（定稿）长春市农机研究所秸秆生物颗粒燃料项目投资申请报告6

饱和吸附量干树脂上样液中总黄酮总香豆素的含量上清液中总黄酮总香豆素的含量树脂质量。

大孔树脂的静态解吸附试验将中种静态饱和吸附后的树脂过滤，吸干表面水分，精密加入乙醇，频率次，每隔振摇，间隔振摇，室温静置，取解吸后溶液，测定总黄酮总香豆素的含量，计算树脂的解吸率。

解吸率解吸溶液中总黄酮总香豆素的含量上样液中总黄酮总香豆素的的含量上清液中总黄酮总香豆素的的含量试验结果种大孔吸附树脂的总黄酮总香豆素的吸附与解吸试验结果如下表所示，从表中可以看出大孔吸附树脂对总黄酮总香豆素的静态饱和吸附量均优于其他种树脂，且解吸率也较高，因此综合选择大孔吸附树脂作为以下纯化工艺用树脂。

表种大孔吸附树脂对总黄酮总香豆素的吸附与解吸试验结果树脂型号吸附量解吸率吸附量解吸率吸附量解吸率吸附量解吸率指标成分总黄酮总香豆素型树脂吸附工艺研究吸附工艺正交设计精密量取经过预处理的大孔吸附树脂，选取上柱药液体积吸附速度大孔树脂的径高比作为考察因素，每个因素各取个水平进行正交试验，正交因素水平见表。

吸附完成后用的蒸馏水洗脱，弃去水洗液，采用的乙醇以的速度洗脱，收集醇洗脱液，定容至。

测定醇洗脱液中总黄酮与总香豆素的含量，以及洗脱液的浸膏含量。

计算总黄酮总香豆素的保留率浸膏率及纯度单位浸膏中有效成分的含量。

保留率洗脱液中总黄酮总香豆素的含量上柱液中总黄酮总香豆素的含量浸膏率浸膏重量原药材重量纯度单位浸膏中总黄酮总香豆素的含量表吸附工艺正交设计因素水平表水平因素上样体积流速径高比误差吸附工艺正交试验结果吸附工艺正交试验结果如表所示。

表吸附工艺正交设计结果试验总黄酮保留率香豆素保留率总黄酮纯度总香豆素纯度浸膏率正交试验结果分析以总黄酮纯度与总香豆素纯度权重系数各占评分时发现各因素均无显著性影响，以总黄酮保留率总香豆素保留率权重系数各综合评分，直观分析以上需再生。

本纯化工艺简单高效稳定，树脂可反复使用年以上，乙醇回收后可反复使用，大大降低了成本，适合工业化生产。

参考文献梁茂新建立中药小复方精选系统操作平台的基本构想世界科学技术中药现代化。

国家药典委员会中华人民共和国药典北京化学工业出版社，。

李遇伯，孟繁浩，鹿秀梅，等淫羊藿化学成分的研究中国中药杂志。

国家药典委员会中华人民共和国药典北京化学工业出版社，。

尚振萍，赵庆春，谭菁菁，等骨碎补的化学成分实用药物与临床。

国家药典委员会中华人民共和国药典北京化学工业出版社，。

陈艳，张国刚，余仲平，等蛇床子的化学成分及药理作用的研究进展沈阳药科大学学报徐丽君，黄光英丹参的化学成分及其药理作用研究概述中西医结合研究，孟凡浩中药精选小复方骨疏丹促成骨细胞骨形成作用的研究辽宁省沈阳市沈阳药科大学，。

刘曼骨疏丹促成骨细胞活性的物质基础相关研究辽宁省沈阳市沈阳药科大学，。

李超骨疏丹颗粒制备工艺和质量控制方法及药动学研究辽宁省沈阳市沈阳药科大学，。

刘健伟，陈勇，熊富良，等骨碎补总黄酮提取和大孔吸附树脂纯化的工艺研究中国药学杂志。

史万忠，刘瑾，吕海阳，及方差分析结果如表，所示。

表吸附工艺正交设计直观分析结果上样量吸附速度柱径比误差保留率评分均值均值均值极差表吸附工艺正交设计方差分析结果因素偏差平方和自由度比临界值显著性上样量吸附速度柱径比误差注综合评分从方差分析结果可知柱径比具有显著性差异，因此柱径比选择最佳试验条件。

上样量与吸附速度均无显著性差异，从提高效率和降低生产成本的角度选择上样量，吸附速度。

验证试验为考察最佳吸附条件的稳定性，按照最佳吸附条件进行验证，取预处理好的树脂，使其柱径比为，加入骨疏丹上柱药液生药浓度，以的速率吸附，吸附完成后用的蒸馏水洗脱，弃去水洗液，采用的乙醇以的速度洗脱，收集醇洗脱液，的乙醇定容至。

纯化前后种活性成分的色谱图如图所示，与图比较发现主要色谱峰峰形未发生变化纯化结果如下表所示，表明该工艺稳定可靠。

洗脱液色谱图表纯化前后结果总黄酮保留率香豆素保留率个成分之和总黄酮纯度总香豆素纯度浸膏率纯度之和平均值纯度之和提高倍数上柱药液洗脱液洗脱液洗脱液会堵塞树脂柱，影响分离效果，所以般药液浓度不宜太高，以药液澄清时为好。

本试验在单因素考察时，将骨疏丹方剂分别浓缩成，，，，结果发现时指标成分的保留率及纯度均达到较高水平。

预吸附时间的确定本试验以同样条件吸附后，分别放置小时后洗脱，结果发现均无显著性影响，因此从节约时间的角度选择吸附后立即洗脱。

吸附正交试验中上样体积因素下水平的选择及确定本试验首先通过绘制泄露曲线，找出泄漏点为，即为保留率最理想的情况，但在实际工业生产上，为提高效率，降低成本，因此选择及作为比较，发现保留率差异并不显著，因此选择，同时又通过单因素分别考察了及的上样体积，但发现当上样体积增加到时用乙醇洗脱后树脂上仍残留层药液，因此确定最佳上样体积为。

洗脱正交试验中洗脱体积因素下水平的选择本试验通过绘制乙醇洗脱曲线时发现当乙醇洗脱体积达到时，总黄酮总香豆素已洗脱完全，因此从降低成本提高纯度的角度在正交试验时洗脱体积的水平选择了进行比较。

洗脱流速的确定本试验通过单因素考察发现洗脱流速对指标成分的保留率影响不大，因此从节约时间的角度，将洗脱流速定为。

第四章结论本文采用大孔吸附树脂纯化骨疏丹方剂，其中上样浓度为生药浓度，室温上样，上样体积为，吸附速度为，上样后立即洗脱，水洗体积为，弃去水洗液后，用乙醇洗脱，收集醇洗脱液，用乙醇定容，经紫外测定及测定发现纯度提高倍，个活性成分之和的保留率达以上，该工艺可使树脂重复使用次图，所示，测定个色谱峰的峰面积，通过外标点法计算含量。

图对照品色谱图图上柱药液色谱图浸膏的测定精密吸取上柱药液及吸附洗脱后溶液适量至已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴挥干水分后，将其放入烘箱中，小时后取出放入干燥器冷却，立即称重。

大孔吸附树脂的选择大孔树脂的静态吸附试验取预处理好的种型号非极性弱极性中极性极性干树脂各，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入上柱药液后放于振荡器上，频率次，每隔振摇，间隔振摇，室温静置，使其达到饱和吸附，倾出吸附后的上清液，测定总黄酮总香豆等大。

在论文写作过程中他不厌其烦的帮助我进行修改和改进。

另外，在校图书馆查找资料的时候，图书馆的老师也给我提供了很多方面的支持与帮助。

在此向帮助和指导过我的各位老师表示最衷心的感谢，感谢这篇论文所涉及到的各位学者。

感谢我的同学和朋友，在我写论文的过程中给予我了很多有用的素材，还在论文的撰写和排版过程中所提供的帮助。

由于我的学术水平有限，所写论文难免有不足之处，恳请各位老师和学友批评和指正，致谢人年月日质用量为，时较适宜，诱导的外植体萌芽率达到，其他水平萌芽情况较差，其中，的处理，萌芽率仅为原球茎的增殖培养基在生长调节物质按添加的基础上，通过对比不同用量原球茎的增殖情况得出较为适宜，增值系数达，而用的增值效果最差，增值系数仅为。

培养天后测量平均株高，培养基下增殖株的平均株高达高于其他两组适宜生根的基础培养基及添加物的组合为香蕉汁。

生根率达，控制单变量得出香蕉汁的诱导效果好于苹果汁和土豆汁，的培养效果好于和。

讨论由于影响蝴蝶兰组培快繁的因素很多，如蝴蝶兰品种的选择外植体的选择外植体的消毒处理方法基础培养基的选择生长调节物质的选择及添加量培养温光条件等，该试验是在参考许多学者先前的试验数据的基础上完成的，因取材时间等因素的限制主要研究了诱导原球茎发生增殖生根三个部分，且没有控制全部可变量，最后的试管苗的移栽环节也未完成。

许多数据的可行性还有待进步试验的确定。

在诱导原球茎发生过程，本实验采用的是蝴蝶兰休眠芽的根尖，利用根尖诱导原球茎优点是剪取根尖对母体影响小，外植体多，取材不受季节限值，缺点是诱导率低，且容易褐化死亡，在选择植物生长调节物质时选择而对诱导根尖无明显效果，这有效缓解了诱导率低的问题，活性炭的加入缓解了培养过程的褐变问题。

在原球茎的增殖过程中，尽量将接入培养基的原球茎密度减低，因为试验发现过于密植导致增值缓慢，但由于此试验并未对移植密度对增殖的影响做数据统计及对比，所以适宜的密度仍需进步试验研究。

在生根培养过程中，参考文献多处提到添加椰汁的生根效果较好，由于成本问题，本试验没有完成椰汁添加的试验，仅对比了香蕉汁苹果汁土豆汁的培养效果，所得数据是否能有力支持蝴蝶兰大规模商业培养还有待进步研究。

近年来，随着蝴蝶兰生产量的逐渐增大，已经不再是名贵品种，市场上的销量也趋于平缓，甚至有下降趋势。

所以，国内蝴蝶兰快速繁殖的研究更应该加紧完善现有的技术体系，降低组培成本，以提高经济效益。

参考文献陈俊愉，程绪珂中国花经上海文化出版社，谷祝平，杨兰艳丽神奇的世界四川科学出版社，谢峰蝴蝶兰的组织培养研究广西大学，卜朝阳，李炳橘蝴蝶兰组培快繁商品化生产经济效应分析华中农业大学学报，郑玉忠，张振霞，陈泽华蝴蝶兰组织培养研究进展综述亚热带植物科学，王海娟蝴蝶兰组培的研究进展北京农业，魏琪，李凤兰，胡国富等蝴蝶兰快速繁殖研究进展园艺学报，许杰蝴蝶兰组培快繁技术研究农业科技通讯，张启香，方炎明，张晓平蝴蝶兰的组纪迅猛发展产业之。

蝴蝶兰的观赏价值和经济价值都很高，在世界花卉产业中的素的含量，计算树脂的饱和吸附量。

饱和吸附量干树脂上样液中总黄酮总香豆素的含量上清液中总黄酮总香豆素的含量树脂质量。

大孔树脂的静态解吸附试验将中种静态饱和吸附后的树脂过滤，吸干表面水分，精密加入乙醇，频率次，每隔振摇，间隔振摇，室温静置，取解吸后溶液，测定总黄酮总香豆素的含量，计算树脂的解吸率。

解吸率解吸溶液中总黄酮总香豆素的含量上样液中总黄酮总香豆素的的含量上清液中总黄酮总香豆素的的含量试验结果种大孔吸附树脂的总黄酮总香豆素的吸附与解吸试验结果如下表所示，从表中可以看出大孔吸附树脂对总黄酮总香豆素的静态饱和吸附量均优于其他种树脂，且解吸率也较高，因此综合选择大孔吸附树脂作为以下纯化工艺用树脂。

表种大孔吸附树脂对总黄酮总香豆素的吸附与解吸试验结果树脂型号吸附量解吸率吸附量解吸率吸附量解吸率吸附量解吸率指标成分总黄酮总香豆素型树脂吸附工艺研究吸附工艺正交设计精密量取经过预处理的大孔吸附树脂，选取上柱药液体积吸附速度大孔树脂的径高比作为考察因素，每个因素各取个水平进行正交试验，正交因素水平见表。

吸附完成后用的蒸馏水洗脱，弃去水洗液，采用的乙醇以的速度洗脱，收集醇洗脱液，定容至。

测定醇洗脱液中总黄酮与总香豆素的含量，以及洗脱液的浸膏含量。

计算总黄酮总香豆素的保留率浸膏率及纯度单位浸膏中有效成分的含量。

保留率洗脱液中总黄酮总香豆素的含量上柱液中总黄酮总香豆素的含量浸膏率浸膏重量原药材重量纯度单位浸膏中总黄酮总香豆素的含量表吸附工艺正交设计因素水平表水平因素上样体积流速径高比误差吸附工艺正交试验结果吸附工艺正交试验结果如表所示。

表吸附工艺正交设计结果试验总黄酮保留率香豆素保留率总黄酮纯度总香豆素纯度浸膏率正交试验结果分析以总黄酮纯度与总香豆素纯度权重系数各占评分时发现各因素均无显著性影响，以总黄酮保留率总香豆素保留率权重系数各综合评分，直观分析以上需再生。

本纯化工艺简单高效稳定，树脂可反复使用年以上，乙醇回收后可反复使用，大大降低了成本，适合工业化生产。

参考文献梁茂新建立中药小复方精选系统操作平台的基本构想世界科学技术中药现代化。

国家药典委员会中华人民共和国药典北京化学工业出版社，。

李遇伯，孟繁浩，鹿秀梅，等淫羊藿化学成分的研究中国中药杂志。

国家药典委员会中华人民共和国药典北京化学工业出版社，。

尚振萍，赵庆春，谭菁菁，等骨碎补的化学成分实用药物与临床。

国家药典委员会中华人民共和国药典北京化学工业出版社，。

陈艳，张国刚，余仲平，等蛇床子的化学成分及药理作用的研究进展沈阳药科大学学报徐丽君，黄光英丹参的化学成分及其药理作用研究概述中西医结合研究，孟凡浩中药精选小复方骨疏丹促成骨细胞骨形成作用的研究辽宁省沈阳市沈阳药科大学，。

刘曼骨疏丹促成骨细胞活性的物质基础相关研究辽宁省沈阳市沈阳药科大学，。

李超骨疏丹颗粒制备工艺和质量控制方法及药动学研究辽宁省沈阳市沈阳药科大学，。

刘健伟，陈勇，熊富良，等骨碎补总黄酮提取和大孔吸附树脂纯化的工艺研究中国药学杂志。

史万忠，刘瑾，吕海阳，