公司培养箱美国公司型立式压力蒸汽灭菌锅上海申安医疗器械厂多功能检测仪美国公司型生物安全柜上海力新仪器有限公司超净工作台型生化培养箱上海博迅实业有限公司医疗设备厂型解剖显微镜日本公司相机上海土森视觉科技有限公司型精密电子天平中国公司。方法山豆根提取物的制备山豆根例例新中医,王兴远,张维明群体性急性山豆根中毒的救治体会附例报告华西医学,杨雪,夏东胜,高建超,等例山豆根不良反应文献分析中国药物警戒,王晓平,陈聚涛,肖倩,等中药山豆根的神经毒性从人到动物自然杂志,吕美玲,黄智锋,陈琳婧,等院张含山豆根饮片处方的用药分析世界中西医结合杂志,张良,唐敏,何洁院年山豆根中药处方用药及配伍合理性分析中国药业,李秋萍,缪剑华,宋志军,等山豆根非生物碱化学成分研究进展中国现代中药,程钱山豆根指纹图谱含量测定及成分分析研究北京北京中医药大学,王成,龚莉虹,郭朝成,等模式生物斑马鱼在中药药效物质筛选中的应用进展中草药,彭蕴茹,韦英杰,丁永芳,等基于斑马鱼模型的药物毒性研究进展与中药毒性研究新策略中草药,段亚辉,张云,王雪,等基于模式生物斑马鱼的款冬叶肝肾毒性比较研究中草药,山豆根黄酮类成分对斑马鱼的急性毒性研究中药治疗论文用,且前期研究发现山豆根生物碱类成分主要集中于,与文献报道中的山豆根药材生物碱类为治疗肝炎的主要活性成分相符,。各组分对和细胞存活率均具有定的抑制作用,表明山豆根生物碱部位和非生物碱部位均可能是潜在的毒性部位,其中对种细胞存活率的抑制作用最强,推测其可能为主要的毒性部位,表明山豆根中的脂溶性小极性成分可能是山豆根潜在的毒性成分。分析的化学成分,发现黄酮类成分马卡因和山豆根酮是其含量最高的成分。苦参碱和氧化苦参碱是山豆根的主要有效成分,也是山豆根可能的毒性成分。本研究选择中的主要成分马卡因山豆根酮以及山豆根主要生物碱类成分苦参碱氧化苦参碱,考察其细胞毒性,结果显示,山豆根酮对细胞活力的抑制作用与苦参碱氧化苦参碱相近,对和细胞活力的抑制作用强于苦参碱和氧化苦瘤细胞毒性实验,对山豆根提取物组分及主要单体成分逐步进行筛选,确定山豆根提取物主要的细胞毒组分,鉴定细胞毒组分中主要的化学成分,评价细胞毒组分中主要成分的细胞毒性再进步利用斑马鱼急性毒性模型,对鉴定的细胞毒成分进行急性毒性评价。体外细胞模型用于毒性成分快速高效的初步筛选,已被广泛认可,但由于毒性作用的复杂性,体外筛选的结果需要进步的体内毒性研究验证。斑马鱼作为种新型模式动物,其与人类的基因组序列高度相似,相比哺乳动物,斑马鱼具有体透明易观察用药少易操作周期短等特有优势,逐渐被广泛应用,。近年来模式生物斑马鱼对药物在体内肝毒性,肾毒性神经毒性,心脏毒性,等早期毒理学评价中应用较广,因其具备细胞模型高通量筛选的优势,且兼顾体内动物模型近似人的整体生物反应特点,日益被认可,。基于斑马鱼模型的中药毒性研究有助于快速得到显,主要表现为肝毒性神经毒性心血管毒性肾毒性等,其中肝毒性在各剂量下均表现明显,且肝脏组织病理切片显示山豆根酮可诱发斑马鱼肝脏损伤,表明肝脏可能为山豆根酮的主要毒性靶器官。结论山豆根酮为山豆根潜在的毒性成分之。关键词山豆根山豆根酮急性毒性斑马鱼黄酮山豆根又名广豆根越南槐根,是豆科植物越南槐根和根茎,具有清热解毒消肿利咽的功效,临床用于治疗火毒蕴结乳蛾喉痹咽喉肿痛齿龈肿痛口舌生疮等症状,。山豆根入药的中药制剂如桂林西瓜霜清咽润喉丸清膈丸等均收录于中国药典,山豆根对肝炎哮喘慢性支气管炎和咽喉肿痛具有较好的治疗效果。然而山豆根临床不良反应报道时有发生中国药典年版首次记载山豆根有毒,山豆根毒性反应涉及体内多个系统器官,可引起肝脏损伤神经毒性心血管系统损害胃肠道反应皮肤过敏反应等。山豆根含有生物碱类黄酮类萜类多糖有机酸等急性毒性实验随机选取尾斑马鱼于孔板中,设置对照组溶媒组和山豆根酮组,每组尾。各给药组加入相应药物,对照组加入标准稀释水,溶媒组加入溶液,于生化培养箱中培养。每天于显微镜下观察并记录斑马鱼毒性发生情况,移除死亡斑马鱼。给药结束后,于显微镜下拍照并记录斑马鱼器官与组织情况,计算心脏脑部眼肝脏肾脏躯干尾脊索运动能力等毒性发生率。斑马鱼肝脏组织病理变化给药结束后,斑马鱼麻醉,用多聚甲醛处死,固定过夜,进行脱水石蜡包埋切片,采用染色,于显微镜下观察斑马鱼肝脏组织病理变化。统计学分析采用和软件进行统计学分析,两组比较采用非配对检验或单因素方差分析。山豆根黄酮类成分对斑马鱼的急性毒性研究中药治疗论文。摘要目的利用体外细胞毒模型结合模式生物斑马鱼急性毒性模型,筛选和评价山组尾斑马鱼肝脏肿大,尾斑马鱼肝变性,尾斑马鱼卵黄囊吸收山豆根酮组尾斑马鱼肝脏肿大,尾斑马鱼肝变性,尾斑马鱼卵黄囊吸收延迟山豆根酮组均出现心脏毒性,山豆根酮组尾斑马鱼心跳减慢,山豆根酮组尾斑马鱼心包水肿尾斑马鱼心跳减慢山豆根酮组斑马鱼躯干弯曲,可见运动频率加快运动轨迹异常等行为异常,表现出神经毒性。山豆根黄酮类成分对斑马鱼的急性毒性研究中药治疗论文。主要化学成分的鉴定精密称取马卡因和山豆根酮,加入超声溶解,混匀,配制成混合对照品溶液。采用高效液相色谱对的主要化学成分进行表征。苦参碱氧化苦参碱马卡因和山豆根酮对和细胞活力的影响分别精密称取苦参碱氧化苦参碱马卡因山豆根酮,加入超声溶解,摇匀,配制成储备液,于保存,使用前以培养箱中培养。每天于显微镜下观察并记录斑马鱼毒性发生情况,移除死亡斑马鱼。给药结束后,于显微镜下拍照并记录斑马鱼器官与组织情况,计算心脏脑部眼肝脏肾脏躯干尾脊索运动能力等毒性发生率。斑马鱼肝脏组织病理变化给药结束后,斑马鱼麻醉,用多聚甲醛处死,固定过夜,进行脱水石蜡包埋切片,采用染色,于显微镜下观察斑马鱼肝脏组织病理变化。统计学分析采用和软件进行统计学分析,两组比较采用非配对检验或单因素方差分析。主要化学成分的鉴定精密称取马卡因和山豆根酮,加入超声溶解,混匀,配制成混合对照品溶液。采用高效液相色谱对的主要化学成分进行表征。苦参碱氧化苦参碱马卡因和山豆根酮对和细胞活力的影响分别精密称取苦参碱氧化苦参碱马卡因山豆根酮,加入超声溶解,摇匀,配制成储备液等均收录于中国药典,山豆根对肝炎哮喘慢性支气管炎和咽喉肿痛具有较好的治疗效果。然而山豆根临床不良反应报道时有发生中国药典年版首次记载山豆根有毒,山豆根毒性反应涉及体内多个系统器官,可引起肝脏损伤神经毒性心血管系统损害胃肠道反应皮肤过敏反应等。山豆根含有生物碱类黄酮类萜类多糖有机酸等多种化学成分,以生物碱和黄酮类成分为主,代表性成分包括苦参碱氧化苦参碱马卡因山豆根酮等。对于山豆根毒性物质基础的研究,多集中于中国药典含量测定限定的苦参碱和氧化苦参碱,及其他含量较高的生物碱类成分,对黄酮类等非生物碱类成分毒性研究较少。上海中医药大学安全评价中心研究发现,不同活性组分可能具有不同毒性,山豆根乙醇提取物对斑马鱼模型具有肝毒性,正丁醇氯甲烷部位有心血管毒性和肝毒性,且对小鼠的毒性研究中观察到肝毒性。课题组前期研究发现,肝肾毒性比较研究中草药,葛静,凌洁,宁青,等基于斑马鱼联合评价箭叶淫羊藿的代谢效毒作用中草药,陈影,陈两绵,仝燕,等山豆根药理毒理研究进展中国中药杂志,沙静姝,毛洪奎山豆根注射液肝炎灵注射液中国药学杂志,。摘要目的利用体外细胞毒模型结合模式生物斑马鱼急性毒性模型,筛选和评价山豆根提取物组分及重要单体成分的细胞毒性及对斑马鱼的急性毒性,以期发现山豆根潜在的毒性成分。方法考察山豆根提取物组分及主要单体成分对人心肌细胞人正常肝细胞人肾小管上皮细胞和人神经母细胞瘤细胞的毒性,筛选山豆根中具有较强细胞毒性的组分及主要单体成分,评价其对模式生物斑马鱼的急性毒性,计算斑马鱼的最大非致死浓度致死浓度,和半数致死浓度山豆根黄酮类成分对斑马鱼的急性毒性研究中药治疗论文稀释。按项下方法处理细胞,检测值,计算细胞存活率。山豆根酮对斑马鱼的急性毒性评价最大非致死浓度,致死浓度,和半数致死浓度,的测定随机选取尾斑马鱼于孔板中,设置对照组溶媒组和山豆根酮组,每组尾。精密称取山豆根酮,加入超声使溶解,摇匀,配制成储备液,于保存,使用时以标准稀释水含稀释。各给药组加入相应药物,对照组加入标准稀释水,溶媒组加入溶液,于生化培养箱中培养。每天统计并及时移除死亡斑马鱼,记录各组斑马鱼死亡数量和毒性情况,采用软件绘制斑马鱼浓度死亡率效应曲线,计算山豆根酮对斑马鱼的和鱼的和。图苦参碱氧化苦参碱马卡因和山豆根酮对和细胞活力的影响图和混合对照品溶液的图山豆根酮对斑马鱼的和如表所示,给予山豆根酮,无斑马鱼死亡给予山豆根酮,分别有尾斑马鱼死亡。采用软件拟合,如图所示,山豆根酮对斑马鱼的和分别为。表山豆根酮对斑马鱼的死亡率图山豆根酮对斑马鱼的浓度死亡率曲线山豆根酮对斑马鱼的急性毒性如表和图所示,对照组和溶媒组斑马鱼卵黄囊基本吸收完全,各脏器均未出现明显毒性表型,运动无明显异常山豆根酮组斑马鱼均未出现死亡,山豆根酮
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