学研究中国昆虫科学英乔海暄,段毅豪,马恩波蝗总科部分种类等位基因酶的比较研究英遗传学报马恩波,郑哲民五种稻蝗染色体核型和带带型的比较昆虫学报张大治，戴沛捷蜻蜓目昆虫的提取方法研究宁夏农学院学报张建珍，郭亚平，马恩波不同保存方式下蝗虫组织的提取及分析动物学杂志季维智,宿兵遗传多样性研究的原理与方法杭州浙江科学出版社,谭竹钧,韩雅莉,苏和风雏蝗属六种蝗虫基因组的比较研究内蒙古大学学报自然科学版张民照,康乐飞蝗总抽提及其分析条件的摸索动物学研究田英芳，黄刚，郑哲民，魏朝明种简易的昆虫基因组提取方法陕西师范大学学报自然科学版印红，刘晓丽,王彦芳,张道川,赵晓瑜种改进的昆虫基因组的提取方法河北大学学报自然科学版。液的液的蛋白酶操作方法取样将蝗虫干标本和无水乙醇浸制标本用无菌三蒸水冲洗次用无菌三蒸水浸泡以上,弃水弃去浸泡液,取蝗虫后足股节肌肉,剪碎材料于装有匀浆液液的管中。研磨与离心管相匹配的玻璃棒将样品研磨至匀浆状。加入的和的蛋白酶。水浴水浴，直至混合液消化得很清亮为止。酚抽提在混合液中加入等体积的平衡酚，上下缓慢颠倒十次，切勿剧烈振荡，在台式高速离心机上离心,取上清液。重复步骤直至水相与酚相的界面处看不到白色的蛋白质层为止，取上清液。氯仿∶异戊醇∶抽提上清液中加入等体积的氯仿∶异戊醇，上下缓慢颠倒十次，在台式高速离心机上离心,取上清液再次重复此步骤。沉淀在上清液中加入体积的冷无水乙醇预先置冰箱内沉淀冰箱内放置，离心,弃上清液。洗涤在留有沉淀的离心管中加入的冷乙醇洗涤，在台式高速离心机上离心,倾去上清液。保存自然干燥，加适量或无菌三蒸水溶解，于保存备用。饱和法,试剂及溶液浸泡液。消化液。蛋白酶饱和溶液异丙醇的乙醇。操作方法乙醇固定标本用无菌三蒸水浸泡以上,弃水对干标本,用浸泡液浸泡以上，弃去浸泡液,取蝗虫后足股节肌肉。剪碎材料,加消化液于消化以上，然后加蛋白酶，继续消化。加饱和,涡旋,离心。转移上清,等体积异丙醇沉淀,离心,弃上清。用的乙醇洗涤沉淀，自然干燥，溶解后,于保存备用。法,试剂及溶液缓冲液浸泡标本雌，雄。，图饱和法提取的琼脂糖凝胶电泳图月日标准分子量干制标本，为雌性，雄乙醇浸泡标本雌，雄。，。图法提取的琼脂糖凝胶电泳图月日标准分子量干制标本雌，雄乙醇浸泡标本雌,雄，。结果与分析般认为，电泳检测后，若样品条带整齐无拖尾，则说明较完整，也无杂质。反之，则认为样品有降解或混有杂质。通过检测发现本实验的的部分样品有明显的条带，但都有不同程度的降解。从图可以看出，用蛋白酶消化法提取的总部分在处有亮带，基本无拖尾，说明提取的大分子较为完整。饱和法提取的总从图可以看出，此方法提取的效果相对较差，弥散较大,未出现单条浓带，抹迹现象严重，以至用此方法提取的基因组都无法用以扩增。用法提取的从图可以看出，干标本只有个样品提出了明显的条带，无水乙醇浸泡的标本提取的总有亮带在处,但大部分都有拖尾,且拖尾现象比较严重，说明样品有降解或混有杂质。三种方法比较结果表明，蛋白酶消化法提取所得到的结果显示各有优缺点如下方法蛋白酶消化法，由于蛋白酶的加入，研磨省时省力，无须低温操作，提取的的浓度纯度较好，适用范围广。因此，该方法可以用于对模板质量要求较高的分子研究中，但该方法成本较高，耗时长，酚等药品价格高且对人体有害需要转移上清液多次,有机抽提多次,此过程中有较大损耗，且浪费材料，步骤繁琐。方法饱和法，操作简单，成本低廉，且不用接触酚氯仿等腐蚀性试剂，省时经济适合小型昆虫基因组的提取，但提出的含有的杂质也较多，因而该方法可以用于对模板质量要求不高的分子实验中。方法法，本方法有以下优点无需用酚抽提，省时，经济，又减少了有毒药品对实验人员的侵害适合小型昆虫基因组的提取，其间仅转移上清液两次，有机抽提次，得率高本方法不需要严格的低温操作，其步骤均可在室温进行适合不同处理材料以及其它昆虫的基因组提取，获得的可以满足蝗虫分子系统学研究的需要。不同的标本同标本的不同组织,或不同保存方法的材料,在提取时都会出现难以预料的问题。虽然目前已经发表了很多提取标本的方法,但是迄今为止还没有种通用的提取方法适用于所有的标本提取。因而，不同的标本应根据标本保存状态和不同的实验目的选取不同的提取方法,才能保证研究的顺利进行。实验结果不理想的原因分析因为气候原因未采到新鲜标本，干标本和乙醇固定的标本存放过久，严重降解的化学性质极不稳定,可以通过水解或氧化作用自发降解，提取效果没有新鲜标本好原料过少且研磨不够充分在加药品的混匀或吹吸过程中，动作剧烈或所用的枪头过小造成了片断的断裂在蛋白酶消化法中可能没有把蛋白质消化完全在蛋白酶消化法和法过程中酚的三次抽提和氯仿已戊醇抽提中可能离心转速不够或时间不足，使上清液中还含有较多的杂质，影响了的纯度。此外,在基因组的提取过程中，应尽量保证核酸级结构的完整性，并最大限度地减少污染。为此，在实验过程中注意要简化操作步骤，缩短提取过程，避免使核酸处于高温，过酸或过碱的环境，以减少核酸变性降解等机会，同时在提取过程中注意实验技巧尽量减少化学及机械因素胡婧，刘艳，黄原网翅蝗科部分种类全基因组提取及基因测序陕西师范大学学报自然科学版张建珍，马恩波，郭亚平，陈东华，王燕网翅蝗科四种蝗虫的多态性研究动物分类学报刘波，郑哲民，张迎春，刘缠民稻蝗属基因组提取方法陕西师范大学学报自然科学版庞峻峰，张亚平标本研究进展动物学研究影响。虽然本次提取的结果不是很理想，但是有些样品的主带明显，而扩增要求的模板的质量不是很高，所以这些主带明显样品可以用来做扩增，来进行更深步的研究。本文比较了三种不同提取方法的优缺点，因此可以根据不同的实验条件和目的选择使用。当然随着分子生物学的快速发展，各种不同的提取方法在不断的创新出现，相信这些方法在不断的优化后也可以提取到高质量的基因组来满足更深层次研究的需要。参考文献汪桂玲，郑哲民，黄原蝗总科科蝗虫间带型变异的比较研究陕西师范大学学报自然科学版郑哲民蝗虫分类学西安陕西师范大学出版社,马恩波,郭亚平,郑哲民中国稻蝗属细胞分类的效比重也越来越高，将来无疑会在经济中扮演更加积极和重要的角色。纵观各国历史，中小企业的蓬勃兴起不仅不是政府刻意追求的结果，而且正是由于政府放松对经济的管制而出现的。在必要的政府扶持作用下，更多更重要的是依靠看不见的手，依靠竞争和市场的优胜劣汰起决定作用，同时银行体系的改革对中小企业发展的支持也是非常重要，但更需要中小企业本身的自我提升，因此像新疆新大陆汽车俱乐部这种小企业要解决融资难的问题，必须拓宽融资渠道，增加资金的供给，更需努力提高企业的资信程度，提高务上就具有灵活性，也保证了俱乐部经营的灵活性。提升自身素质，争取有利的发展空间大力推进新疆新大陆汽车俱乐部现代化制度改革。可采取改组联合兼并租赁承包经营和股份合作制出售等多种形式，优化新疆新大陆汽车俱乐部产权结构。同时，改善新疆新大陆汽车俱乐部经营机制，增强其内部融资的压力和动力。同时，新疆新大陆汽车俱乐部要运用科学管理方法，提高资金使用率，要增强自身积累意识，完善以留存收益增补新疆新大陆汽车俱乐部资本金制度，逐步提高新疆新大陆汽车俱乐部自有资金比例。俱乐部无论从自身发展的需要出发，还是从被银行选择培育对象考虑，都应该按照现代化企业发展的要求，建立现代化企业制度，规范内部管理，遵守财务制度，提升领导层和员工的素质，提高对市场的分析和预测能力，提高经营管理水平，加强自身信用建设，使俱乐部成为产品有市场俱乐部有效益使自己成为个诚信守信的客户，进而赢得银行的信任和理解，为自己赢得更广阔的发展空间。建立良好的信用环境俱乐部融资时刻离不开信用二字，没有良好的信用文化和健康的信用环境，俱乐部融资很难顺利开展，应培育企业家的信用意识，提倡和宣扬信用观念，在有借有还的良好信用环境下改善银企之间的关系。应建立俱乐部信用信息平台，实现俱乐部信用管理监督社会化。还应加大对俱乐部工作人员违约的惩罚力度。要减少违约的发生，必须加大对违约的惩罚力度。积极主动地和银行担保公司建立日常的信息沟通机制为商业银行了解企业情况创造条件，俱乐部应该坚持以诚信为本的思想，按照国际通用标准健全自身的企业财务，做到资信状况透明化规范化，提高自身竞争力。拓宽融资渠道，主动筹集资金为解决俱乐部融资渠道狭窄，资金不足的问题，俱乐部还应学会从多种渠道获得资金，积极主动缓解自身融资难困境，利用商业信用从自己的上下游得到资金融通和帮助。俱乐部在采购商品时，应选择愿意对自己提供商业信用的供应商，赊购生产要素。相当于俱情的过程中要有耐心和毅力，不要遇到困难就退缩，只要坚持下去就可以找到思路去解决问题的。而且要学会与人合作，这样做起事情来就可以事半功倍。总之，经历了此次论文的写作过程，我收获了很多，既为大学四年划上了个完美的句号，也为将来的人生之路做好了个很好的铺垫。再次感谢我的大学生活中所有帮助过我并给我鼓励的老师，同学和朋友，谢谢你们,参考文献徐宁破解中小企业融资难题之思考安徽农业大学学报社会科学版刘洪弟我国中小企业融资存在的问题及对策分析财经论坛朱春雷，李晓学研究中国昆虫科学英乔海暄,段毅豪,马恩波蝗总科部分种类等位基因酶的比较研究英遗传学报马恩波,郑哲民五种稻蝗染色体核型和带带型的比较昆虫学报张大治，戴沛捷蜻蜓目昆虫的提取方法研究宁夏农学院学报张建珍，郭亚平，马恩波不同保存方式下蝗虫组织的提取及分析动物学杂志季维智,宿兵遗传多样性研究的原理与方法杭州浙江科学出版社,谭竹钧,韩雅莉,苏和风雏蝗属六种蝗虫基因组的比较研究内蒙古大学学报自然科学版张民照,康乐飞蝗总抽提及其分析条件的摸索动物学研究田英芳，黄刚，郑哲民，魏朝明种简易的昆虫基因组提取方法陕西师范大学学报自然科学版印红，刘晓丽,王彦芳,张道川,赵晓瑜种改进的昆虫基因组的提取方法河北大学学报自然科学版。液的液的蛋白酶操作方法取样将蝗虫干标本和无水乙醇浸制标本用无菌三蒸水冲洗次用无菌三蒸水浸泡以上,弃水弃去浸泡液,取蝗虫后足股节肌肉,剪碎材料于装有匀浆液液的管中。研磨与离心管相匹配的玻璃棒将样品研磨至匀浆状。加入的和的蛋白酶。水浴水浴，直至混合液消化得很清亮为止。酚抽提在混合液中加入等体积的平衡酚，上下缓慢颠倒十次，切勿剧烈振荡，在台式高速离心机上离心,取上清液。重复步骤直至水相与酚相的界面处看不到白色的蛋白质层为止，取上清液。氯仿∶异戊醇∶抽提上清液中加入等体积的氯仿∶异戊醇，上下缓慢颠倒十次，在台式高速离心机上离心,取上清液再次重复此步骤。沉淀在上清液中加入体积的冷无水乙醇预先置冰箱内沉淀冰箱内放置，离心,弃上清液。洗涤在留有沉淀的离心管中加入的冷乙醇洗涤，在台式高速离心机上离心,倾去上清液。保存自然干燥，加适量或无菌三蒸水溶解，于保存备用。饱和法,试剂及溶液浸泡液。消化液。蛋白酶饱和溶液异丙醇的乙醇。操作方法乙醇固定标本用无菌三蒸水浸泡以上,弃水对干标本,用浸泡液浸泡以上，弃去浸泡液,取蝗虫后足股节肌肉。剪碎材料,加消化液于消化以上，然后加蛋白酶，继续消化。加饱和,涡旋,离心。转移上清,等体积异丙醇沉淀,离心,弃上清。用的乙醇洗涤沉淀，自然干燥，溶解后,于保存备用。法,试剂及溶液缓冲液浸泡标本雌，雄。，图饱和法提取的琼脂糖凝胶电泳图月日标准分子量干制标本，为雌性，雄乙醇浸泡标本雌，雄。，。图法提取的琼脂糖凝胶电泳图月日标准分子量干制标本雌，雄乙醇浸泡标本雌,雄，。结果与分析般认为，电泳检测后，若样品条带整齐无拖尾，则说明较完整，也无杂质。反之，则认为样品有降解或混有杂质。通过检测发现本实验的的部分样品有明显的条带，但都有不同程度的降解。从图可以看出，用蛋白酶消化法提取的总部分在处有亮带，基本无拖尾，说明提取的大分子较为完整。饱和法提取的总从图可以看出，此方法提取的效果相对较差，弥散较大,未出现单条浓带，抹迹现象严重，以至用此方法提取的基因组都无法用以扩增。用法提取的从图可以看出，干标本只有个样品提出了明显的条带，无水乙醇浸泡的标本提取的总有亮带在处,但大部分都有拖尾,且拖尾现象比较严重，说明样品有降解或混有杂质。三种方法比较结果表明，蛋白酶消化法提取