1、“.....细胞中若有脂质堆积则可见桔红色脂滴。细胞中荧光素酶活性检测采用荧光素酶报告基因法检测。取对数生长期的细胞，按项下方法接种于孔板中，待细胞铺板融合度超过时，将其随机分为空白对照组组阳性对照剂量设臵参考已有文献，下同和低中高剂量组，每组设个复孔。所有组细胞均瞬时转染报告基因质粒，并于转染后更换完全培养基，继续培养。次日，弃去各孔上清液，空白对照组加入含的新鲜培养基以等体积混合的培养基基于通路探讨降脂的可能机制药物分析论文，空白对照组加入含的新鲜培养基以等体积混合的培养基和高糖培养基为基质，并含有青链霉素双抗美伐他汀，下同，各给药组加入含相应药物的新鲜培养基。培养后，弃去培养基，加入报告基因裂解液振摇裂解，随后加入报告基因裂解底物，使用多功能酶标仪于波长处检测各孔的化学发光值......”。

2、“.....并计算的荧光素酶相对活性荧光素酶相对活性试验组化学发光值试验组蛋白含量空白对照组化学发光值空白对照组蛋白含量。上述试验重复次。基于通路探讨降脂的可能机制药洗次，随后加入相应抗对应标记的山羊抗小鼠抗，对应标记的山羊抗兔抗，稀释度均为∶室温孵育，以溶液清洗次。经试剂显色后，于凝胶成像仪上成像，使用软件分析，以成熟与内参条带的灰度值比值表示的相对表达量，并记录与的相对表达量比值简称为比值。上述试验重复次。细胞内脂质堆积情况观察采用尼罗红染色法观察。取对数生长期的细胞，用完全培养基调整细胞密度后，以个孔接种于孔板中，培养后，按项下方法分组，每组设臵个复孔。空白对照组加入含的完全培养基，各相应药物的完全培养基。培养后，采用法提取细胞，按照逆转录试剂盒说明书转录得，使用试剂盒以实时荧光定量仪进行扩增。反应体系共......”。

3、“.....上下游引物序列见表各。反应条件加热，预变性变性，退火，延伸，共个循环。以为内参基因，采用法分析目标基因的相对表达量。上述试验重复次。表引物序列及产物长度细胞中通路相关蛋白表达检测采用临床实践表明，灵芝具有较好的降脂作用。灵芝酸，分子式为，化学结构式见图是灵芝的主要成分之，具有增强免疫力抗肿瘤抗病毒等药理活性，。基于此，本研究拟以人肝细胞为对象，初步探讨的体外降脂作用，并基于通路探讨其降脂的可能机制，以期为灵芝活性成分研究及其临床应用提供参考。材料仪器型多功能酶标仪德国公司型全能型凝胶成像仪美国公司型实时荧光定量聚合酶链式反应仪美国公司型细胞培养箱型全波长酶标仪美国的氨基酸残基结合。结论可降低细胞的脂质水平，其调控作用可能与抑制信号通路的表达有关......”。

4、“.....年我国人群血脂异常的患病率约为，预计到年，血清胆固醇水平的异常升高将导致我国心血管病事件增加约万例。高血脂症与动脉血管粥样硬化脑梗死心肌梗死型糖尿病等多种疾病的发生密切相关，已严重威胁到人们的生活健康，。目前，临床首选的降脂药物以他汀类为主，主要包括洛伐他汀普伐他汀阿托他汀辛伐他汀等，可通过竞争性抑制羟基甲基戊酰辅酶还原酶来阻断细胞内的羟，弃去培养基，每孔加入，振摇，使用全波长酶标仪于波长处测定各孔的光密度值，并计算细胞的相对活力相对活力试验组值对照组值对照组值。上述试验重复次。摘要目的研究灵芝酸的体外降脂作用，并基于核糖体蛋白激酶固醇调节元件结合蛋白信号通路探讨其可能机制。方法以人肝细胞为对象，采用法考察低中高剂量，下同作用后细胞的相对活力以洛伐他汀为阳性对照......”。

5、“.....并采用尼罗红染色法观察细胞内的脂质堆积情况转染报告基因质粒后，以羟基胆固醇为竞争性抑制羟基甲基戊酰辅酶还原酶来阻断细胞内的羟基甲戊酸代谢通道，从而有效抑制胆固醇的合成。然而，随着临床研究的不断深入，学者发现他汀类药物在发挥降脂作用的同时，还具有诱发肝损伤肌肉毒性肌病肌炎及横纹肌溶解糖尿病胃肠道反应等毒副作用使得其应用受到定限制。因此，寻找安全有效的降脂药物成为医学研究的热点之。固醇调节元件结合蛋白是脂质从头合成的关键转录因子，其下游基因是游离脂肪酸和胆固醇内源性合成的关键限速酶的编码基因，也是降脂药物研发的关键靶点。核糖体蛋白激酶是上游丝氨酸苏氨酸蛋白激酶，可调控的剪切及其进入细胞核的过程，从而促进组和高剂量组细胞中含量以及洛伐他汀组和中高剂量组细胞中含量均显著降低或......”。

6、“.....与空白对照组比较，组和低中高剂量组细胞中的荧光素酶相对活性均显著降低组和中高剂量组细胞中基因，组细胞中基因，高剂量组细胞中基因，组和高剂量组细胞中基因的相对表达量均显著降低组和低中高剂量组细胞中蛋白的相对表达量，组和高剂量组蛋白的相对表达量以及霉帕霉素组和各剂量组基于通路探讨降脂的可能机制药物分析论文基甲戊酸代谢通道，从而有效抑制胆固醇的合成。然而，随着临床研究的不断深入，学者发现他汀类药物在发挥降脂作用的同时，还具有诱发肝损伤肌肉毒性肌病肌炎及横纹肌溶解糖尿病胃肠道反应等毒副作用使得其应用受到定限制。因此，寻找安全有效的降脂药物成为医学研究的热点之。固醇调节元件结合蛋白是脂质从头合成的关键转录因子，其下游基因是游离脂肪酸和胆固醇内源性合成的关键限速酶的编码基因，也是降脂药物研发的关键靶点......”。

7、“.....可调控的剪切及其进入细胞核的过程，从而促进游离脂肪酸胆固醇合成限速酶脂肪酸合成酶和的表量组细胞中含量均显著降低或，各给药组细胞中的脂滴均有所减少。与空白对照组比较，组和低中高剂量组细胞中的荧光素酶相对活性均显著降低组和中高剂量组细胞中基因，组细胞中基因，高剂量组细胞中基因，组和高剂量组细胞中基因的相对表达量均显著降低组和低中高剂量组细胞中蛋白的相对表达量，组和高剂量组蛋白的相对表达量以及霉帕霉素组和各剂量组比值均显著降低或。分子对接结果显示，可通过氢键与型超净工作台苏州苏洁净化设备有限公司型倒臵显微镜日本公司型冷冻离心机美国公司。基于通路探讨降脂的可能机制药物分析论文。摘要目的研究灵芝酸的体外降脂作用，并基于核糖体蛋白激酶固醇调节元件结合蛋白信号通路探讨其可能机制。方法以人肝细胞为对象......”。

8、“.....下同作用后细胞的相对活力以洛伐他汀为阳性对照，采用酶联免疫吸附测定法检测低中高剂量作用后细胞中胆固醇酰甘油的含量，并采用尼罗红染色法观察细胞内的脂质性对照，采用荧光素酶报告基因法检测低中高剂量作用后细胞中荧光素酶的相对活性以为阳性对照，采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测中高剂量作用后细胞中及其下游基因的表达情况以抑制剂抑制剂雷帕霉素为参照，采用法检测细胞中的表达情况以成熟表示以及磷酸化与的相对表达量比值比值利用等软件对与进行分子对接。结果低中高剂量对细胞相对活力无显著影响。与空白对照组比较，洛伐他汀组和高剂量组细胞中含量以及洛伐他汀组和中高剂离脂肪酸胆固醇合成限速酶脂肪酸合成酶和的表达。方法细胞培养将细胞臵于含胎牛血清青链霉素双抗的高糖培养基以下简称完全培养基中，于饱和湿度的培养箱中培养培养条件下同......”。

9、“.....进行传代培养。细胞相对活力检测采用法检测。取对数生长期的细胞，用完全培养基调整细胞密度后，以个孔接种于孔板中，培养后，将其随机分为空白对照组和低中高剂量组，剂量设臵参考本课题组前期预试验结果，下同，每组设臵个复孔。空白对照组加入含的完全培养基，各给药组加入含相应药物的完全培养基。培养后，加入试剂，继续培养值均显著降低或。分子对接结果显示，可通过氢键与的氨基酸残基结合。结论可降低细胞的脂质水平，其调控作用可能与抑制信号通路的表达有关。关键词细胞固醇调节元件结合蛋白信号通路核糖体蛋白激酶灵芝酸脂代谢药物分析高剂量组细胞据成人血脂相关数据统计结果显示，年我国人群血脂异常的患病率约为，预计到年，血清胆固醇水平的异常升高将导致我国心血管病事件增加约万例......”。