紫色，为主要结构，还有少量的延伸链红色，与转角绿色，。利用工具在线预测构建蛋白的维结构见图。结果表明，蛋白以蛋白作为模板，序列相似性为。图级结构预测图山茱萸萜类合成途径关键酶基因的克隆与分析中药学，以次生代谢途径为基础，利用基因工程技术，通过改进合成途径的调控元件，重构次级代谢途径是实现大批量合成活性物质的有效方法，而改造其途径的关键工作是对关键酶基因进行克隆和转录调控等。参考文献中国药典部皮文霞，封晓鹏，蔡宝昌，等山茱萸山药对糖尿病小鼠心肌的保护作用中药材，周瑞，唐志书，武婧，等基于抗类风湿关节炎作用评价膜分离技术富集山茱萸抗炎组分的适用性中草药，陈小保，李帅广，易善泽，等阳春砂基因克隆及生物信息学分因家族有多个成员。目前已经有多种药用植物均克隆出了基因但山茱萸中基因的相关研究还较为欠缺。本研究基于高通量转录组测序技术，利用生物信息学的方法，对山茱萸基因及其编码蛋白的结构与功能进行预测。氨基酸序列的同源分析表明，该基因与其他药用植物序列的相似性较高。对蛋白结构域的预测结果表明，蛋白属于超家族。而只是山茱萸基因家族中的员，其生物料。作为药用植物的种，其特有的药用价值的最终来源便是植物次级代谢产生的萜类等有活性的化学成分。但是该类物质含量极低，且野生资源匮乏，常规生产又不足以满足市场需要。因此，急需通过些分子手段来实现山茱萸等药用植物次生代谢物的大量生产。对于植物来说，特定组织中次生代谢物的合成主要是依赖于其合成基因在转录水平上的调控。近年来，利用高通量测序技术对传统药用植物转录组的研究已经成为现代研究的重点，技术的发展极大的推动了转录组学的研究基因的扩增及测序以山茱萸的作模板，构建反应体系扩增基因，依次是，正反向引物各最后用补至终体积。设定的反应程序为预变性持续，设置个循环，变性，退火，延伸，循环结束后，终延伸，程序结束后仪保温。用的琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，凝胶成像仪拍照记录结果，对目的条带进行切胶回收纯化。基因克隆将凝胶回收的扩增产物连接到载体上，转化算法来分析蛋白的亲疏水性，结果见图，蛋白的在第个氨基酸位点得分最低，分值，而最高得分位于第个氨基酸处。总体来看，该蛋白整体的疏水性氨基酸含量要大于亲水性氨基酸，因此初步推定此蛋白为疏水性蛋白。山茱萸萜类合成途径关键酶基因的克隆与分析中药学。方法引物设计与合成以山茱萸转录组序列获得的转录本序列为模板，利用软件设计对特异引物，由北京赛百盛基因技术有限公司合成。引物序列胶成像仪拍照记录结果，对目的条带进行切胶回收纯化。基因克隆将凝胶回收的扩增产物连接到载体上，转化大肠杆菌，并在含氨苄青霉素的平板培养，挑取单菌落若干用于菌落鉴定，验证后选取阳性菌落送至公司测序，并用甘油保存菌种。方法引物设计与合成以山茱萸转录组序列获得的转录本序列为模板，利用软件设计对特异引物，由北京赛百盛基因技术有限公司合成。引物序列，易善泽，等阳春砂基因克隆及生物信息学分析暨南大学学报自然科学与医学版，荆腾，王淋，乌云塔娜，等杜仲橡胶合成相关酶基因的克隆与表达分析植物遗传资源学报，孙宇峰，厉妲，黄颖，等甘草中新细胞色素还原酶基因的克隆与相关生物信息学分析中草药，丘日光，张天缘，杨仕梅，等百脉根转录因子家族的鉴定与生物信息学分析植物遗传资源学报，李志红，段佩玲，徐静雅，杨萌萌，段姗姗，侯小改，侯典云山茱萸萜类合。而只是山茱萸基因家族中的员，其生物学功能以及调控机制还需进步验证。同时也需克隆山茱萸基因家族中的其他成员，分析每个成员的功能以及各成员之间有无协同作用等。本研究为深入解析山茱萸基因家族成员的功能及萜类物质的合成途径提供有效数据。彻底解析药用植物中的基因序列及其作用机制，对明确萜类物质合成途径有很重要的作用，而了解萜类合成过程的分子机制，可以大批量生产有活性的萜类物质，也可以提高些稀有或利山茱萸萜类合成途径关键酶基因的克隆与分析中药学。的提取和的合成将采取的山茱萸叶片及果实放置在液氮中，充分研磨。按照公司的提取试剂盒操作，提取山茱萸总。利用的琼脂糖凝胶电泳检测提取的完整性，并用酶标仪测定其纯度与浓度。得到完整的纯度较高的后，利用提供的方法，将总反转录合成预测，含有长度为的完整，编码个氨基酸。经在线分析工具的分析结果表明，蛋白分子式为，相对分子质量为。其级结构中丙氨酸亮氨酸含量较高，而含量较低的有色氨酸组氨酸，其中共个带正电荷的氨基酸，个带负电荷的氨基酸，其理论等电点值。此编码蛋白的不稳定系数为，表明蛋白相对稳定。基于工具提供的究的重点，技术的发展极大的推动了转录组学的研究，现已广泛应用于药学生物学等领域。目前，已有多种药用植物进行了转录组的研究，并开展了活性成分合成途径关键酶基因的挖掘与分析，为解析这些基因的功能奠定了基础。甲羟戊酸途径合成及其异构体，而还原酶催化的过程是该途径中的首个限速步骤，。还原酶催化合成，该酶的活性与的浓度相关，两者之间相互调控。等研究表明，在模式植物拟。的提取和的合成将采取的山茱萸叶片及果实放置在液氮中，充分研磨。按照公司的提取试剂盒操作，提取山茱萸总。利用的琼脂糖凝胶电泳检测提取的完整性，并用酶标仪测定其纯度与浓度。得到完整的纯度较高的后，利用提供的方法，将总反转录合成。理化性质利用在途径关键酶基因的克隆与分析中草药，。山茱萸萜类合成途径关键酶基因的克隆与分析中药学。基因的扩增及测序以山茱萸的作模板，构建反应体系扩增基因，依次是，正反向引物各最后用补至终体积。设定的反应程序为预变性持续，设置个循环，变性，退火，延伸，循环结束后，终延伸，程序结束后仪保温。用的琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，凝用率低的药用植物的经济价值，极大的助力中药事业的发展。因此，以次生代谢途径为基础，利用基因工程技术，通过改进合成途径的调控元件，重构次级代谢途径是实现大批量合成活性物质的有效方法，而改造其途径的关键工作是对关键酶基因进行克隆和转录调控等。参考文献中国药典部皮文霞，封晓鹏，蔡宝昌，等山茱萸山药对糖尿病小鼠心肌的保护作用中药材，周瑞，唐志书，武婧，等基于抗类风湿关节炎作用评价膜分离技术富集山茱萸抗炎组分的适用性中草药，陈小保，李帅芥中存在个不同的基因都能编码，由此证明了基因家族有多个成员。目前已经有多种药用植物均克隆出了基因但山茱萸中基因的相关研究还较为欠缺。本研究基于高通量转录组测序技术，利用生物信息学的方法，对山茱萸基因及其编码蛋白的结构与功能进行预测。氨基酸序列的同源分析表明，该基因与其他药用植物序列的相似性较高。对蛋白结构域的预测结果表明，蛋白属于超家山茱萸萜类合成途径关键酶基因的克隆与分析中药学种传统药材，不仅是许多中药的成分之，也被用作很多保健品的原料。作为药用植物的种，其特有的药用价值的最终来源便是植物次级代谢产生的萜类等有活性的化学成分。但是该类物质含量极低，且野生资源匮乏，常规生产又不足以满足市场需要。因此，急需通过些分子手段来实现山茱萸等药用植物次生代谢物的大量生产。对于植物来说，特定组织中次生代谢物的合成主要是依赖于其合成基因在转录水平上的调控。近年来，利用高通量测序技术对传统药用植物转录组的研究已经成为现代研。为深入研究的功能，并最终解释山茱萸环烯醚萜苷合成途径的分子机制奠定基础。图蛋白的保守结构域图蛋白的跨膜区预测级结构预测使用软件在线预测蛋白的级结构，结果见图。其中级结构共有种，以螺旋蓝色，和无规卷曲紫色，为主要结构，还有少量的延伸链红色，与转角绿色，。利用工具在线预测构建蛋白的维结构见图。结果表明，蛋白以蛋白作为模板，序列相似性为。维结构预测蛋白的同源性分析将的氨基酸序列进行搜索相似序列，结果显示，与喜树号序列相似性高达。萜类也被称为异戊烯类化合物，是以结构元件为前体的衍生物，该前体是异戊烯基焦磷酸和的异构体，甲基烯丙基焦磷酸。目前在植物体内发现了条合成及其异构体的途径，即甲羟戊酸途径和独立于的非甲羟戊酸途径。途径主要为单萜萜光合色素等物质暨南大学学报自然科学与医学版，荆腾，王淋，乌云塔娜，等杜仲橡胶合成相关酶基因的克隆与表达分析植物遗传资源学报，孙宇峰，厉妲，黄颖，等甘草中新细胞色素还原酶基因的克隆与相关生物信息学分析中草药，丘日光，张天缘，杨仕梅，等百脉根转录因子家族的鉴定与生物信息学分析植物遗传资源学报，李志红，段佩玲，徐静雅，杨萌萌，段姗姗，侯小改，侯典云山茱萸萜类合成途径关键酶基因的克隆与分析中草药，。山茱萸萜类功能以及调控机制还需进步验证。同时也需克隆山茱萸基因家族中的其他成员，分析每个成员的功能以及各成员之间有无协同作用等。本研究为深入解析山茱萸基因家族成员的功能及萜类物质的合成途径提供有效数据。彻底解析药用植物中的基因序列及其作用机制，对明确萜类物质合成途径有很重要的作用，而了解萜类合成过程的分子机制，可以大批量生产有活性的萜类物质，也可以提高些稀有或利用率低的药用植物的经济价值，极大的助力中药事业的发展。因此，现已广泛应用于药学生物学等领域。目前，已有多种药用植物进行了转录组的研究