足里，连续。每组的只用于测定进食量和胃排空率，只用于在体微透析联合技术检测海马谷氨酸含量。见图。在体微透析联合测定海马谷氨酸含量在小鼠自由活动状态下，运用在体微透析技术收集海马中的组织液。用戊巴比妥钠麻醉小鼠后，借助脑立体定位仪于海马植入微透析套管。准备透析前，把套管中的假探针拔出，插入透析探针，将人工脑脊液通过注射泵以的速度注入海马，透析这种带的病毒可以特异性地表达在小鼠海马谷氨酸能神经元上，带绿色荧光，标记谷氨酸能神经元而可以与病毒中的结合，抑制谷氨酸能神经元。病毒表达后，选取只观察病毒表达及验证病毒功能，其中只灌注固定取脑，用于荧光显微镜下观察病毒表达另外只灌流取脑，用于全细胞膜片钳技术验证病毒的功能性明确病毒正确表达及病毒具有功能后，将剩余小鼠随机分为以下组，每组只。对照组正常饲养，不电针电针组电针双侧足里，连续这两组用于脑片膜片钳技术比较海马谷氨酸能神经元的兴奋性化学遗传抑制病毒组禁食，腹腔注射，注射后起效，内有效，后，记录进食量，后取胃，测定胃排空率化学遗传抑制病毒电针组禁食，腹腔注射，后，电针双侧足里，记录进食量，后取胃，测定海马谷氨酸能神经元介导电针足三里调节胃肠的机制针刺论文路对糖尿病大鼠胃传入信息和胃运动的调控青岛青岛大学，江虹，王培军，曾洪武，等针刺足里穴对胃黏膜保护及损伤因子影响与脑功能变化的相关性中华医学杂志，刘伟维，张超，张煜楷，等电针不同神经节段穴位对基因敲除小鼠胃排空的影响中国针灸，覃颖，郭孟玮，蓝莹，等电针不同穴位对肠易激综合征大鼠肠道动力和敏感性的影响针刺研究，邹燃，徐芸，杨云，等电针对功能性消化不良大鼠胃肠动力及胃窦组织的影响湖北中医药大学学报，卜凡优，魏峰，代雪双，等针灸调节胃肠系统功能与中枢核团关系的研究进展针刺研究，龙贤齐，姜会梨，任秀君，等穴位配伍作用的神经体液及免疫机制研究进展针刺研究，卢刚针刺足里穴曲池穴对腹泻大鼠模型结肠运动调节的中枢机制研究武汉湖北中医学院，王柳，申国明，王浩，等电针胃俞募穴对功能性消化不良大鼠胃运动及迷走神经背核甲基天冬氨酸是钙调蛋白依赖蛋白激酶，是谷氨酸能神经元的标志蛋白，小鼠就是在神经元启动子中插入了段酶的基因，系统可与带的病毒特异性结合，因此注射到海马的带的病毒可以特异地表达在小鼠的谷氨酸能神经元上，结果发现电针足里能够激活海马谷氨酸能神经元，增加海马谷氨酸含量，从而可通过海马谷氨酸能受体通路参与对胃运动的调节。进步应用化学遗传技术抑制海马谷氨酸能神经元后，发现电针对小鼠进食量及胃排空率的调节作用不明显，表明海马谷氨酸能神经元在电针调节胃功能中发挥重要作用。文献，表明海马与大脑皮层高位中枢以及下丘脑室旁核迷走背核复合体等与胃运动有关的中枢间存在极其复杂的纤维联系。作为广泛接收上行高级神经中枢控制并对内脏活动起到支配作用的神经核团，是中枢神经系统对胃肠运动调。图各组小鼠进食量和胃排空率的比较讨论足里为足阳明胃经的合穴与下合穴，灵枢时注气邪在腑，取之合灵枢邪气脏腑病形载合治内腑。根据合治内府理论，选取合穴和下合穴治疗腑病是针灸临床常用的经典方法。项随机临床试验表明，足里穴位注射新斯的明能够有效促进胃肠蠕动，可治疗胃癌根治性胃切除术后麻痹性肠梗阻。研究，发现电针足里能够显著改善胃肠道症状，促进正常大鼠功能性消化不良大鼠肠易激综合征大鼠等的胃肠运动及胃排空。本实验以进食量和胃排空率作为反映胃功能的指标，结果显示，电针足里能够显著增加小鼠进食量及促进胃排空，表明电针足里对胃功能具有促进作用。针刺的作用机制是复杂的，但其神经机制是学者们最先关注和研究的。这与神经系统接受来自全身各部的信息，并在各级神经中枢对传入信息进行整合和调控的特点是密切相关的。研究，发现，脑干下丘脑及大脑结果电针对小鼠进食量及胃排空率的影响与正常组比较，电针组小鼠进食量和胃排空率显著提高图各组小鼠进食量与胃排空率的比较电针对小鼠海马谷氨酸含量的影响与对照组比较，电针组小鼠海马谷氨酸含量显著增加毒的表达和功能验证在第部分实验中要标记海马谷氨酸能神经元，记录各组海马谷氨酸能神经元的兴奋性，以及验证海马谷氨酸能神经元活性的抑制，检测进食量和胃排空率的变化，这两个实验都需要海马注射化学遗传抑制病毒。结果表明，化学遗传抑制病毒可以标记海马谷氨酸能神经元，发绿色荧光，病毒在海马谷氨酸能神经元胞体有大量表达脑片灌流后，静息电位基线下调，静息电位的绝对值增加，细胞发生超极化，即与表达在谷氨酸能神经元上的结合，特异性抑制了海马谷氨酸能神经元，表明该病毒具有功能性。见图。图各组位作为基线，然后将的溶解在人工脑脊液中，通过蠕动泵灌流脑片，继续记录段静息电位，如果静息电位下移，发生超极化反应神经元兴奋性下降，说明病毒具有功能性抑制神经元活性。统计学处理采用软件进行统计分析和图表制作，所有数据均以均数标准差−表示，两组间比较采用独立样本检验。以为差异有统计学意义的标准。但是，针刺通过调控海马谷氨酸能神经元活性调节胃功能的研究还鲜见。近年来，由特定药物激活的受体技术已成为应用最广泛的化学遗传学技术，被广泛用于调控特定神经元的活性。此项技术基于原理，将突变型人毒蕈碱受体或以病毒为载体表达于特定神经元内，与氯氮平氧化物，结合后使得特定神经元去极化或超极化，以激活或抑制神经元。本研究重要信号通路。有研究表明中谷氨酸的输入不仅来源于核团内部，同样也来源于下丘脑内其他核团，包括海马前额叶皮层等。鉴于此，海马谷氨酸能神经元是否通过与等形成神经环路参与针刺对胃运动的调节作用尚不清楚，这将是我们下步的研究方向。总之，本研究观察到，电针足里可增加小鼠进食量及促进胃排空，该效应可能与激活海马谷氨酸能神经元有关。但是，海马区谷氨酸能神经元通过何种神经环路参与这个过程，尚需进步探讨。参考文献潘小丽，周丽，王丹，等电针足里对功能性消化不良大鼠胃排空及自噬信号通路的影响针刺研究，王浩，申国明迷走背核复合体是针刺调节胃功能的关键核团中国针灸，王媛中枢不同部位参与针刺调节大鼠胃功能的观察南京南京中医药大学，冯洪珍海马下丘脑腹内侧核通路对糖尿病大鼠胃传入信息和胃运动的调控青岛青岛大学，江虹，王培军，曾大鼠脑干兴奋性神经递质谷氨酸浓度或谷氨酸受体通路促进胃肠运动。我们前期的研究，发现电针胃俞募穴可通过调控脑干迷走神经运动背核及海马中谷氨酸含量或谷氨酸受体甲基天冬氨酸亚单位活性，调节胃运动。另有研究显示电针足里可通过增强中受体介导的突触传递促进胃运动。以上研究主要聚焦在中枢谷氨酸受体通路，但有关海马谷氨酸能神经元是否参与针刺对胃功能的调控尚未见报道。谷氨酸能神经元作为中枢神经系统中最为重要的兴奋性神经元，激活时可释放谷氨酸作为神经递质，介导中枢神经系统大约的突触传递。脑干下丘脑海马等都存在丰富的谷氨酸能神经元，参与许多脑内正常功能，包括对内脏功能的调节。在本研究中，我们聚焦海马谷氨酸能神经元，以小鼠为研究对象是钙调蛋白依赖蛋白激酶，是谷氨酸能神经元的标志蛋白，功能验证结果电针对海马谷氨酸能神经元活性的影响通过的实验结果可以看出化学遗传抑制病毒可以标记海马谷氨酸能神经元，发绿色荧光。因此，可以通过全细胞膜片钳技术钳制发绿色荧光的神经元，检测各组海马谷氨酸能神经元兴奋性。结果显示，与对照组比较，电针足里能够增加海马谷氨酸能神经元兴奋性图各组小鼠海马谷氨酸能神经元兴奋性的比较海马谷氨酸能神经元在电针调节胃功能中的作用通过的实验结果可以看出化学遗传抑制病毒可以在海马谷氨酸神经元表达，且具有功能性。因此，可以通过腹腔注射，抑制海马谷氨酸能神经元，观察电针对其胃功能的影响。结果显示，与化学遗传抑制病毒组比较，化学遗传抑制病毒电针组小鼠进食量及胃排空率虽有升高趋势，但差异无统计学意义。见图。图各组小鼠进食量和胃排空率的比较讨论足里为足阳明胃经海马谷氨酸能神经元介导电针足三里调节胃肠的机制针刺论文助小鼠，以进食量及胃排空率作为评价胃功能的指标，采用由特定药物激活的受体技术和全细胞膜片钳等技术，探讨海马谷氨酸能神经元在电针促进胃功能中的作用，实现从脑区特定神经元水平揭示电针调节胃功能的中枢机制。脑片全细胞膜片钳验证病毒功能性首先制备海马脑片方法同上，膜片钳装置下，借助汞灯，找到发荧光神经元病毒表达部位。玻璃微电极钳制发荧光神经元，电流钳模式下记录神经元静息电位作为基线，然后将的溶解在人工脑脊液中，通过蠕动泵灌流脑片，继续记录段静息电位，如果静息电位下移，发生超极化反应神经元兴奋性下降，说明病毒具有功能性抑制神经元活性。统计学处理采用软件进行统计分析和图表制作，所有数据均以均数标准差−表示，两组间比较采用独立样本检验。以为差异有统计学意义的标位参与电针胃俞募配穴调节胃运动的实验研究中国针灸，张文瑾海马区谷氨酸能神经元对齿状回神经干细胞的调控作用郑州郑州大学，程金波运用光遗传学技术探讨下丘脑室旁核谷氨酸能神经元对血压调节作用的实验研究北京中国人民解放军军医进修学院，王勇海马下丘