以于营养琼脂平板培养基中涂布均匀。用打孔器打出直径滤纸圆片，高压灭菌，备用。将滤纸圆片分别放入不同浓度的蛋清溶菌酶中浸泡。用无菌镊子夹取已在溶菌酶溶液中浸渍滤纸片，放在上述培养皿中，每皿五片。静置后置于恒温培养箱中培养，观察抑菌效果，测量抑菌圈直径。蛋清溶菌酶最小抑菌浓度及最小杀菌浓度的测定采用液体倍比稀释法测定最小抑菌浓度取灭菌试管支，号依次编号，于无菌操作台上。取无菌葡萄糖酚红肉汤培养基依次加入各管。然后向第管中加入浓度为的溶菌酶样品液，充分混匀后，吸出加入第管中混匀，按此法依次重复稀释至第管，第管混匀后吸出混合液弃去。再分别向管中加入测试菌液，第管中加入测试菌液作阳性对照，第管中加入浓度为溶菌酶样品液后混匀，吸出混合液弃去，不加菌液作生长对照。将支试管置于恒温培养箱中培养，取出，观察结果，以无菌生长管所含最小稀释度的溶菌酶浓度作为。最低杀菌浓度的测定从无细细菌生长的各管取少量菌液划线接种于固体营养琼脂培养基上，于培养，观察结果，以营养琼脂培养基上菌落数少于个的平板所含最小稀释度的溶菌酶浓度作为。结果与讨论蛋清溶菌酶具有胞壁质酶活性，能够通过其活性中心和作用于乙酰胞壁酸和乙酰葡萄糖胺之间的,糖苷键，从而破坏革兰氏阳性细菌表面的肽聚糖层，导致细菌瓦解。但是革兰氏阴性细菌的肽聚糖位于细胞壁结构的内层，其外侧受到外层脂多糖层的保护，溶菌酶很难直接作用于肽聚糖，但是它对于些革兰氏阴性细菌同样具有杀菌作用。因此最近的研究提出溶菌酶也存在着独立于水解酶活性的抗菌活性。此种抗菌活性是基于溶菌酶被水解酶消化水解后形成的更小分子的多肽段，此时的水解活性几近消失，但是却仍然具有抗菌活性，通过观察多肽段的结构电荷分布等研究提出，溶菌酶具有部分阳离子抗菌肽活性。不同浓度的蛋清溶菌酶对大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌的抗菌活性。结果溶菌酶对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抗菌活性不同浓度溶菌酶对大肠杆菌及金黄色葡萄球的抑菌效果见图由图可以看出，溶菌酶对两种常见致病菌均有不同程度的抑制作用，并且随溶菌酶浓度增加，抑菌圈明显增大，抑菌效果增强。其中溶菌酶对大肠杆菌较为敏感，抑菌圈明显大于金黄色葡萄球菌。在较低浓度下，溶菌酶即可对大肠杆菌产牛抑制作用。图蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制表为溶菌酶对不同菌株的抑菌圈结果汇总表。由表可知，溶菌酶对两种菌株的抑菌圈直径与溶菌酶浓度呈正相关。其中，大肠杆菌对溶菌酶最为敏感，当溶菌酶浓度为时对大肠杆菌产生的抑菌圈仍很大。溶菌酶对金黄色葡萄球菌的抑制效果很微弱，浓度为时抑菌圈不明显，浓度为时抑菌圈直径约为另外两种菌的半。由此可得出，溶菌酶对大肠杆菌有良好的抑制效果，在浓度稍高时，对金黄色葡萄球菌也起定抑制作用。表溶菌酶对不同菌株抑菌结果表菌株不同浓度对致病菌抑菌圈大小,刘素英，日本食品业开发的新型防腐剂，食品科技动态，刘军，顾国维，溶菌酶在环境工程中的应用，环境保护，,,,魏祖怡，潘晓勤，母乳中溶菌酶浓度的测定，南京医学院学报，陈慧英，吴晓英，林影溶菌酶分离纯化方法的研究新进展广东药学院学报祈静溶菌酶的紫外分光光度法检测仪器仪表与分析监测常凯,邸海洋,何昭阳溶菌酶的提取及其在焙烤食品中的应用食品科技石军英,郭雄军,陈劲春鸡蛋溶菌酶生产过程活力动态监控食品科技致谢时光荏苒，如白驹过隙，转眼之间，大学生活已经步入尾声。在这四年多的日子里，收获的不仅仅是专业知识和实验技能，还有在实验进行中所培养的思维方式和广阔视野。很庆幸这些年来我遇到了许多良师诤友，无论在学习上还是生活上都给予了我无私的帮助和热心的照顾，让我在诸多方面都得以成长。在本文完成之际，特别感谢指导老师梁保红工程师从论文的立题构思实验到撰写，都倾注了老师的智慧和才能。梁老师丝不苟的指导勤奋刻苦的工作作风和积极乐观的人生态度已经并将继续对我今后的工作和生活产生深刻的影响，谨此致以诚挚的敬意和由衷的感谢。感谢赵润柱老师在实验室中给与的帮助，给我们提供了优越的硬件条件而且在他的领导下，实验室成员之间始终维持着兄弟姐妹般的融洽关系，让大家在个如家般的环境中工作学习。在实验进行期间，同实验室中的诸多同学给了我许多帮助，在此表示深深的谢意同时其他实验室的师兄弟姐妹和我起度过了人生中令人难忘的段时光，衷心感谢他们的关心和帮助。最后，感谢直以来给我无限关爱和支持的家人及亲朋好友们。董磊年月日星期六大肠杆菌金黄色葡萄球菌溶菌酶的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度液体倍比稀释法测得溶菌酶对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度，结果见表。可知，溶菌酶对两种供试菌株的和分别是大肠杆菌为和，金黄色葡萄球菌为和。表溶菌酶对不同供试菌株的和菌株溶菌酶对不同供试菌株的和大肠杆菌金黄色葡萄球菌讨论革兰氏阴性菌的细胞壁外层覆盖着大量的脂多糖，细胞表面结构的复杂性决定了细胞表面特性的差异性，如表面电荷表面疏水性以及外膜通透性等，同时也决定了细菌对抑菌剂的敏感程度。溶菌酶主要作用于细菌的肽聚糖层，由于革兰氏阴性菌的外膜脂多糖的阻碍，溶菌酶较难与肽聚糖相结合，从而使得溶菌酶的抑菌效果不明显。但是仍然有些革兰氏阴性菌对溶菌酶敏感，说明溶菌酶对革兰氏阴性菌的作用效果受到细胞的些其他特性的影响，这反映出溶菌酶抑菌机制的复杂性。存在问题由于各类溶菌酶的作用特性强，只对特定的微生物有充份的溶解作用，因此需要充分掌握溶菌酶的酶学特性在最大程度发挥溶菌酶的活力。目前溶菌酶的产量普遍较低，成本较高，导致溶菌酶的价格比较高，难以得到普遍的推广与应用，下步应着重研究摸索出利用国产廉价原料分离纯化工艺并获得廉价纯化的溶菌酶。国内企业生产的溶菌酶主要是蛋清溶菌酶，然而从生物材料提取溶菌酶有其固有缺陷受生物材料来源限制，生物材料由于取自不同生物体，保险程度不，难以保证不受病毒和其他有害物质污染，这会造成产品质量不稳定。由于革兰氏阳性菌的肽聚糖层位于细胞壁外层，因此溶菌酶对大多数革兰氏阳性菌都有较好的抑菌效果而革兰氏阴性菌的肽聚糖层位于细胞膜的中间层，其外部还有细胞外膜物质脂多糖的阻挡，使得溶菌酶难作用得稍大。模柄选用压入式模柄。它与上模座孔采用过渡配合。模柄的直径与长度应与所选用冲床的安装模柄孔直接相匹配，模柄装入上模座后，模柄的轴心线对上模上平面的垂直度误差在全长范围内不大于，材料可采用钢。螺钉与销钉螺钉与销钉用于零件安装时的固定和定位。工作零件与窝座配合时则不用销钉。销钉般用两个。螺钉的大小根据凹模厚度选择，查表选取螺钉的型号为。冷冲模常用零件的材料热处理及硬度如下表材料清单零件名称材料热处理硬度冲裁凸模冲裁凹模上下模座凸凹模固定板钢垫板钢卸料板钢导料板挡料销钢模柄导柱导套钢渗碳销钉钢螺钉钢垫圈冲孔落料模压力机的选择压力机的选用是制定冲压工艺和制定模具设计方案的项重要内容。它直接关系到设备的合理使用，冲压工艺的的顺利实现提高模具寿命方便操作以及提高生产效率等系列重要问题。选用压力机，主要是根据冲压工艺的性质，冲压件批量的大小，模具的尺寸和精度，变形力的大小等。压力机的选用包括选择压力机的类型和确定压力机的主要技术参数两项内容。所选用的压力机公称压力应大于计算出来的总冲压力工作台板尺寸压力机的闭合高度和滑块尺寸等应能满足模具正确安装的要求。压力机滑块行程应满足工件在高度上能获得所需尺寸，并在冲压后能顺利地从模具内取出来。由于冲模闭合高度。压力机的最大装模高度应大于或等于冲模闭合高度。按上述要求可选用开式可倾压力机,需要在工作台面上加设垫板。型号为,其主要技术参数为公称压力滑块行程行程次数次最大封闭高度连杆调节长度工作台板厚度工作台尺寸电动机功率模柄尺寸压筋切舌模设计计算弯曲力的计算此产品有压筋部分还有包括切舌部分的力。由于压筋不仅受到材料性能，弯曲方法，模具结构等多种因素的影响，用理论公式计算不但计算复杂而且不定正确，因此在生产中经常采用经验公式来计算。形件弯曲的弯曲力计算式中弯曲线宽度安全系数，般取板料厚度材料抗拉强度弯曲半径。形弯曲部位,则弯曲力顶件力和卸料力值可近似取自由弯曲力的。即由于切舌和冲裁类似，按冲裁公式计算即总的弯曲力压筋切舌模压力机的选择为了确保机械压力机的安全，按经验，可将计算的弯曲力限制在压力机额定压力的，并据此确定压力机的额定压力。按上述要求可选用开式双柱可倾压力机。其主要技术参数为公称压力滑块行程最大封闭高度封闭高度调节量模柄孔尺寸工作台尺寸前后左右工作台板厚度压筋切舌模成形件尺寸的确定凸凹模圆角半径当弯曲件的弯曲圆角半径大于最小弯曲半径，并且没有特殊要求时，则凸模圆角半径就等于工件的弯曲半径。此处及第部分压筋凸模。第二钉螺钉模具自制零件的材料及热处理要求上下模座钢调质压筋切舌凹模压筋切舌凸模固定板钢模具的安装调试冲孔落料模的安装调试确定装配方法和装配顺序采用直接装配法。先分组装配后总装配。分组装配的有凸模和模柄装配。选择凹模为基准件，先装配下模再装配上模，最后装配卸料板等辅助零件。装配要点按装配图标题栏准备模具零部件。装配模柄，将模柄压入到上模座的型孔中，然后用止转销钉用来定位，以于营养琼脂平板培养基中涂布均匀。用打孔器打出直径滤纸圆片，高压灭菌，备用。将滤纸圆片分别放入不同浓度的蛋清溶菌酶中浸泡。用无菌镊子夹取已在溶菌酶溶液中浸渍滤纸片，放在上述培养皿中，每皿五片。静置后置于恒温培养箱中培养，观察抑菌效果，测量抑菌圈直径。蛋清溶菌酶最小抑菌浓度及最小杀菌浓度的测定采用液体倍比稀释法测定最小抑菌浓度取灭菌试管支，号依次编号，于无菌操作台上。取无菌葡萄糖酚红肉汤培养基依次加入各管。然后向第管中加入浓度为的溶菌酶样品液，充分混匀后，吸出加入第管中混匀，按此法依次重复稀释至第管，第管混匀后吸出混合液弃去。再分别向管中加入测试菌液，第管中加入测试菌液作阳性对照，第管中加入浓度为溶菌酶样品液后混匀，吸出混合液弃去，不加菌液作生长对照。将支试管置于恒温培养箱中培养，取出，观察结果，以无菌生长管所含最小稀释度的溶菌酶浓度作为。最低杀菌浓度的测定从无细细菌生长的各管取少量菌液划线接种于固体营养琼脂培养基上，于培养，观察结果，以营养琼脂培养基上菌落数少于个的平板所含最小稀释度的溶菌酶浓度作为。结果与讨论蛋清溶菌酶具有胞壁质酶活性，能够通过其活性中心和作用于乙酰胞壁酸和乙酰葡萄糖胺之间的,糖苷键，从而破坏革兰氏阳性细菌表面的肽聚糖层，导致细菌瓦解。但是革兰氏阴性细菌的肽聚糖位于细胞壁结构的内层，其外侧受到外层脂多糖层的保护，溶菌酶很难直接作用于肽聚糖，但是它对于些革兰氏阴性细菌同样具有杀菌作用。因此最近的研究提出溶菌酶也存在着独立于水解酶活性的抗菌活性。此种抗菌活性是基于溶菌酶被水解酶消化水解后形成的更小分子的多肽段，此时的水解活性几近消失，但是却仍然具有抗菌活性，通过观察多肽段的结构电荷分布等研究提出，溶菌酶具有部分阳离子抗菌肽活性。不同浓度的蛋清溶菌酶对大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌的抗菌活性。结果溶菌酶对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抗菌活性不同浓度溶菌酶对大肠杆菌及金黄色葡萄球的抑菌效果见图由图可以看出，溶菌酶对两种常见致病菌均有不同程度的抑制作用，并且随溶菌酶浓度增加，抑菌圈明显增大，抑菌效果增强。其中溶菌酶对大肠杆菌较为敏感，抑菌圈明显大于金黄色葡萄球菌。在较低浓度下，溶菌酶即可对大肠杆菌产牛抑制作用。图蛋清溶菌酶对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制表为溶菌酶对不同菌株的抑菌圈结果汇总表。由表可知，溶菌酶对两种菌株的抑菌圈直径与溶菌酶浓度呈正相关。其中，大肠杆菌对溶菌酶最为敏感，当溶菌酶浓度为时对大肠杆菌产生的抑菌圈仍很大。溶菌酶对金黄色葡萄球菌的抑制效果很微弱，浓度为时抑菌圈不明显，浓度为时抑菌圈直径约为另外两种菌的半。由此可得出，溶菌酶对大肠杆菌有良好的抑制效果，在浓度稍高时，对金黄色葡萄球菌也起定抑制作用。表溶菌酶对不同菌株抑菌结果表菌株不同浓度对致病菌抑菌圈大小,刘素英，日本食品业开发的新型防腐剂，食品科技动态，刘军，顾国维，溶菌酶在环境工程中的应用，环境保护，,,,魏祖怡，潘晓勤，母乳中溶菌酶浓度的测定，南京医学院学报，陈慧英，吴晓英，林