1、染致密的颗粒块状荧光即判定细胞凋亡。细胞分组处理后充分洗涤，用胰蛋白酶消化各组细胞，离心洗涤悬浮细胞经过过滤再次离心后加入和染液，常温下避光孵育，加入缓冲液悬浮细胞，上机检测各组细胞凋亡程度，比值越高提示线粒体膜电位越高。免疫蛋白印迹检测蛋白表达细胞经过消化离心裂解后采用水煮法制作蛋白样品，蛋白样品在十烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶中分离，将分离胶中蛋白转至聚偏氟乙烯膜上，根据各个目标蛋白分子量参照内参切膜，经过洗涤封闭后加入以及细胞质抗体孵育，次日清晨充分洗涤加入辣根过氧化物酶标记的抗后孵育，经过显影定影根据灰度判定各蛋白的相对表达量。常的线粒体功能，。病理生理状态下线粒体出现膜通透性改变，随之出现。

2、路和基因调控的生理性死亡，。既往研究发现凋亡在发生及发展过程中具有重要的作用。凋亡启动途径有线粒体途径死亡受体途径及内质网途径。本研究着重研究的是线粒体途径凋亡。生理状态下，和蛋白通过保持线粒体膜的完整性维持正常的线粒体功能，。病理生理状态下线粒体出现膜通透性改变，随之出现胞质蛋白表达降低，而表达增加。结论内质网应激可诱导细胞线粒体途径凋亡。关键词内质网应激凋亡消化系统疾病线粒体非酒精性脂肪性肝病非酒精性脂肪性肝病是发病率较高的消化系统疾病，目前尚无安全有效的治疗手段。既往研究致表明患者肝细胞过度凋亡，但细胞凋亡的调控机制仍不明了，。多种病理生理过程参与细胞凋亡的调控，其中内质网应激在多种疾病细胞凋亡的调。

3、，减轻内质网应激后可降低线粒体途径凋亡率，结果提示内质网应激对的发病有影响。但细胞内质网应激通过何种分子机制诱导细胞线粒体途径凋亡仍有待进步探讨。参考文献赵泽华，刘晓琳，范建高重视非酒精性脂肪性肝病自然史的研究中华肝脏病杂志，常业飞，胡滔，洪颖，等高血糖对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏超微结构及细胞凋亡的影响国际检验医学杂志，敖娜，杨晶，都健利拉鲁肽对棕榈酸诱导细胞凋亡非酒精性脂肪性肝病细胞线粒体凋亡中内质网应激对其影响探究消化内科论文造模和后细胞凋亡率明显上升，相比造模组，加用组细胞凋亡率下降。见图。非酒精性脂肪性肝病细胞线粒体凋亡中内质网应激对其影响探究消化内科论文。染料可穿透细胞，当细胞核或细胞质内可见。

4、降低，而蛋白表达增加，提示内质网应激对细胞凋亡具有促进作用。既往有学者针对内质网应激与凋亡在中的关系进行了研究，认为改善内质网应激可以抑制细胞凋亡。内质网应激可诱导细胞内钙离子稳态失衡，细胞内异常的钙离子水平促使线粒体钙离子超载的发生，线粒体内钙离子的大量增加会打开膜渗透转换孔，膜渗透转换孔开放后引起线粒体膜变化，诱发释放启动线粒体途径凋亡，。结论本研究发现在细胞凋亡和内质网应激非酒精性脂肪性肝病细胞线粒体凋亡中内质网应激对其影响探究消化内科论文通过染色发现抑制细胞内质网应激后肝细胞脂肪沉积明显缓解，结果与既往研究结论致。细胞凋亡是细胞在受到内源性或者外源性信号刺激下为维持细胞内环境稳态而启动的多种信号通。

5、胞胞质蛋白表达降低，而表达增加。结论内质网应激可诱导细胞线粒体途径凋亡。关键词内质网应激凋亡消化系统疾病线粒体非酒精性脂肪性肝病非酒精性脂肪性肝病是发病率较高的消化系统疾病，目前尚无安全有效的治疗手段。既往研究致表明患者肝细胞性脂肪性肝病细胞模型中线粒体途径凋亡的影响。方法采用油酸诱导细胞建立非酒精性脂肪变性细胞模型，将实验细胞分为对照组造模组造模组和苯基丁酸，加入内质网抑制剂组，染色检测细胞内脂肪变性采用染色观察各组细胞凋亡情况及双染法检测各组细胞凋亡率采用法检测各组细胞线粒体膜电位变化。采用免疫蛋白印迹检测内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白及环磷放启动线粒体途径凋亡，。结论本研究发现在细胞凋亡和内质网应激增。

6、变，被释放至胞质中，。因此，和是线粒体途径凋亡关键的启动因子，膜电位改变是线粒体途径凋亡的特征性改变，释放至细胞质是线粒体途径凋亡的关键环节。本研究法检测结果显示造模后细胞下降，结果显示胞质蛋白表达增加，表达降低提示线粒体途径凋亡可能参与的发生及发展。本研究发现在中内质网应激和凋度凋亡，但细胞凋亡的调控机制仍不明了，。多种病理生理过程参与细胞凋亡的调控，其中内质网应激在多种疾病细胞凋亡的调控过程中发挥重要作用，。部分研究报道内质网应激通过影响线粒体参与发病，本研究着重探讨内质网应激对细胞模型凋亡特别是线粒体途径凋亡的影响。法检测线粒体膜电位细胞分组处理后充分洗涤，制成悬浮液后加入荧光探针，工作浓度为，常温。

7、过程中发挥重要作用，。部分研究报道内质网应激通过影响线内质网抑制剂组，染色检测细胞内脂肪变性采用染色观察各组细胞凋亡情况及双染法检测各组细胞凋亡率采用法检测各组细胞线粒体膜电位变化。采用免疫蛋白印迹检测内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白及环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白及线粒体途径凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶淋巴细胞瘤基因相关蛋白的以及细胞质细胞色素法检测线粒体膜电位细胞分组处理后充分洗涤，制成悬浮液后加入荧光探针，工作浓度为，常温下孵育后荧光显微镜观察细胞红绿色荧光强度。以红色与绿色荧光强度的比值来衡量线粒体去极化程度，比值越高提示线粒体膜电位越高。免疫蛋白印迹检测蛋白表达细胞经过消化离心裂解后采。

8、，诱发非酒精性脂肪性肝病细胞线粒体凋亡中内质网应激对其影响探究消化内科论文进行研究，多数结果认为内质网应激对具有促进其发病的作用，本研究通过染色发现抑制细胞内质网应激后肝细胞脂肪沉积明显缓解，结果与既往研究结论致。细胞凋亡是细胞在受到内源性或者外源性信号刺激下为维持细胞内环境稳态而启动的多种信号通路和基因调控的生理性死亡，。既往研究发现凋亡在发生及发展过程中具有重要的作用。凋亡启动途径有线粒体途径死亡受体途径及内质网途径。本研究着重研究的是线粒体途径凋亡。生理状态下，和蛋白通过保持线粒体膜的完整性维持染料双染料荧光探针均购于上海碧云天生物技术有限公司葡萄糖调节蛋白及环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白及。

9、水煮法制作蛋白样品，蛋白样品在十烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶中分离，将分离胶中蛋白转至聚偏氟乙烯膜上，根据各个目标蛋白分子量参照内参染料可穿透细胞，当细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光即判定细胞凋亡。细胞分组处理后充分洗涤，用胰蛋白酶消化各组细胞，离心洗涤悬浮细胞经过过滤再次离心后加入和染液，常温下避光孵育，加入缓冲液悬浮细胞，上机检测各组细胞凋亡率。染色对照组中较少细胞出现凋亡，造模和后细胞凋亡呈时间依赖性增加，相比造模组，加用后细胞凋亡明显减少，见图。图各组细胞内脂肪变性情况图各组细胞自噬情况对照组细胞较少出现凋亡，降，加用后细胞升高。检测显示造模后细胞胞质蛋白表达增加，而表达降低加用后。

10、俞媛洁，郭天，李明，谭诗云内质网应激对非酒精性脂肪性肝病细胞线粒体凋亡影响研究国际检验医学杂志，基金湖北省自然科学基金项目湖北省卫生和计划生育委员会面上项目武汉大学人民医院引导基金项目。摘要目的探讨内质网应激对非酒精亡率均升高。为探讨内质网对细胞的影响，抑制内质网应激后细胞膜电位下降，细胞质蛋白表达降低，而蛋白表达增加，提示内质网应激对细胞凋亡具有促进作用。既往有学者针对内质网应激与凋亡在中的关系进行了研究，认为改善内质网应激可以抑制细胞凋亡。内质网应激可诱导细胞内钙离子稳态失衡，细胞内异常的钙离子水平促使线粒体钙离子超载的发生，线粒体内钙离子的大量增加会打开膜渗透转换孔，膜渗透转换孔开放后引起线粒体膜变。

11、粒体途径凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶淋巴细胞瘤基因相关蛋白的以及细胞质细胞色素抗体购于公司。方法细胞培养在含有胎牛血清的培养基中培养细胞至对数生长期。油酸诱导构建细胞模型进行造模。实验细胞分为组对照组造模组造模增加，减轻内质网应激后可降低线粒体途径凋亡率，结果提示内质网应激对的发病有影响。但细胞内质网应激通过何种分子机制诱导细胞线粒体途径凋亡仍有待进步探讨。参考文献赵泽华，刘晓琳，范建高重视非酒精性脂肪性肝病自然史的研究中华肝脏病杂志，常业飞，胡滔，洪颖，等高血糖对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏超微结构及细胞凋亡的影响国际检验医学杂志，敖娜，杨晶，都健利拉鲁肽对棕榈酸诱导细胞凋亡的影响及其可能机制中华肝。

12、孵育后荧光显微镜观察细胞红绿色荧光强度。以红色与绿色荧光强度的比值来衡量线粒体去极化腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白及线粒体途径凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶淋巴细胞瘤基因相关蛋白的以及细胞质细胞色素的表达。结果与对照组相比，造模组细胞内脂质沉积明显增加与造模组相比，组细胞内脂质沉积明显降低。染色及双染法检测提示与对照组相比，造模后细胞凋亡增加与造模组相比，组细胞凋亡率明显降低。法检测显示与对照组相比，造模后细胞下的影响及其可能机制中华肝脏病杂志，宋霞，陈涛，张炜，等高尖杉酯碱对细胞程序性凋亡的影响及机制研究国际检验医学杂志，郭英黄芪甲苷通过抑制和κ通路诱导胃癌细胞凋亡国际检验医学杂志，吴鹏波，吴晓曼。

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