活性。预测结果显示，蛋白不具有跨膜结构，亚细胞定位主要在细胞质中，可以被抗原递呈细胞接触引发细胞和细胞免疫应答。蛋白质的主要生物学功能取决于它们的空间结构，理解蛋白质的结构并实现结构和功能之间的联系是非常重要的。对蛋白级预测结果显示，主要以螺旋和无规则卷曲为主，螺旋和转角的氢键能对蛋白结构的稳定起重要作用，多个无规卷曲结构表明蛋白具有很强的抗原潜力。目前已有很多种方法可以预牛病毒性腹泻病毒多表位蛋白设计验证研究分析病毒学论文件分析蛋白的细胞线性表位，包括和。在服务器上设臵预测长度为，特异性默认为，在上，设臵预测长度为，阈值为。服务器上设阈值为。在上设预测长度为。蛋白细胞表位预测用预测和结合表位。选择等位基因为，肽段长度为。选择类等位基因为，肽段的长度为，每个图表选取前个高分表和分别为，酶切条件。反应条件预变性变性，退火，延伸最后延伸。蛋白细胞表位预测使用种预测软件分析蛋白的细胞线性表位，包括和。在服务器上设臵预测长度为，特异性默认为，在上，设臵预测长度为，阈值为。服务器上设阈值为。在上设预测长度为。蛋白细胞表位预测用预测和结合表位。选择等位果致的，表明纯化的多表位蛋白能够与阳性血清发生特异性反应。讨论在生物信息学快速发展的今天，设计多表位亚单位疫苗已经成为种新的方法来引发体液和细胞免疫，增强宿主保护性免疫应答，而且设计开发的多表位嵌合抗原在用于疫苗和血清学诊断中，不仅成本较低，而且灵敏度也在不断提高，。本研究使用生物信息学方法预测并筛选出具有强免疫原性的多表位蛋白。图多表位蛋白诱导时间的鉴定结果蛋白分子质量标准诱导结果图多表位蛋白表达形式的鉴定结果蛋白分子质量标准图多表位蛋白纯化结果蛋白分子质量标准图多表位蛋白鉴定结果蛋白分子质量标准，表位蛋白更高的表达。在优化过程中，需要避免非依赖性转录终止，原核生物核糖体结合位点和限制酶的切割位点。多表位基因合成及重组质粒的构建将优化后的密码子序列送往上海股份生工生物工程有限公司进行合成并连接至载体上，将重组质粒进行验证，利用和进行双酶切，同时用和双酶切质粒，酶切完成后进行胶回收，用连接酶在的水浴过夜连接。次日将连接产物转化至大肠埃希菌感受态细胞，涂布氨苄抗性的平板上过夜培养，挑取单个的菌落进行菌液验证，将阳性的菌落进行扩大培养提取质粒进行双酶切验证。双酶切体系质粒朱毅兴，等牛病毒性腹泻病的流行病学调查上海畜牧兽医通讯，陆峰猪瘟疫苗防治牛病毒性腹泻黏膜病的效果观察兽医导刊，丁金花，马旭升，蔡卓轩，等牛病毒性腹泻病毒蛋白原核表达及间接方法的建立石河子大学学报自然科学版，王攀文蛋白质结合位点预测方法研究及在复合物预测结构预测中的应用北京工业大学马凡舒，张蕾，王洋，等细胞抗原表位预测方法的研究进展中国畜牧兽医，于健徐寒梅连接肽在融合蛋白设计中的选择及应用药物生物技术，何金科，杨亚军，邓肖玉，何延华，池营，肖陈城，陈创夫牛病毒性腹泻病毒多表位蛋白的设计及验证动物医学进测细胞线性抗原表位，为了提高预测的准确性，本研究使用了种不同的预测软件筛选出个细胞优势表位。以往的研究表明，牛类分子具有血清学特异性的等位基因为。本试验选用牛类分子等位基因作为预测蛋白的参数。用筛选出个细胞表位。细胞和细胞抗原是用于设计疫苗或诊断方法的基本要求，而预测细胞表位需要预测抗原肽与类分子的结合，这是细胞识别的必要先决条件。然而，由于现有的预测方法不包括类等位基因，需要使用等位基因来代替。本研结果基因在疫苗候选物和血清学诊断中受到了研究人员的广泛关注，。从服务器预测结果中，发现蛋白分子质量约为，可用于电泳和蛋白质印迹。理论等电点为，可用于等电聚焦，通过离子交换色谱分离和纯化蛋白质。蛋白的不稳定性指数为，归类为稳定蛋白超过表示蛋白质不稳定。蛋白的亲水性值为，归类为亲水性蛋白质范围在和之间，负值表示亲水性蛋白质。在大肠埃希菌体内半衰期大于。这些理化参数帮助我们在今后的研究中分离纯化和提取蛋白质。蛋白质翻译后修饰在调节蛋白质理化性质折叠构象稳定性活性及细胞控制机制牛病毒性腹泻病毒多表位蛋白设