生长性状的关联分析生长性状品种基因型品种基因型体重体长体高胸围胸深表各绵羊群体基因与生长性状的相关分析体重体长体高胸围胸深欧拉羊陶塞特德美小尾寒羊第四部分分析与讨论血样的采集及的提取本试验提取所使用的材料为血液，采集过程中，定将抗凝剂与血样混匀后保存，以防血液凝集成块影响的提取。从绵羊血液中提取所使用的方法是本实验室在传统的酚氯仿提取方法的基础上改进的，经过多人的验证，该方法是可行的。该方法的优越性在于步骤简单提取的时间短不需要蛋白酶消化。但在提取过程中要注意以下三点在加入核裂解液之后要轻轻颠倒混匀，以防断裂吸上清时尽量小心，避免吸入未消化完全的蛋白质，保证的纯度在吸取上清液时，要剪枪头，避免因枪头太小而造成的断裂。分析的影响因素在基因突变的分析中起着重要的作用，是现代遗传学研究中对已知基因突变检测和未知基因突变筛查的种有用的工具。方法具有灵敏度高分析简单等特点，因此，广泛应用于各种动植物基因检测中。但很多因素会影响到分析的最佳效果，例如产物的大小纯度和浓度聚丙烯酰胺凝胶的制备，电泳的电压和温度等。在试验中为了得到最佳效果应注意以下几个方面产物的长度产物的长度也是影响分析的主要因素之。理论上可检测出序列中所有碱基的突变位点，实际上的检出率与片段长度有关。有资料表明，用于分析的片段较小时，检测敏感性相应较高。和等认为对于分析小于的序列是行之有效的。现有资料分析表明，片段在时，检出率约为当片段为时，则其检测率约为，当片段为时，则其检出率约为。因此设计引物时，在之间较好。本试验中设计的引物在之间，适合做分析。采用合适的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，所得电泳图谱带型清晰整齐分型好，且测序结果准确率高。产物的纯度和浓度产物的纯度和浓度也影响的检测分析。若扩增时产生较多的非特异性条带，或是有较严重的拖尾现象，就会导致在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳上产生杂带，导致主带和杂带很难分清，影响带型的判断。因此在进行扩增时设计的引物要特异性强而且引物之间不能形成二聚体，引物内最好不要存在发夹结构其次在保证产物浓度的基础上尽量使引物的退火温度高，因为过低的退火温度会导致非特异性产物出现和增多。本试验所设计的引物特异性强，退火温度高，扩增的产物纯度和浓度高，适合下步所需。电泳条件主要的作用是检测基因的突变，因此，条带分离效果的好坏直接影响到带型的判断。恒定的电压和电泳温度在中起着关键的作用。有资料证明在电泳过程中，温度可能对分子内部稳定力的形成及其所决定的单链构象有直接影响，高温可破坏维持构象的次级键，低温则有利于构象的稳定因此为了使单链保持在定的立体构象，电泳应该在较低恒定的温度下进行，般为。电压对也有很重要的影响。电压过高，产热多，凝胶构象可能发生，施工简便，可行走，吊装覆盖范围广。缺点需采购，成本耗费大。需另外配置台吊装设备，给砂浆车加料。在曲线路基地段，曲线内侧为排水斜面，外侧为斜面，可行走。灌浆灌浆时，中转斗下方接灌注软管，灌注软管的两端各装有截断装置。般情况下灌浆过程通过三个改变，电压过低，电泳时间长，可致使分子扩散，条带模糊。电压不但与片段大小有关，还与电泳槽的大小型号有关，可以根据这些因素进行摸索，以找到适合各引物的电压。电泳时间不宜过长，条带分开，能清晰判型为好，另外电泳时间也与电泳槽型号有关。本试验所使用的电泳槽为伯乐小型电泳槽，根据扩增产物的不同，在恒温及适宜的恒定电压下电泳小时不等，都能得到明显清晰的条带，取得较好的实验结果。非变性聚丙烯酰胺凝胶制备制备合适的非变性聚丙烯酰胺凝胶是分析最关键的步，包括丙烯酰胺和,亚甲基双丙烯酰胺的交联度和凝胶浓度的筛选。李其松等认为，高浓度高交联度的凝胶中不同分子条带更易分开，条带清晰，利于判型低浓度低交联度的凝胶中，同泳道中的多个条带之间的绝对距离更远，同样利于不同基因型的判断。本试验经过反复的摸索和筛选认为，产物片段大小在时，采用的聚丙烯酰胺凝胶溶液，配制成的胶浓度，电压为时，效果理想产物片段大小时，采用的丙烯酰胺凝胶溶液，分别配制成和的胶浓度，电压为时，获得了清晰的条带。因此，在实验过程中，交联度和胶浓度的确定要经过反复的筛选才能获得很好的实验结果。对于添加甘油是否会影响检出率报道不，等认为凝胶中加入的甘油可以提高检出率，而刘佳健等则认为凝胶中不加甘油效果好。本研究中所配制的凝胶都没有加甘油，但得到的效果很好。单链的迁移速度受甘油的影响很大，但有的是促进作用，有的是阻碍作用，甘油的这机制尚无定论。因此，在具体实验过程中是否加甘油要经过反复的摸索筛选来确定。基因多态性及其与生长性状相关性分析单核苷酸多态标记作为种新型的分子遗传标记，越来越受到关注，已成为近年来研究的热点之，它既能被用作重要的遗传学工具，也可用于功能基因组学研究分子标记辅助选择的基础是可靠的分子标记，本研究从基因的生理生化功能出发，通过对绵羊基因和基因进行研究，并将遗传标记与绵羊生长性状进行关联分析，以期用于分子标记辅助选择。基因多态性及其与生长性状相关性分析本试验检测了包括藏羊在内的个绵羊类群个个体的基因包括位点的部分片段，发现和三种基因型，且在个绵羊类群中基因型为优势等位基因型，为优势等位基因，等位基因含量较低，在小尾寒羊中发现基因型个体，但没有发现基因型个体。独立性检验表明小尾寒羊在该位点没有达到平衡，这可能由于群体采用同质选配和近亲选配等人工育种手段造成了它们遗传多样性匮乏引起的，也可能与样本数量结构有定的关系。个绵羊类群中多态信息含量均属低度多态，是否能用作分子遗传标记还需进步验证。虽然在国外绵羊群体中确实发现存在双肌臀表型的绵羊，并确认上游处存在的中转斗行走平台。方法布置专门吊装设备，运输中转斗桥上布置可行走的桅杆吊或门吊，吊运中转斗上桥灌浆。亦可采用在桥下另外布置台汽车吊的方式，但在跨河跨路地段吊车吊运中转斗不适用。图桅杆吊吊运中转斗灌浆示意图图小型门吊桥上吊运中转斗优点吊转方便注在同性状中标有不同字母肩标为差异显著。个绵羊类群中各生长性状不同基因型之间最小二乘均值差异不显著。表各因素效应对绵羊灌浆的变形和热处理后的变形，就不会影响螺纹的加工精度。本零件没有上术表面，固不与考虑工艺路线的拟定为保证几何形状尺寸精度位置精度及各项技术要求，必须。选定合理的工艺路线。工艺路线方案序号工序名称工序内容定位基准设备备料锻造锻造毛坯立式锻机热处理退火回火炉锯锯小端，保持总长为锯床车粗车各段外径，均放余量为及右端面，钻中心孔外形及断面车床车调头车右端面钻中心孔及外圆长度外形，表面车床热处理按图要求进行热处理磨精磨各档外圆刃口端面和台阶面中心孔定位外圆磨床清除清洗去毛刺检查按图样技术要求项目检查工艺路线的分析加工方案符合基准先行和基准统原则，而且便于定位和装夹。另外，选择方案时还应考虑工厂的具体条件等要素，如设备能否借用工夹量具等。加工余量的确定工艺路线拟定以后，应确定每道工序的加工余量工序尺寸及其公差。工序尺寸是工件加工过程中，每个工序加工应保证的尺寸，工序尺寸允许的变动范围就是工序尺寸的公差。工序尺寸的确定与加工余量有着密切的关系。零件图上的尺寸和公差就是最终的加工工序尺寸和公差。将此尺寸加上加工余量就是上工序的工序尺寸，公差按其经济精度查表。车床主轴机械加工工艺过程卡工厂名机械加工工艺卡片产品名称及型号落料凸模零件名称零件图号材料名称毛坯种类锻件工件重量毛重牌号尺寸长净重性能每料件数每台件数工序安装工步工序内容同时加工零件数切削用量设备名称及编号工艺装备名称及编号背吃刀量转速进给量夹具刀具量具备料，长的钢锻造锻造毛坯立式锻机热处理调质处理回火炉车车削外圆到数控车床卡盘外圆车刀数控车车右端面去除棒料的长度并钻中心孔外圆车刀，钻孔刀自左向右粗车外轮廓并钻中心孔外圆车刀钻孔刀自左被我引用或参考的论著的作者。参考文献顾崇衍等编著机械制造工艺学陕西科技技术出版社，。倪森寿主编机械制造工艺与装备化学工业出版社，。张进生主编机械制造工艺与夹具设计指导机械工业出版社，。姜敏凤主编工程材料及热成型工艺高等教育出版社，。机械制造工艺及设备设计手册编写组编机械制造工艺及设备设计手册机械工业出版社，。胡家秀主编简明机械零件设计实用手册机械工业出版社，。江南学院肖继德南京金陵职业大学陈宁平主编机床夹具设计第二版机械工业出版社，。倪森寿主编机械制造工艺与装备习题集和课程设计指导书化学工业出版社，。刘越主编机械制造技术化学工业出版社，。赵如福主编金属机械加工工艺人员手册第三版，上海科技技术出版社，。南京工程学院陈于萍主编沈阳大学周兆元副主编互换性与测表面。由于落料凸模外圆表面的设计基准是主轴轴心线，根据基准重合的原则考虑应选择主轴外圆表面作为精基准面。用心轴定位，还能在次装夹中将其它外圆表面及其端面加工出来，有利于保证加工面间的位置精度。为了保证与凸模固定板的内孔配合的外圆轴颈表面作为冲裁刃口的轴颈的同轴度要求，宜按统基准的原则选择基准面。即车与凸模固定板的内孔配合的外圆轴颈表面作为冲裁刃口的轴颈时，以次装夹完成外圆表面和台阶面以及端面的半精加工十五轴类零件的材料毛坯及热处理落料凸模生长性状的关联分析生长性状品种基因型品种基因型体重体长体高胸围胸深表各绵羊群体基因与生长性状的相关分析体重体长体高胸围胸深欧拉羊陶塞特德美小尾寒羊第四部分分析与讨论血样的采集及的提取本试验提取所使用的材料为血液，采集过程中，定将抗凝剂与血样混匀后保存，以防血液凝集成块影响的提取。从绵羊血液中提取所使用的方法是本实验室在传统的酚氯仿提取方法的基础上改进的，经过多人的验证，该方法是可行的。该方法的优越性在于步骤简单提取的时间短不需要蛋白酶消化。但在提取过程中要注意以下三点在加入核裂解液之后要轻轻颠倒混匀，以防断裂吸上清时尽量小心，避免吸入未消化完全的蛋白质，保证的纯度在吸取上清液时，要剪枪头，避免因枪头太小而造成的断裂。分析的影响因素在基因突变的分析中起着重要的作用，是现代遗传学研究中对已知基因突变检测和未知基因突变筛查的种有用的工具。方法具有灵敏度高分析简单等特点，因此，广泛应用于各种动植物基因检测中。但很多因素会影响到分析的最佳效果，例如产物的大小纯度和浓度聚丙烯酰胺凝胶的制备，电泳的电压和温度等。在试验中为了得到最佳效果应注意以下几个方面产物的长度产物的长度也是影响分析的主要因素之。理论上可检测出序列中所有碱基的突变位点，实际上的检出率与片段长度有关。有资料表明，用于分析的片段较小时，检测敏感性相应较高。和等认为对于分析小于的序列是行之有效的。现有资料分析表明，片段在时，检出率约为当片段为时，则其检测率约为，当片段为时，则其检出率约为。因此设计引物时，在之间较好。本试验中设计的引物在之间，适合做分析。采用合适的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，所得电泳图谱带型清晰整齐分型好，且测序结果准确率高。产物的纯度和浓度产物的纯度和浓度也影响的检测分析。若扩增时产生较多的非特异性条带，或是有较严重的拖尾现象，就会导致在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳上产生杂带，导致主带和杂带很难分清，影响带型的判断。因此在进行扩增时设计的引物要特异性强而且引物之间不能形成二聚体，引物内最好不要存在发夹结构其次在保证产物浓度的基础上尽量使引物的退火温度高，因为过低的退火温度会导致非特异性产物出现和增多。本试验所设计的引物特异性强，退火温度高，扩增的产物纯度和浓度高，适合下步所需。电泳条件主要的作用是检测基因的突变，因此，条带分离效果的好坏直接影响到带型的判断。恒定的电压和电泳温度在中起着关键的作用。有资料证明在电泳过程中，温度可能对分子内部稳定力的形成及其所决定的单链构象有直接影响，高温可破坏维持构象的次级键，低温则有利于构象的稳定因此为了使单链保持在定的立体构象，电泳应该在较低恒定的温度下进行，般为。电压对也有很重要的影响。电压过高，产热多，凝胶构象可能发生，施工简便，可行走，吊装覆盖范围广。缺点需采购，成本耗费大。需另外配置台吊装设备，给砂浆车加料。在曲线路基地段，曲线内侧为排水斜面，外侧为斜面，可行走。灌浆灌浆时，中转斗下方接灌注软管，灌注软管的两端各装有截断装置。般情况下灌浆过程通过三个