（定稿）新建生态养殖场项目立项投资计划建议书

用打孔器打出直径滤纸圆片，高压灭菌，备用。

将滤纸圆片分别放入不同浓度的蛋清溶菌酶中浸泡。

用无菌镊子夹取已在溶菌酶溶液中浸渍滤纸片，放在上述培养皿中，每皿五片。

静置后置于恒温培养箱中培养，观察抑菌效果，测量抑菌圈直径。

蛋清溶菌酶最小抑菌浓度及最小杀菌浓度的测定采用液体倍比稀释法测定最小抑菌浓度取灭菌试管支，号依次编号，于无菌操作台上。

取无菌葡萄糖酚红肉汤培养基依次加入各管。

然后向第管中加入浓度为的溶菌酶样品液，充分混匀后，吸出加入第管中混匀，按此法依次重复稀释至第管，第管混匀后吸出混合液弃去。

再分别向管中加入测试菌液，第管中加入测试菌液作阳性对照，第管中加入浓度为溶菌酶样品液后混匀，吸出混合液弃去，不加菌液作生长对照。

将支试管置于恒温培养箱中培养，取出，观察结果，以无菌生长管所含最小稀释度的溶菌酶浓度作为。

最低杀菌浓度的测定从无细细菌生长的各管取少量菌液划线接种于固体营养琼脂培养基上，于培养，观察结果，以营养琼脂培养基上菌落数少于个的平板所含最小稀释度的溶菌酶浓度作为。

结果与讨论蛋清溶菌酶具有胞壁质酶活性，能够通过其活性中心和作用于乙酰胞壁酸和乙酰葡萄糖胺之间的，糖苷键，从而破坏革兰氏阳性细菌表面的肽聚糖层，导致细菌瓦解。

但是革兰氏阴性细菌的肽聚糖位于细胞壁结构的内层，其外侧受到外层脂多糖层的保护，溶菌酶很难直接作用于肽聚糖，但是它对于些革兰氏阴性细菌同样具有杀菌作用。

因此最近的研究提出溶菌酶也存在着独立于水解酶活性的抗菌活性。

此种抗菌活性是基于溶菌酶被水解酶消化水解后形成的更小分子的多肽段，此时的水解活性几近消失，但是却仍然具有抗菌活性，通过观察多肽段的结构电荷分布等研究提出，溶菌酶具有部分阳离子抗菌肽活性。

不同浓度的蛋清溶菌酶对大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌的抗菌活性。

结果溶菌酶对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抗菌活性不同浓度溶菌酶对大肠杆菌及金黄色葡萄球的抑菌效果见图由图可以看出，溶菌酶对两种常见致病菌均有不同程度的抑制作用，并且随溶菌酶浓度增加，抑菌圈明显增大，抑菌效果增强。

其中溶菌酶对大肠杆菌较为敏感，抑菌圈明显大于金黄色葡萄球菌。

在较低浓度下，溶菌酶即可对大肠杆菌产牛抑制作用。

图蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制表为溶菌酶对不同菌株的抑菌圈结果汇总表。

由表可知，溶菌酶对两种菌株的抑菌圈直径与溶菌酶浓度呈正相关。

其中，大肠杆菌对溶菌酶最为敏感，当溶菌酶浓度为时对大肠杆菌产生的抑菌圈仍很大。

溶菌酶对金黄色葡萄球菌的抑制效果很微弱，浓度为时抑菌圈不明显，浓度为时抑菌圈直径约为另外两种菌的半。

由此可得出，溶菌酶对大肠杆菌有良好的抑制效果，在浓度稍高时，对金黄色葡萄球菌也起定抑制作用。

表溶菌酶对不同菌株抑菌结果表菌株不同浓度对致病菌抑菌圈大小，刘素英，日本食品业开发的新型防腐剂，食品科技动态，刘军，顾国维，溶菌酶在环境工程中的应用，环境保护，，，，魏祖怡，潘晓勤，母乳中溶菌酶浓度的测定，南京医学院学报，陈慧英，吴晓英，林影溶菌酶分离纯化方法的研究新进展广东药学院学报祈静溶菌酶的紫外分光光度法检测仪器仪表与分析监测常凯，邸海洋，何昭阳溶菌酶的提取及其在焙烤食品中的应用食品科技石军英，郭雄军，陈劲春鸡蛋溶菌酶生产过程活力动态监控食品科技致谢时光荏苒，如白驹过隙，转眼之间，大学生活已经步入尾声。

在这四年多的日子里，收获的不仅仅是专业知识和实验技能，还有在实验进行中所培养的思维方式和广阔视野。

很庆幸这些年来我遇到了许多良师诤友，无论在学习上还是生活上都给予了我无私的帮助和热心的照顾，让我在诸多方面都得以成长。

在本文完成之际，特别感谢指导老师梁保红工程师从论文的立题构思实验到撰写，都倾注了老师的智慧和才能。

梁老师丝不苟的指导勤奋刻苦的工作作风和积极乐观的人生态度已经并将继续对我今后的工作和生活产生深刻的影响，谨此致以诚挚的敬意和由衷的感谢。

感谢赵润柱老师在实验室中给与的帮助，给我们提供了优越的硬件条件而且在他的领导下，实验室成员之间始终维持着兄弟姐妹般的融洽关系，让大家在个如家般的环境中工作学习。

在实验进行期间，同实验室中的诸多同学给了我许多帮助，在此表示深深的谢意同时其他实验室的师兄弟姐妹和我起度过了人生中令人难忘的段时光，衷心感谢他们的关心和帮助。

最后，感谢直以来给我无限关爱和支持的家人及亲朋好友们。

董磊年月日星期六大肠杆菌金黄色葡萄球菌溶菌酶的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度液体倍比稀释法测得溶菌酶对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度，结果见表。

可知，溶菌酶对两种供试菌株的和分别是大肠杆菌为和，金黄色葡萄球菌为和。

表溶菌酶对不同供试菌株的和菌株溶菌酶对不同供试菌株的和大肠杆菌金黄色葡萄球菌讨论革兰氏阴性菌的细胞壁外层覆盖着大量的脂多糖，细胞表面结构的复杂性决定了细胞表面特性的差异性，如表面电荷表面疏水性以及外膜通透性等，同时也决定了细菌对抑菌剂的敏感程度。

溶菌酶主要作用于细菌的肽聚糖层，由于革兰氏阴性菌的外膜脂多糖的阻碍，溶菌酶较难与肽聚糖相结合，从而使得溶菌酶的抑菌效果不明显。

但是仍然有些革兰氏阴性菌对溶菌酶敏感，说明溶菌酶对革兰氏阴性菌的作用效果受到细胞的些其他特性的影响，这反映出溶菌酶抑菌机制的复杂性。

存在问题由于各类溶菌酶的作用特性强，只对特定的微生物有充份的溶解作用，因此需要充分掌握溶菌酶的酶学特性在最大程度发挥溶菌酶的活力。

目前溶菌酶的产量普遍较低，成本较高，导致溶菌酶的价格比较高，难以得到普遍的推广与应用，下步应着重研究摸索出利用国产廉价原料分离纯化工艺并获得廉价纯化的溶菌酶。

国内企业生产的溶菌酶主要是蛋清溶菌酶，然而从生物材料提取溶菌酶有其固有缺陷受生物材料来源限制，生物材料由于取自不同生物体，保险程度不，难以保证不受病毒和其他有害物质污染，这会造成产品质量不稳定。

由于革兰氏阳性菌的肽聚糖层位于细胞壁外层，因此溶菌酶对大多数革兰氏阳性菌都有较好的抑菌效果而革兰氏阴性菌的肽聚糖层位于细胞膜的中间层，其外部还有细胞外膜物质脂多糖的阻挡，使得溶菌酶难作用模出机构按照模具的结构特征可分为次推出机构定模推出机构二次推出机构浇注系统推出机构带螺纹的推出机构等等。

推出机构的设计要求设计推出机构时应尽量使塑件留于动模侧，由于推出机构的动作是通过注射机的动模侧的顶杆或液压缸来驱动的，所以在般情况下，模具的推出机构设在动模侧。

正是由于这种原因，在考虑塑件在模具中的位置和分型面的选择时，应尽量能使模具分型后塑件留在动模侧，这就要求动模部分所设置的型芯被塑件包络的侧面积之和要比定模部分的多。

塑件在推出过程中不发生变形和损坏为了使塑件在推出过程中不发生变形和损坏，设计模具时应仔细进行塑件对模具包紧力和粘附力大小的分析与计算，合理地选择推出的方式推出的位置推出零件的数量和推出面积等。

不损坏塑件的外观质量对于外观质量要求较高的塑件，塑件的外部表面尽量不选作推出位置，即推出塑件的位置尽量设在塑件内部。

对于塑件内外表面均不允许存在推出痕迹时，应改变推出机构的形式或设置专为推出使用的工艺塑料块，在推出后再将工艺塑料块与塑件分离。

合模时应使推出机构正确复位设计推出机构时，应考虑合模时推出机构的复位，在斜导柱和斜导柱侧向抽芯及其他特殊情况下，还应考虑推出机构的先复位问题等。

推出机构应动作可靠推出机构在推出与复位的过程中，结构应尽量简单，动作可靠灵活制造容易。

推杆的位置应选择在模阻力最大的地方。

有些塑件在型芯或型腔内有较深且脱模斜度较小的凸起，因收缩应力的原因会产生较大的脱模阻力，在该处就必须设置推杆。

推杆位置选择应注意，当塑件各处的脱模阻力相同时需均匀布置，以保证塑件推出时受力均匀，塑件推出平稳和不变形。

推杆位置选择时应注意塑件本身的强度和刚度，尤其是薄壁塑件，应尽量可能地选择在壁厚和凸缘等处，否则很容易使塑件变形甚至损坏。

推杆位置的选择还应考虑推杆本身的刚性。

当细长推杆受到较大的脱模力时，推杆就会失稳变形。

在本模具设计当中，通过具体分析后，采用了顶杆推出机构脱模，因为推杆制造简单，更换方便，滑动阻力小，脱模效果好，设置的位置自由度大，且容易实现标准化。

整个脱模过程包括开模具推出取件闭模推出机构复位等过程。

在此模具设计中，顶杆的形状和位置如下图所示图顶杆的形状位置图推出机构的复位推出机构在注射模工作时，每开合模次，就往复运动次，除了推杆和复位杆与模板的滑动配合以外，其余部分均处于浮动状态。

推出机构在开模推出塑件后，为了下次的注射成型，还必须使推出机构复位。

使推出机构复位最简单最常用的方法是在推杆固定板上同时安装上复位杆，复位杆为圆形截面，每副模具般设置四根复位杆，其位置应对称设在推杆固定板的四周，以便推出机构在合模时能平衡复位。

另种推出机构复位装置为弹簧复位。

弹簧复位是利用压缩弹簧的回复力使推出机构复位，其复位先于合模动作完成。

在活动镶件后端设置推杆时，为了在合模前安放活动镶件，常采用弹簧先复位。

弹簧设置在推杆固定板与支承板之间，设计时应防止推出后推杆固定板把弹簧压死，或者弹簧已被压死而推出还未到位。

设计时还应注意，弹簧应对称安装在以于营养琼脂平板培养基中涂布均匀。

用打孔器打出直径滤纸圆片，高压灭菌，备用。

将滤纸圆片分别放入不同浓度的蛋清溶菌酶中浸泡。

用无菌镊子夹取已在溶菌酶溶液中浸渍滤纸片，放在上述培养皿中，每皿五片。

静置后置于恒温培养箱中培养，观察抑菌效果，测量抑菌圈直径。

蛋清溶菌酶最小抑菌浓度及最小杀菌浓度的测定采用液体倍比稀释法测定最小抑菌浓度取灭菌试管支，号依次编号，于无菌操作台上。

取无菌葡萄糖酚红肉汤培养基依次加入各管。

然后向第管中加入浓度为的溶菌酶样品液，充分混匀后，吸出加入第管中混匀，按此法依次重复稀释至第管，第管混匀后吸出混合液弃去。

再分别向管中加入测试菌液，第管中加入测试菌液作阳性对照，第管中加入浓度为溶菌酶样品液后混匀，吸出混合液弃去，不加菌液作生长对照。

将支试管置于恒温培养箱中培养，取出，观察结果，以无菌生长管所含最小稀释度的溶菌酶浓度作为。

最低杀菌浓度的测定从无细细菌生长的各管取少量菌液划线接种于固体营养琼脂培养基上，于培养，观察结果，以营养琼脂培养基上菌落数少于个的平板所含最小稀释度的溶菌酶浓度作为。

结果与讨论蛋清溶菌酶具有胞壁质酶活性，能够通过其活性中心和作用于乙酰胞壁酸和乙酰葡萄糖胺之间的，糖苷键，从而破坏革兰氏阳性细菌表面的肽聚糖层，导致细菌瓦解。

但是革兰氏阴性细菌的肽聚糖位于细胞壁结构的内层，其外侧受到外层脂多糖层的保护，溶菌酶很难直接作用于肽聚糖，但是它对于些革兰氏阴性细菌同样具有杀菌作用。

因此最近的研究提出溶菌酶也存在着独立于水解酶活性的抗菌活性。

此种抗菌活性是基于溶菌酶被水解酶消化水解后形成的更小分子的多肽段，此时的水解活性几近消失，但是却仍然具有抗菌活性，通过观察多肽段的结构电荷分布等研究提出，溶菌酶具有部分阳离子抗菌肽活性。

不同浓度的蛋清溶菌酶对大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌的抗菌活性。

结果溶菌酶对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抗菌活性不同浓度溶菌酶对大肠杆菌及金黄色葡萄球的抑菌效果见图由图可以看出，溶菌酶对两种常见致病菌均有不同程度的抑制作用，并且随溶菌酶浓度增加，抑菌圈明显增大，抑菌效果增强。

其中溶菌酶对大肠杆菌较为敏感，抑菌圈明显大于金黄色葡萄球菌。

在较低浓度下，溶菌酶即可对大肠杆菌产牛抑制作用。

图蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制表为溶菌酶对不同菌株的抑菌圈结果汇总表。

由表可知，溶菌酶对两种菌株的抑菌圈直径与溶菌酶浓度呈正相关。

其中，大肠杆菌对溶菌酶最为敏感，当溶菌酶浓度为时对大肠杆菌产生的抑菌圈仍很大。

溶菌酶对金黄色葡萄球菌的抑制效果很微弱，浓度为时抑菌圈不明显，浓度为时抑菌圈直径约为另外两种菌的半。

由此可得出，溶菌酶对大肠杆菌有良好的抑制效果，在浓度稍高时，对金黄色葡萄球菌也起定抑制作用。

表溶菌酶对不同菌株抑菌结果表菌株不同浓度对致病菌抑菌圈大小，刘素英，日本食品业开发的新型防腐剂，食品科技动态，刘军，顾国维，溶菌酶在环境工程中的应用，环境保护，，，，魏祖怡，潘晓勤，母乳中溶菌酶浓度的测定，南京医学院学报，陈慧英，吴晓英，林