到阳性信号，说明了分泌蛋白从内质网高尔基体囊泡细胞外的经典分泌途径，先在细胞内合成，再分泌到细胞外可能在附睾胞中同样检测到丰富的蛋白表达。郭丽娜等采用免疫组化法和等用原位杂交方法对检测也得出了相同的结果。本试验结果显示，在附睾头细胞中大量表达，与前人的研究结果致。在附睾头中大量表达提示其可能在附睾头部有着特殊的功能，这也印证了等对于精子形态结构功能的改变发生在这部位的推测。蛋白质在附睾不同部位的特殊分布与定量，可能导致精子膜蛋白的成分发生改变，也可能造成精子膜蛋白的糖基化作用方式改变，并最终改变精子的形态结构和功能，从而影响精子成熟。附睾头细胞对精子成熟影响的机制尚不完全清楚。本研究性信号更强细胞培养时，图显示蛋白在细胞核和细胞质中的阳性信号明显增强，并且在附睾组织液中也出现了不同程度的阳性信号，阴性对照视野中几乎检测不到阳性信号。与普通荧光显微镜相比，激光共聚焦扫描显微镜的图片更加清晰，阳性信号也更强，荧光视野也更加细致，并且在激光共聚焦显微镜下扫描出的图片中，培养液中也出现了较强的阳性信号。讨论细胞免疫荧光试验由于抗体效价来源研究的对象及该蛋白在细胞中的表达量等不同，需要筛选最佳的抗浓度。比如，有研究者在试验方法中使用不同抗稀释比例，。在相同抗体效价下，阳性信号强弱与抗浓度有强相关，但浓度过高会引起图太行山羊附睾头细胞免疫荧光情况分析细胞学论文细胞中的定位注视野视野。分别代表抗稀释浓度为∶∶∶∶∶，为阴性对照不同抗浓度下山羊附睾头细胞免疫荧光图为抗稀释比为∶时，不同抗浓度下在太行青山羊附睾头细胞中免疫荧光的结果。结果表明，在荧光倒置显微镜下，与阴性对照相比，的细胞胞核着色呈绿色荧光。从图中可以看出，视野中的附睾头细胞均呈现出胞核绿色，而胞浆有少量黄绿色荧光，说明在附睾头细胞的细胞核中大量表达，在胞质中少量表达。在不同抗浓度下所拍的图片中，图∶图∶图∶图∶绿色荧光表达量基本相近稀释比为∶时的图片中阳性信号基本看不到，视野与阴性释比例越大，浓度越小，荧光阳性信号越弱，适宜的抗浓度稀释比为∶不同抗浓度对阳性信号无显著影响，荧光抗稀释比例为∶时荧光更清晰。激光共聚焦显微镜扫描结果显示，在细胞核和细胞质中均有表达细胞培养到时在细胞核中大量表达，出现较强的阳性信号，并且在视野下发现培养液中有颗粒状的阳性信号。综上所述，推测可能在附睾头细胞培养的过程中在细胞内合成并分泌到细胞外，对附睾微环境的构建起到了作用，同时可能参与精子的成熟过程。太行山羊附睾头细胞免疫荧光情况分析细胞学论文。结果与分析不同抗浓度下山羊附睾头细胞免疫荧光经荧光，避光孵育，避光洗次，每次。方法不同抗浓度筛选细胞免疫荧光把附睾头细胞接种到孔板上培养，弃去培养基，洗次，每次。不同抗浓度筛选参考以往做的抗浓度，将抗进行不同比例稀释分别为∶∶∶∶∶，其余步骤同。太行山羊附睾头细胞免疫荧光情况分析细胞学论文。方法不同抗浓度筛选细胞免疫荧光把附睾头细胞接种到孔板上培养，弃去培养基，洗次，每次。多聚甲醛固定每孔加多聚甲醛固定，弃去液体，洗次，每次。每孔加入的溶液通透，弃去液体，洗次，每次摘要试验旨在研究太行山羊附睾头细胞免疫荧光定位，采用细胞免疫荧光技术通过荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察太行山羊附睾头细胞免疫荧光情况。结果表明不同抗浓度对呈现荧光图像影响较大，浓度稀释比例越大，浓度越小，荧光阳性信号越弱，适宜的抗浓度稀释比为∶不同抗浓度对阳性信号无显著影响，荧光抗稀释比例为∶时荧光更清晰。激光共聚焦显微镜扫描结果显示，在细胞核和细胞质中均有表达细胞培养到时在细胞核中大量表达，出现较强的阳性信号，并且在视野下发现培养液中有颗粒状的阳性信号。综上所述，推测可能在附睾头细胞培养可能参与了附睾中对精子成熟和贮存起到重要作用蛋白质的转录调节。在附睾头细胞培养液中检测到阳性信号，说明了分泌蛋白从内质网高尔基体囊泡细胞外的经典分泌途径，先在细胞内合成，再分泌到细胞外可能在附睾液中发挥功能，但还需要进步试验验证。结论可能在太行山羊附睾头细胞生长的过程中分泌到了附睾组织液中，对附睾微环境的构建起作用，同时可能参与山羊精子成熟过程。参考文献梁学颖，徐琪寿祝黄醇结合蛋白的分子生物学生理科学进展，郭丽娜在山羊睾丸和附睾中的表达特性及定位研究太谷山西农业大学，任有蛇，郭丽娜，张春香，等山羊的表达特比例仅供参考。众多研究表明，在雄性生殖器官中表达量较高。等利用质谱成像技术首先发现，附睾头中段到附睾尾蛋白表达量逐渐增加，并且在附睾尾部聚集。等在性成熟的大鼠附睾上皮细胞中同样检测到丰富的蛋白表达。郭丽娜等采用免疫组化法和等用原位杂交方法对检测也得出了相同的结果。本试验结果显示，在附睾头细胞中大量表达，与前人的研究结果致。在附睾头中大量表达提示其可能在附睾头部有着特殊的功能，这也印证了等对于精子形态结构功能的改变发生在这部位的推测。蛋白质在较不同比例抗抗的浓度，最终选取抗浓度∶，抗浓度为∶进行细胞免疫荧光试验并激光共聚焦扫描，结果见图。附睾头细胞培养，细胞刚开始贴壁，此时还未呈现多边形形态，图显示，位于细胞核和细胞质中，细胞核中的阳性信号更强细胞培养时，图显示蛋白在细胞核和细胞质中的阳性信号明显增强，并且在附睾组织液中也出现了不同程度的阳性信号，阴性对照视野中几乎检测不到阳性信号。与普通荧光显微镜相比，激光共聚焦扫描显微镜的图片更加清晰，阳性信号也更强，荧光视野也更加细致，并且在激光共聚焦显微镜下扫描出的图片中，培养液中也出现了较强的阳性信号。讨论细胞在不同抗浓度下所拍的照片中，绿色荧光表达量最高的是∶，其余依次为∶∶∶∶，抗浓度稀释比为∶和∶时基本看不到阳性信号图为阴性对照，对照组细胞核内，胞浆内均无阳性信号。图不同抗浓度在太行山羊附睾头细胞中的定位注视野视野。分别代表抗稀释浓度为∶∶∶∶∶，为阴性对照不同抗浓度下山羊附睾头细胞免疫荧光图为抗稀释比为∶时，不同抗浓度下在太行青山羊附睾头细胞中免疫荧光的结果。结果表明，在荧光倒置显微镜下，与阴性对照相比，的细胞胞核着色呈绿色荧光。从图中可以看出，视野中的附睾头细胞均呈现出胞核绿色，而胞浆太行山羊附睾头细胞免疫荧光情况分析细胞学论文及其在繁殖器官中定位畜牧兽医学报，张彩霞对山羊精子获能和运动能力的影响太谷山西农业大学，邰苗苗，郭永娟，任有蛇，等太行青山羊附睾头细胞系的建立中国草食动物学，程胖，刘博，冯潇，等大鼠附睾上皮细胞的原代培养及纯化鉴定中国组织化学与细胞化学杂志，范晓梅，张通，粟瑞兰，等绒山羊附睾上皮细胞培养方法的建立及其生长特性畜牧兽医学报，欧阳聪种新的分泌蛋白的功能初探武汉中南民族大学，董复成，崔岩，任有蛇，张春香太行山羊附睾头细胞免疫荧光定位中国草食动物科学，基金山西农业大学畜牧学科建设专项课题山西省青年晋学者项目尾部中段也有弱阳性信号。后期张彩霞的试验进步证实了获能前精子定位与郭丽娜报道致，然而在精子获能后随顶体的脱落而消失，初步证明具有保护精子顶体完整性和调控精子获能的作用。有研究显示，附睾头细胞分泌到管腔中蛋白在创造有利于精子获得受精能力的微环境中发挥区域特异性作用，。本试验结果表明，在附睾头细胞核细胞质以及培养液中均有表达，并且在细胞培养过程中，从附睾头细胞培养到的荧光图片结果显示，在细胞生长的这段时间内的分泌量逐渐增多，并且其转移过程为细胞核细胞质细胞外培养液。根据细胞核出现阳性信号，初步推测的原代培养及纯化鉴定中国组织化学与细胞化学杂志，范晓梅，张通，粟瑞兰，等绒山羊附睾上皮细胞培养方法的建立及其生长特性畜牧兽医学报，欧阳聪种新的分泌蛋白的功能初探武汉中南民族大学，董复成，崔岩，任有蛇，张春香太行山羊附睾头细胞免疫荧光定位中国草食动物科学，基金山西农业大学畜牧学科建设专项课题山西省青年晋学者项目。邰苗苗等研究提供了较为成熟的太行山羊附睾头细胞培养方法。但目前是否在附睾头细胞中表达定位还未见报道。因此，本研究以体外培养月龄公山羊附睾头细胞为试验对象，采用细胞免疫荧光技术并利用激光共聚焦显微镜附睾不同部位的特殊分布与定量，可能导致精子膜蛋白的成分发生改变，也可能造成精子膜蛋白的糖基化作用方式改变，并最终改变精子的形态结构和功能，从而影响精子成熟。附睾头细胞对精子成熟影响的机制尚不完全清楚。本研究团队直以来都在探索附睾中对精子成熟贮存及获能中的作用，并取得了定的进展。郭丽娜免疫组化结果显示，在山羊睾丸和附睾中均有表达，且月龄之前在山羊附睾头体尾和睾丸中的表达水平随着月龄增加而逐渐升高，月龄达到最高，月龄表达量开始降低且发生了迁移，从腔外转移到了腔内进步研究发现，蛋白包裹在精子头部顶体表面，且信号较强，精子颈部疫荧光试验由于抗体效价来源研究的对象及该蛋白在细胞中的表达量等不同，需要筛选最佳的抗浓度。比如，有研究者在试验方法中使用不同抗稀释比例，。在相同抗体效价下，阳性信号强弱与抗浓度有强相关，但浓度过高会引起图片不清晰。另外，为了寻找更佳的抗浓度使所呈现图片更加清晰，并节省荧光抗的使用量，设置不同抗稀释比例的梯度。在本试验中，细胞免疫荧光随着抗浓度的降低阳性信号减弱激光共聚焦扫描结果显示，使用的抗和抗稀释比例分别为∶和∶时，所拍出的图片视野清晰，阳性信号较强，抗浓度比说明书推荐的浓度∶∶低。因此，在做细胞免疫荧光时，文献中的抗体浓度稀少量黄绿色荧光，说明在附睾头细胞的细胞核中大量表达，在胞质中少量表达。在不同抗浓度下所拍的图片中，图∶图∶图∶