院毕业设计论文共页，第页图菌的革兰氏染色图片生理生化特征鉴定生理生化特征鉴定主要实验项目包括在不同温度和试验菌种的生长情况，在不同值.培养基中生长情况，过氧化氢酶实验，运动性检查，明胶液化实验，吲哚实验，硫化氢产生实验，精氨酸产氨实验与糖发酵实验。表菌株生理生化试验结果检测项目结果检测项目结果生长过氧化氢酶实验生长运动生长明胶液化在培养基上生长.吲哚实验在.生长产生在.生长精氨酸产.在含有蔗糖的的张良培养液中。.表示阳性反应表示阴性反应。根据菌种的形态特征与生理生化特性，根据参考资料将初步鉴定为乳杆菌属。接着对菌株进行糖发酵实验，实验结果如表所示。常州工程职业技术学院毕业设计论文共页，第页表菌株糖发酵试验结果检测项目结果检测项目结果葡萄糖产酸甘露醇葡萄糖产气麦芽糖葡萄糖酸盐蔗糖半乳糖核糖纤维二糖木糖甘露糖阿拉伯糖果糖棉籽糖乳糖山梨醇松三糖海藻糖注“，”同上表示弱阳性。根据生理生化实验结果，参考种和，。乳酸菌是正常人畜肠道中极为重要的生理菌群，担负着人畜机体多种重要的生理功能，具有维持人体中微生态平衡作用。而且，乳酸菌能够产生有机酸如乳酸丁酸和醋酸等过氧化氢和细菌素等抑菌物质。这些抑菌物质不仅不破坏食品的风味和组织状态，还可以抑制腐败菌和病原菌的生长，从而防止腐败，延长食品的保藏期。乳酸菌产生的细菌素以其对动物无毒性，易被人体消化道中的蛋白酶降解，不会在体内蓄积引起不良反应等特性，被认为是种具有广阔应用前景的天然食品防腐剂和饲料添加剂。本实验欲从进口干酪中分离乳酸菌，并研究各种乳酸菌对食品中常见致病菌的抑制作用。由于乳酸菌来源于食品，其无毒副作用无残留无抗药性等优点受到人们的关注。乳酸菌在发酵过程中可以产生系列物质，能够抑制或杀死些食物腐败菌，其中起主要抑菌作用的是细菌素，其具有定的热稳定性，易被人体消化道的部分蛋白酶降解，并且不会在体内积蓄引起不良反应。因此，乳酸菌制剂作为种天然防腐保鲜剂，有着广阔的市场前景。常州工程职业技术学院毕业设计论文共页，第页第章材料与方法.材料样品市售进口奶酪培养基培养基液灭菌后混匀。液脱脂奶粉，.溴甲酚绿酒精液.，蒸馏水.，开盖灭菌液酵母膏，琼脂，蒸馏水。.，灭菌液灭菌后在无菌状态下混匀后倒平板。液体培养基蛋白胨牛肉膏酵母膏葡萄糖乙酸钠柠檬酸三铵....吐温.蒸馏水。灭菌。培养基蛋白胨.，酵母提取物.，无机盐溶液.盐溶液成分无水.，.，.，.，.，.，将和起溶解于蒸馏水中，再加蒸馏水，边搅拌边缓慢加入其他盐类，继续搅拌直到全部溶解，加蒸馏水定容至，混合后贮备于。培养基在基础培养液内加入.葡萄糖。培养基牛肉粉月示胨三号胆盐.枸橼酸钠.乳糖枸橼酸铁硫代硫酸钠.中性红.煌绿.琼脂蒸馏水。出的菌种接种到试管中在条件下扩大培养，在接种到小三角瓶中扩大培养。乳酸菌的抑菌实验管碟法将扩大培养的菌液进行离心条件在培养皿中加入约的牛肉膏蛋白胨培养基常州工程职业技术学院毕业设计论文共页，第页待第层培养基冷却后，加入混有致病菌的培养基约待培养基冷却后，加入牛津杯进行固定在牛津杯中加入菌液及无菌水进行对照等边三角形将培养基放入培养箱中进行培养条件，。抑菌物质的确定.酸对乳酸菌抑菌活性的影响初筛菌株的发酵上清液，用溶液调节值为.或用乳酸调节改良液体培养基值与发酵上清液的值相同，参照抑菌试验所述方法作抑菌活性对比。.过氧化氢对乳酸菌抑菌活性的影响过氧化氢酶溶解在的磷酸缓冲液.中配成母液，加入到发酵液中使过氧化氢酶的终浓度为，在水浴中温育后取出，检测过氧化氢酶处理后发酵液的抑菌活性。.酶对发酵上清液抑菌效果的影响筛选菌株发酵上清液分别用的蛋白酶胰蛋白酶处理，然后进行抑菌试验，同时设未经酶处理的发酵上清液作为对照。乳酸菌的鉴定乳酸菌的鉴定包括形态学观察和生理生化实验，具体参见根据伯杰细菌鉴定手册第八版与乳酸细菌分类鉴定与实验方法。.形态学观察挑选出产抑菌物质的菌株，在合适的培养基上划线培养，待长出单菌落观察其菌落特征，并进行革兰染色，在光学显微镜下试管，以防破坏乙醚层影响结果观察，如有吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应。产硫化氢实验将普通滤纸剪成约宽的纸条，长度根据试管和培养基高度而定。用浓度为的乙酸铅将纸条浸透，然后置于烘干，放入培养皿或试管内，灭菌后备用。将新鲜试验菌培养物接种于培养液后，用无菌的镊子夹取乙酸铅纸条悬挂于接种管内。下端接近培养基表面而不接触液面，上端用棉塞塞紧。试验中设空白对照，在未接种的试管培养上悬挂乙酸铅纸条。另外接种已知菌的阴性反应作对照。置于培养培养，进行观察比较，纸条变黑为阳性反应。糖发酵实验将需要测定的糖或醇类等碳水化合物加入基础培养基中，分装含培养基的试管。分别取.鉴定菌株接到灭菌后的碳水化合物培养基中培养，振荡培养。检测时取培养液少许置于比色盘内，同时取未加碳水化合物的培养液作为对照，滴加试剂比较颜色的变化，记录产酸的强弱。乳酸菌的保藏将具有较强抑菌活性的乳酸菌活化培养，并加入定的保护剂，在及真空下冻干后，放冰箱贮藏。常州工程职业技术学院毕业设计论文共页，第页第章结果与分析.抑菌实验结果通过培养基，从进口奶酪中共筛选出株乳酸菌。经管碟法抑菌实验验证，从奶酪中分离出的株乳酸菌分别命名为和对金黄色葡萄球菌单增李斯特菌阪崎肠杆菌鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌都有很好的抑制作用，结果见表。其中，抑菌效果最佳，如图所示。图菌株抑金黄色葡萄球菌实验结果表三种乳酸菌对各指示菌的抑菌圈直径单位菌株编号金黄色葡萄球菌单增李斯特菌阪崎肠杆菌鼠伤寒沙门氏菌大肠杆菌各种乳酸菌对革兰氏阳性菌的抑菌效果优于革兰氏阴性菌，这种抑制特性可能与细菌之间的同源性有关。.抑菌物质的确定酸对乳酸菌抑菌活性的影响在排除酸的作用后，将发酵液及用酸处理后的发酵液利用管碟法以金黄色葡萄球菌为指示菌进行抑菌实验，仍有定的抑菌作用，见表。表原始发酵上清液及调节后的抑菌圈大小样品抑菌圈直径发酵上清原液．调节后的发酵液．活率下降百分率．料经过删选比对，菌株的生理生化特性与干酪乳杆菌最相似。常州工程职业技术学院毕业设计论文共页，第页第章结论.分离纯化结果利用培养基分离出市售干酪中单菌落，经观察菌落形态与革兰氏染色初步判定为乳酸菌。.抑菌试验的结果从市售奶酪中分离出的种乳酸菌分别编号为。染色后显微镜观察，均为革兰氏阳性菌，均为杆状菌。通过对种指示菌进行抑菌试验，通过管碟法抑菌实验筛选出种来源于进口奶酪的抑致病菌活性较高的乳酸菌。.鉴定结果通过形态学观察与生理生化实验，菌株初步鉴定为干酪乳杆菌。常州工程职业技术学院毕业设计论文共页，第页参考文献杨洁彬，葛兴华．乳酸菌生物学基础与应用．北京中国轻工业出版社，．朱小乔，刘通讯．极具潜力的天然防腐剂．食品与发酵工业．乔发东，吴秀芳，南庆贤，等。浓缩乳酸菌发酵剂的现状。中国乳品工业.常州工程职业技术学院毕业设计论文共页，第页吴玲，潘道东，刘海燕.瑞士乳杆菌冻干保护剂的选择.食品与机械.姚丽娅，徐为民，诸永志.产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定.食品工业科技.凌代文.乳酸细菌分类鉴定及实验方法.北京中国轻工业出版社，．布坎南，吉布斯.伯杰细菌鉴定手册第八版.第版，北京科学出版社，.致谢在实验和论文撰写过程中，要谢谢谢我的指导教师张梦琴的指导与督促，同时也感谢她的谅解与包容。没有张梦琴老师的帮助也就没有今天的这篇论文。完成论文历程是艰苦的，但又是快乐的，因为我收获着硕果，提升了能力。在此过程中，有众多的老师和同学帮我搜集查阅资料，校对文章，同时对所有关心过我的领导老师同学表达我由衷的敬意！常州工程职业技术学院毕业设计论文常州工程职业技术学院毕业设计论文共页，第页过氧化氢对乳酸菌抑菌活性的影响乳酸菌在代谢过程中产生的强氧化剂过氧化氢也可以抑制细菌的生长，尤其是抑制菌的生长，因此必须排除过氧化氢的干扰。发酵上清液用过氧化氢酶处理，以未经过氧化氢酶处理的发酵上清液为对照，以金黄色葡萄球菌为指示菌进行抑菌实验，结果见表。表原始发酵上清液及过氧化氢酶处理后的抑菌圈大小样品抑菌圈直径发酵上清原液．过氧化氢酶处理后的发酵液．活率下降百分率.酶对发酵上清液抑菌效果的影响在排除有机酸和过氧化氢对指示菌的抑制作用后，为了确定抑菌物质是否具有蛋白质性质，实验用胰蛋白酶蛋白酶对发酵液进行处理，用处理后的发酵液作抑菌实验，检测抑菌能力是否降低，实验结果见表。表原始发酵上清液及蛋白酶处理后的抑菌圈大小样品抑菌圈直径发酵上清原液．胰蛋白酶蛋白酶处理后的发酵液．活率下降百分率乳酸菌的鉴定形态学观察表三种乳酸菌的形态特征菌株编号分离源菌落形态菌体形态奶酪菌落直径约，凸起，边缘整齐，乳白色油状，杆状，个别弯曲，排列紧密奶酪菌落直径约，光滑，圆形，湿润，乳白色，杆状，两端较平，多成链出现常州工程职业技术学煤东运产品倒流的铁路和港口运输压力 都具有重要意义。 研究结论 研究的简要综合结论 综上所述，本项目充分利用了当地煤炭资源，通过招为容量，届时可 提供电源容量。可满足本项目生产需要。 索特盐化股份有限公司万吨年合成氨项目不仅可促进万州无烟煤的开发，充分 利用万州无烟煤资源，还可使重庆地区内中小氮肥快速发展，站。现两站总共有个 预留间隔。按目前前两站运行情况，其中高峰变电站有预留可利用 容量，龙宝有预留可利用容量。根据向万州三峡电力公司了解，高 峰变电站，将由目前单台主变，年底扩改老厂的公用设施，现老厂次水循环水锅炉汽机均有富余生产能力，可充 分满足本项目需要。 目前给工业园区供电有两个电源，个电源是距园区的高峰 变电站，另个是距园区的龙宝变电十分充足，万州索特盐化股份有限公司生产电价 为元度，取水来源于长江，且水量充足。索特盐化股份有限公司万吨年合 成氨项目初选厂址位于万州市工业园区内，紧靠原索特盐化股份有限公司，可以充分 利用部分从贵州习水船运过来。万州矿产储量十分丰富，其中有煤近亿吨天然气 亿立方米岩盐亿吨。 通过市场调查，该项目所需的原料煤到厂价仅为元吨，具有很大的原料优势。 此外，万州的电力和水利资源也十部分从贵州习水船运过来。万州矿产储量十分丰富，其中有煤近亿吨天然气 亿立方米岩盐亿吨。 通过市场调查，该项目所需的原料煤到厂价仅为元吨，具有很大的原料优势。 此外，万州的电力和水利资源也十分充足，万州索特盐化股份有限公司生产电价 为元度，取水来源于长江，且水量充足。索特盐化股份有限公司万吨年合 成氨项目初选厂址位于万州市工业园区内，紧靠原索特盐化股份有限公司，可以充分 利用老厂的公用设施，现老厂次水循环水锅炉汽机均有富余生产能力，可充 分满足本项目需要。 目前给工业园区供电有两个电源，个电源是距园区的高峰 变电站，另个是距园区