药，薛红霞，蒋举卫，李晓丽，宋晓飞，郑金双，闫立英，孙成振黄瓜突变体库的构建及表型变异的初步研究核农学报，陈天子，余月，凌溪铁，张保龙诱变水稻创制抗咪唑啉酮除草剂种质核农学报，基金江苏省重点研发计划现代农业项目。摘要为了创制水稻非国水稻田杂草抗药性研究进展植物保护，程艳勤浅析除草剂对水稻的危害及治理农技服务杨光巴斯夫推出耐除草剂水稻系统强化全球水稻轮作战略农药市场信息，毕亚玲，王曹阳，谷刚，李部，任永娟，李学维，李淑娟双环磺草酮除草活性及对水稻的安全性研究农药学学报，王俊梅，叶胜海，翟荣荣，余鹏，朱国富，金庆生，张小明耐草甘膦水稻种质资源的创制和鉴定核农学报，范方军，王芳权，李文奇，王军，朱金燕，许杨，仲维功，杨杰抗咪草烟水稻资源的筛选中国稻米，王芳权，杨杰，范方军，李文奇，王军，许扬，朱金燕，费云燕，仲维功水稻抗咪唑啉酮类除草剂基因功能标记的开发与应用作物学报，费云燕，杨杰，范方军，王芳权，李文奇，王军，朱金燕，仲维功水稻咪草烟抗性体库的构建及表型变异的初步研究核农学报，陈天子，余月，凌溪铁，张保龙诱变水稻创制抗咪唑啉酮除草剂种质核农学报，基金江苏省重点研发计划现代农业项目。因此，本研究通过诱变水稻种子，然后用咪唑啉酮类除草剂筛选诱变处理的后代种子，获得了与前人报道的突变类型相同的抗除草剂材料，也获得了突变的非转基因抗咪唑啉酮类除草剂的水稻新材料，并对获得的抗除草剂材料开展抗性水平鉴定，旨在为水稻抗除草剂育种提供材料。材料与方法材料与试剂水稻试验材料为籼稻由江苏省农业种质资源保护与利用平台提供。为美国公司产品货号硫代硫酸钠产自国药集团化学试剂有限公司百垄通为水剂型咪唑啉酮类除草剂，由巴斯夫公司生产有效成分为创制水稻非转基因抗除草剂种质研究农药防治论文李文奇，王军，许扬，朱金燕，费云燕，仲维功水稻抗咪唑啉酮类除草剂基因功能标记的开发与应用作物学报，费云燕，杨杰，范方军，王芳权，李文奇，王军，朱金燕，仲维功水稻咪草烟抗性的遗传分析及其紧密连锁分子标记的筛选与应用作物学报，叶青，张金平广东创新科研团队研发出洁田稻农药市场信息，王文霞，曾研华，曾勇军，梁喜欢，谭雪明，石庆华，潘晓华不同直播方式对南方稻田杂草发生及早籼稻产量的影响核农学报，张勇，王艳艳，王梅，周凤艳，高同春不同除草剂对水稻水直播田杂草的防除效果及安全性评价植物保护，陈以峰，李宜慰，汤日圣，李永丰，梅传生，翟其楷，刘宁政乙酰乳酸合酶活性的简易测定方法建立江西农业大学学报，中华人民共和国农业部农药定检所农药室内生物测定实验右。化学除草是目前广泛普及的稻田除草方式，包括除草剂对土壤封闭处理和对茎叶处理。化学除草有严格的施用范围，使用不当会引发药害，造成水稻减产甚至绝产。因此，培育抗除草剂的水稻品种是克服稻田杂草的经济有效途径。转基因技术是培育抗除草剂作物的有效途径之，但目前我国尚未批准转基因水稻的商业化种植，不能在生产上推广应用。因此培育非转基因的抗除草剂水稻在生产上意义重大。其抗除草剂功能源于基因开放阅读框在第第由碱基突变为碱基，或在第由碱基突变为碱基，导致编码的第位氨基酸由丝氨酸突变为亮氨酸或天冬酰胺其中第位氨基酸由丝氨酸突变为亮氨酸鲜有报道。突变后的水稻对咪唑啉酮类除草剂的耐受性显著提高，其是野生型幼苗叶片变浅绿色，有极少数幼苗叶片仍呈深绿色，且植株明显增高喷施后，非抗性苗叶片明显失绿停止生长甚至枯死，抗性苗正常生长，叶片深绿色，株高增长明显图。筛选种子约，共计获得个抗性单株，成熟后单株收种。创制水稻非转基因抗除草剂种质研究农药防治论文。摘要为了创制水稻非转基因抗除草剂种质，丰富我国水稻轻简化栽培杂草防治所需的配套种质资源，本研究以甲磺酸乙酯水溶液诱变水稻种子，然后以咪唑啉酮类除草剂筛选叶期的水稻幼苗。结果发现，幼苗茎叶喷雾甲咪唑烟酸后，非抗性苗黄化生长被抑制甚至枯死，抗性苗叶色正常株高增长明显。抗性水稻对甲咪唑烟酸的抗性能稳定遗传且其抗性水平不低于甲咪唑烟酸，其抗性水平是野生型对照的倍以上。分别克隆抗除草活性测定取抗性株系和野生型水稻叶片，液氮研磨成粉末，按∶加入提取液磷酸缓冲液值，丙酮酸钠焦磷酸硫胺素硫代苏糖醇，待解冻后继续研磨匀浆。用移液器将溶解物转移臵冰预冷离心管，离心，吸取上清液至新的冰预冷离心管中，获得粗酶液，并臵于冰上，立即用于酶活测定。活性的测定参照陈以峰等的方法。在离心管中依次加入反应缓冲液磷酸缓冲液值，丙酮酸钠焦磷酸硫胺素不同浓度的甲咪唑烟酸水溶液粗酶液样品管总体积为，混匀。对照管先加，再加入粗酶液。水浴，样品管加草剂突变体基因克隆与序列分析根据水稻基因保守序列设计扩增基因全长的特异引物和。以抗除草剂单株基因组为模板，采用聚合酶扩增基因。反应体系包括引物各水稻基因组，补加无菌水至总体积。扩增程序预变性变性，退火，延伸，个循环延伸。取产物经琼脂糖凝胶电泳检测，发现有预期片段后，剩余产物经清洁试剂盒美国公司清洁回收后，克隆至载体日本与甲咪唑烟酸各浓度孵育后的吸收值计算相对酶活力，结果显示图，野生型水稻的对甲咪唑烟酸极为敏感，酶活在开始受到抑制，并随甲咪唑烟酸浓度的增加酶活性迅速降低，在甲咪唑烟酸浓度为时相对酶活力为而抗性株的对甲咪唑烟酸的耐受性明显强于野生型水稻，在甲咪唑烟酸浓度为时开始受到抑制，在浓度为时相对酶活力为。以软件对水稻酶活抑制率的几率值和甲咪唑烟酸浓度的对数值进行直线回归分析，求得野生型水稻，抗性株，即抗性株对甲咪唑烟酸的耐受性是野生型水稻的倍。图抗咪唑啉酮除草剂水稻的抗性水平表抗咪唑啉酮除草剂水稻的农艺性状图水稻酶活性测定讨论目前绝引物各水稻基因组，补加无菌水至总体积。扩增程序预变性变性，退火，延伸，个循环延伸。取产物经琼脂糖凝胶电泳检测，发现有预期片段后，剩余产物经清洁试剂盒美国公司清洁回收后，克隆至载体日本公司，然后转化大肠杆菌。每个转化随机挑取个大肠杆菌单克隆进行检测，取结果呈阳性的个单克隆，送南京道生物科技有限公司测序。测序结果采用和软件分析野生型和突变体基因的序列差异，确定抗除草剂突变体的突变位点。抗除草剂突变体的抗性水平和遗传稳定性鉴定取个抗性株系编号和种子和野生型水稻种子，匀。对照管先加，再加入粗酶液。水浴，样品管加，混匀，孵育，依次加入肌酸萘酚，混匀后水浴，水浴。短暂离心后取上清在分光光度计德国公司上读取范围的吸光值，取其最大值计算甲咪唑烟酸各浓度下的相对酶活力及酶活抑制率。相对酶活力甲咪唑烟酸加入组的吸光值无甲咪唑烟酸加入组的吸光值，酶活抑制率无甲咪唑烟酸加入组的吸光值甲咪唑烟酸加入组的吸光值无甲咪唑烟酸加入组的吸光值。按农业行业标准和赵斌等方法，以统计软件计算甲咪唑烟酸抑制水稻酶活力至时的值。结果与分析抗除草剂突变体筛创制水稻非转基因抗除草剂种质研究农药防治论文公司，然后转化大肠杆菌。每个转化随机挑取个大肠杆菌单克隆进行检测，取结果呈阳性的个单克隆，送南京道生物科技有限公司测序。测序结果采用和软件分析野生型和突变体基因的序列差异，确定抗除草剂突变体的突变位点。抗除草剂突变体的抗性水平和遗传稳定性鉴定取个抗性株系编号和种子和野生型水稻种子，播种纸杯中，每杯粒种子。在叶幼苗期时，以不同浓度甲咪唑烟酸水溶液进行茎叶喷雾处理，每个浓度重复次喷药后测量株高，并以对照甲咪唑烟酸处理为基准计算株高抑制率。株高抑制率对照组株高处理组株高对照组株高，然后按单向分组组内观察值数目不等资料对每个浓度下的株高抑制率进行方差分析以拟南芥氨基酸序列位臵为标准突变为天冬酰胺苏氨酸苯丙氨酸异亮氨酸。如前所述，和金粳抗性水稻在该位点的氨基酸突变类型是丝氨酸突变为天冬酰胺，。本研究还发现水稻第位丝氨酸的个碱基同时突变为后，造成丝氨酸变为亮氨酸，突变体也具有抗咪唑啉酮类除草剂功能，该位点产生亮氨酸突变类型此前鲜见报道。抗性突变位点的不同替换氨基酸残基种类的不同，导致其蛋白结构不同，其抗除草剂特点也不同，如含天冬酰胺突变的对咪唑啉酮除草剂的抗性是含谷胺酸突变的倍。随着对更多诱变水稻材料进行抗抑制剂类除草剂筛选和基因型分析，还可能发现基因产生其他新的氨基酸突变类型能赋予抗除草剂功能。创制水稻非转基因抗除草剂种质研究农药防治论文。抗除测定抗除草剂突变体与野生型的对甲咪唑烟酸的敏感性，结果表明抗性水稻对甲咪唑烟酸的耐受性是野生型的倍。本研究获得了水稻第位丝氨酸突变为亮氨酸或天冬酰胺的抗咪唑啉酮新种质材料，获得的抗咪唑啉酮水稻材料的抗性倍数高，能稳定遗传，具有生产应用价值。关键词乙酰乳酸合成酶咪唑啉酮水稻水稻材料甲基磺酸乙酯稻田杂草严重影响水稻产量和品质。据统计，稻田杂草致使我国稻谷每年的损失率达左右。化学除草是目前广泛普及的稻田除草方式，包括除草剂对土壤封闭处理和对茎叶处理。化学除草有严格的施用范围，使用不当会引发药害，造成水稻减产甚至绝产。因此，培育抗除草剂的水稻品种是克服稻田杂草的经济有效途径。转基因技术是培育抗除草剂作物的有效途径之，但目前我国尚未批准转基因水稻的大部分抗抑制剂作物的抗性机制是源于基因碱基突变造成氨基酸残基位点变异，引起抑制剂除草剂与蛋白结合性降低，从而使得突变表对该除草剂体现为不敏感或耐受性，也有个别报道由细胞色素单加氧酶基因等编码代谢酶降解除草剂所致。本研究在对抗除草剂突变体进行抗性筛选和抗性表型进行鉴定的基础上，对部分抗除草剂突变体进行了基因型鉴定，确认这些突变体是在水稻蛋白第位丝氨酸被突变为天冬酰胺或亮氨酸。水稻第位丝氨酸对应于拟南芥