曲因株系的株高叶片卷曲度叶片光合色素质量分数，并观察叶片气孔密度和开度在成熟期测定转基因植株株高有效穗数结实率和千粒质量基因表达分析分别从野生型涪恢和突变体抽穗期植株根茎节叶和颖花中提取总，合成第链，利用实时定量进行基因组织差异性表达分析以登录号为作为内参基因，所用实时定量引物为以野生型的为模板，用这两对引物扩增正反向干涉片段，琼脂糖凝胶电泳检测并回收，使用相应的内切酶酶切回收产物后保存备用使用和酶切载体并回收酶切后的载体骨架，连接酶连接正向片段的酶切片段入载体骨架中，转化后挑单斑测序，提取测序正确菌液的质粒作为中间载体，采用和酶切中间载体，连接反向片段的酶切产物入中间载体转化后挑单斑测序，提取测序正确菌液的质粒即为基因组干涉载体，保存备用转化野生型植株获得干涉植株及鉴定由农杆菌介导基因组干涉载体转化野生型的愈伤组织浅析利用干涉研究水稻基因功能情况农业生物学论文，等由西南大学农学与生物科技学院作物品质改良重点实验室保存植物提取试剂盒反转录试剂盒基因组提取试剂盒质粒提取试剂盒和琼脂糖胶回收试剂盒购于北京全式金公司聚合酶限制性内切酶连接酶实时试剂盒购于公司引物设计采用软件，由上海英骏公司合成序列测定由北京华大基因公司完成系统进化树的构建与其他相关同源蛋白的比对分析和下载在网站上进行进化树的构建使用进行，各蛋白氨基酸序列的比对在上进行，进化树的构建使用邻接法进行，采用调控因子通过协同细胞数量和细胞扩增从而调控器官大小例如，光敏色素和光敏色素互作因子在本课题组的前期工作中，通过图位克隆技术分离了个水稻器官变小且伴随叶片早衰基因，利用细胞学观察生理学测定分析突变体表型特征，并构建由启动子驱动的信号表达载体，利用根癌农杆菌介导转化法获得了转基因植株表型观察结果表明，作为水稻同源盒基因通过调时决定的，在植物中，主要通过促进细胞增殖而达到促进植物器官生长的调控因子有，和，而通过限制细胞增殖负调控器官大小的调控因子有，和，同时，植物器官大小也被细胞扩增调控目前，已经报道有大量通过促进细胞扩增而达到调控器官生长的调控因子，如摘要生物体最终的大小或者生物体个体器官的大小都受细胞增殖扩张等因素的调控通过干涉对水稻器官大小变小且伴随叶片早衰基因的功能进行研究，实时定量分析结果显示，干涉转基因植株基因表达水平显著下调与野生型相比，干涉转基因植株表达水平下调的转基因株系整体变矮，叶片卷曲且明显变短变窄，叶片横切面维管束数目减少，表明基因的下调引起细胞数量的减少和细胞大小减小导致水稻器官大小明显减小，同时，叶片气孔密度和开度的增加导致叶片提前衰老结果表明，可作为水稻同源盒基量极显著降低该结果表明可能直接或间接调控了气孔的密度和开度以及气孔运动涉及囊泡运输液泡融合膜泵和离子平衡蛋白是如何调控水稻器官发育还需要进步研究结论本研究利用干涉下调的表达，分蘖期植株整体变矮，叶片变短且内卷，卷曲部位泡状细胞明显变小，增加了叶片单位面积气孔数目，由于蒸腾速率加快引起叶片卷曲，从而显著降低了植株光合色素质量分数，导致水稻突变体叶片发生早衰，成熟期植株表现出株高变矮有效穗数减少结实率和千粒质量降低，该结果进步表明可作为水稻同源盒基因，在因对顶端分生组织根的分生组织的萌发和腋生器官的原始形成起到重要调控作用，与之不同的是，是同时在胚胎形成期间启动初生分生组织和所有腋生器官及组织的次生分生组织，如侧根分蘖花穗分枝小穗原基和分别在茎周围和叶主脉两侧的维管束，但是，是如何协同和其他同源框基因调控分生组织的形成需要进步研究水稻突变体器官大小的变小影响叶片气孔的密度和开度，蒸腾速率加快使叶片呈现卷曲，引起叶片光合色素质量分数显著下降，导致水稻突变体叶片发生早衰，表明可能通过调控下游的些目标基因从而调控气孔密度的表达，阳性转基因植株从分蘖期开始，植株逐渐变矮，叶片变短且内卷，光合色素质量分数显著下降叶片卷曲部位泡状细胞明显变小，单位面积气孔数目和气孔导度增加，蒸腾速率加快使叶片呈现卷曲分蘖期叶片光合色素质量分数显著下降，导致植株成熟期株高变矮有效穗数减少结实率和千粒质量降低表明通过调控细胞增殖和扩张控制器官大小，改变叶片气孔密度和开度，从而影响光合作用对于水稻器官大小的调控，目前仅报道了等少数几个调控因子，是水稻形成分蘖顶端分生初始化分生组织非常重要的同源转录因子同时，水稻白等相关基因对野生型涪恢和突变体进行定量表达分析，结果表明，与野生型涪恢相比较，突变体正调控表皮细胞不对称分裂，增加叶片气孔密度和开度的调控因子和保卫细胞离子通道蛋白表达量极显著升高，而抑制表皮细胞不对称分裂的调节因子，液泡膜逆向转运蛋白和水通道蛋白表达量极显著降低图，表，该结果与植株整体大小变小叶片变短且内卷叶片气孔密度和开度增加叶片蒸腾速率加快引起叶片卷曲的干涉阳性转基因植株表型致图水稻抽穗期基因的表达分析和浅析利用干涉研究水稻基因功能情况农业生物学论文物器官发育过程中通过调控细胞增殖和扩张从而控制器官大小和光合作用这为下步研究在水稻器官发育调控网络中的功能奠定了基础参考文献陈蒙，刘海峰山葡萄基因的克隆表达及遗传转化分析西南大学学报自然科学版，龚晓平，王楠，况晓明，曾正明，张长伟，李加胜，刘勤，张致力，何光华，罗挺利用干涉研究水稻基因的功能西南大学学报自然科学版，基金重庆市重点基础科学与前沿技术研究项目重庆市基础研究与前沿探索项目浅析利用干涉研究水稻基因功能情况农业生物学论文卫细胞液泡积累的过程钙调蛋白作为钙离子的主要感受器，以信使途径参与了干旱和引起的地上部叶片气孔开闭的胞间信号传导过程水通道蛋白，参与调节叶肉细胞内氧化碳的运输，影响植物叶片气孔运动及光合作用本研究中，与野生型涪恢相比较，突变体正调控表皮细胞不对称分裂，增加叶片气孔密度和开度的调控因子和保卫细胞离子通道蛋白表达量极显著升高，而抑制表皮细胞不对称分裂的调节因子调控叶片气孔开度的质膜上的泵家族基因和水通道蛋白表达气孔数目比叶片正面气孔数目多相比于中花，干涉转基因植株，和的正面叶片单位面积气孔数目分别增加了，和，反面叶片单位面积气孔数目分别增加了，和抽穗期对中花和个干涉转基因植株叶片气孔全开半开和全闭种状态的数量进行了统计，结果显示和气孔全开状态百分比分别为，和，显著高于中花的，而，和气孔全闭状态百分比分别为，和，显著低于中花的图干涉转基因植株下调了，导致叶片气孔密度和开度显著增加图基因的下调增加了水稻叶片气孔密度和影响气孔的开度在成熟期和开度类似的研究表明，个属于级同源框亮氨酸链家族的同源框转录因子的激活表达，使气孔的密度减少提高其抗旱能力作为植物气孔密度和开度的正调控因子，转录因子促进拟分生组织母细胞的形成，调控起始不等分裂扩增不等分裂和间隔不等分裂，而终止拟分生组织细胞的干细胞活性并促进其分化为保卫母细胞通过抑制保卫母细胞的分化负调控气孔发育，在叶表皮气孔细胞中广泛表达，反向转运体主要负责将胞质中多余的和储存在液泡里，同时将从液泡排到胞质中，拟南芥气孔开启依赖和在基因被证明是明显促进根的顶端分生组织和冠根的形成同样，水稻和基因被证明促进顶端分生组织处于未分化状态水稻突变体发芽之后表现为促进顶端分生组织的形成水稻和编码同源框蛋白基因双突变体表现为顶端分生组织不发达，结果表明在水稻胚胎形成期间需要这个基因激活或促进顶端分生组织形成本研究的蛋白属于同源框亚科，包含个功能域个同源结构域和个植物特有未知功能结构域水稻同源基因和其他同源框孔发育相关基因的表达量分析表实时定量分析所用引物讨论植物成熟器官的形成需要经历两个过程首先通过紧密协调的细胞生长与细胞分裂实现细胞增殖，随后转为伴随着核内复制的细胞扩展与分化，这两个过程是连续进行的，许多基因能通过转录调节蛋白酶体合成或降解植物激素调节或松弛细胞壁小调控等途径作用于这两个过程调控器官的大小基因编码包含段植物特定的结构域的同源盒基因，在水稻根或顶端分生组织居间分生组织和维管束细胞组织部位高表达，并参与调控顶端生长和侧生器官原基的细胞分裂和细胞扩展过程本文利用干涉下调干涉转基因植株农艺性状调查结果表明，与中花相比较，阳性干涉转基因植株，和的株高有效穗数和千粒质量显著降低，结实率极显著降低表由于功能的缺失影响了细胞增殖和扩展，使器官细胞数目变少和细胞大小变小，植株表现出株高变矮有效穗数减少结实率和千粒质量降低表中花和个干涉转基因植株，和农艺性状分析实时定量分析结果表明，基因在所有器官中表达，其中在幼嫩的叶片和叶鞘中表达水平较高图用以调控气孔密度和开度相关基因保卫细胞离子通道调控基因液泡膜逆向转运蛋白及水通道蛋浅析利用干涉研究水稻基因功能情况农业生物学论文部位泡状细胞明显变小图生长期时，对气孔密度增加的转基因植株叶片取样在常温条件下每隔称量叶片鲜质量次，直到，然后进行失水率分析图，结果表明干涉转基因植株下调了，显著增加了叶片气孔导度，引起叶片失水速度加快进步检测抽穗期干涉转基因植株光合色素质量分数，结果与中花相比，个干涉转基因植株光合色素质量分数显著降低图图基因的干涉验证为了验证基因是否调控水稻气孔发育和运动，通过电镜扫描大小的中花和个干涉转基因植株叶片气孔，观察比较气孔密度和开度叶片上下表面气孔的数量和分布如图至图，每张叶片反扩增程序为预变性变性，退火，延伸，循环次扩增后，退火溶解每次循环增加，循环次进行溶解曲线分析实时在上运行，数据用软件进行分析结果与分析基因进化树分析结构域分析结果表明，蛋白含有个氨基酸碱基，编码包含段植