高效广谱抗菌肽制剂的研制项目立项初步设计报告

近年来出现抗菌肽就是类具有巨大发展潜力新型抗菌药物，它是宿主产生类抵抗外界病原体感染小分子阳离子肽，广泛存在于昆虫植物动物及人体内，具有非特异性抗细菌真菌病毒等病原体作用，还有抗肿瘤细胞作用，因此又称为肽抗生素。

抗菌肽抗菌谱广，对多重耐药菌肿瘤细胞艾滋病毒有杀伤作用，甚至还可能有抗重症急性呼吸综合征，病毒作用。

因此有着广阔开发应用前景，是目前国际学术研究活跃领域之。

抗菌肽抗菌机制与传统抗生素不同，传统抗生素是与病原体特定部位受体结合从而使病原体正常结构遭到破坏或使些生物合成受阻，以达到抑菌或杀菌作用，当抗生素作用靶位点发生改变时，抗生素就会失去其抗菌作用，病原微生物往往通过基因突变改变抗生素靶位点而产生对抗生素有抗性耐药菌株抗菌肽对病原体作用则完全是物理作用。

由于抗菌肽具有疏水和亲水两亲性特征，通过其双亲性正电荷与细胞膜磷脂分子上负电荷形成静电吸附而结合在细胞磷脂膜上，随后抗菌肽分子疏水端插入细菌细胞膜脂质膜中，进而造成细胞膜穿孔，使细胞质外溢而达到杀菌目。

由于抗菌肽与细菌细胞膜结合不需要膜上特定受体，因此不会诱导产生抗药菌株和交叉抗性，有望给临床医学药学食品加工动物和植物转基因技术等领域带来广阔开发应用前景。

鱼类生活在水环境中。

由于环境破坏，自然水体和养殖水体污染日益严重，水体中病源微生物种类和含量在不断增加。

面对复杂生存环境，鱼类在生存过程中需要不断地同大量病原微生物作斗争。

但是，由于鱼类没有或淋巴细胞，体液因子中也没有免疫球蛋白存在，在消灭入侵微生物时，抗菌肽就起到了至关重要作用。

因此，鱼类先天免疫系统中极有可能存在高效广谱生物抗菌肽。

我们在前期工作中克隆了高效广谱鱼类抗菌肽基因，本项目拟通过酵母表达获得抗菌肽，并将抗菌肽添加到饲料中，为日益严重鱼类和畜禽病害防治开辟新途径。

项目所处技术领域技术发展现状由于抗菌肽具有独特抗菌机制，广谱杀菌作用，高效抗菌活性以及靶菌株难以产生抗性等优点，因此有着广阔开发应用前景，是目前国际学术研究活跃领域之。

计算机检索表明，国外科学家作了大量工作，对抗菌肽研究已经取得了许多进展。

法国科学家蒂马克先生于年月创建了公司，目是尽可能得到不同类型抗菌肽分子。

迄今国外科学家已在不同生物中发现了多种抗菌肽，我国在抗菌肽研究方面起步较晚，仅有少量报道。

大量结果显示不同抗菌肽其抗菌活性和抗菌谱存在很大差异，因此继续寻找高效广谱生物抗菌肽，是广大生命科学工作者努力方向。

项目技术先进性，对相关领域技术进步推动作用本项目采用是先进分子生物学研究技术。

用基因克隆技术将我们从鱼肝脏中分耐药菌肿瘤细胞艾滋病毒有杀伤作用，甚至还可能有抗重症急性呼吸综合征，病毒作用。

因此有着广阔开发应用前景，是目前国际学术研究活跃领域之。

抗菌肽抗菌机制与传统抗生素不同，传统抗生素是与病原体特定部位受体结合从而使病原体正常结构遭到破坏或使些生物合成受阻，以达到抑菌或杀菌作用，当抗生素作用靶位点发生改变时，抗生素就会失去其抗菌作用，病原微生物往往通过基因突变改变抗生素靶位点而产生对抗生素有抗性耐药菌株抗菌肽对病原体作用则完全是物理作用。

由于抗菌肽具有疏水和亲水两亲性特征，通过其双亲性正电荷与细胞膜磷脂分子上负电荷形成静电吸附而结合在细胞磷脂膜上，随后抗菌肽分子疏水端插入细菌细胞膜脂质膜中，进而造成细胞膜穿孔，使细胞质外溢而达到杀菌目。

由于抗菌肽与细菌细胞膜结合不需要膜上特定受体，因此不会诱导产生抗药菌株和交叉抗性，有望给临床医学药学食品加工动物和植物转基因技术等领域带来广阔开发应用前景。

鱼类生活在水环境中。

由于环境破坏，自然水体和养殖水体污染日益严重，水体中病源微生物种类和含量在不断增加。

面对复杂生存环境，鱼类在生存过程中需要不断地同大量病原微生物作斗争。

但是，由于鱼类没有或淋巴细胞，体液因子中也没有免疫球蛋白存在，在消灭入侵微生物时，抗菌肽理。

科研人员中，教授人副教授人助教人研究生人。

其中具有博士学位教师人。

项目新增投资筹集情况本项目申请科研经费万元。

四项目预期经济效益预期市场需求由于抗菌药物广泛应用和滥用，耐药菌株不断增加，对人类和动物健康造成了严重威胁。

抗菌肽杀菌力强，抗菌谱广，不良反应少，不诱导产生耐药菌株，因此，必将成为今后抗菌药物主导产品。

目前，国内还没有高效广谱抗菌肽产品面市，开发抗菌肽前景广阔。

预期盈利水平该技术推广可产生明显经济效益。

预期产业化前景本项目以现代生物技术方法研制具有较强广谱抗菌能力抗菌肽，并将其制成抗菌肽制剂。

研究成果实用性强，易于转化。

在产品研制工作中采用了现代分子生物学新技术，产品科技含量高，生产成本低，利润空间大。

本产品生产不需特殊大型设备，产品定型后可向中小型生化试剂生产企业转让，因此，本项目产业化前景广阔。

我省具有定生产能力试剂生产企业经技术培训后可生产本产品。

项目实施风险分析。

本项目从生活在病原菌含量高水体中鱼类中寻找动物内源性抗菌物质，以现代生物技术方法研制具有较强广谱抗菌能力抗菌肽，并将其替代抗生素作为新型饲料抗菌添加剂。

与传统抗生素相比，抗菌肽杀菌力强，抗菌谱广，而且不会诱导产生耐药菌株，因此具有强劲市场竞争优势。

本产品为现代生物技术产品，技术含量高，生产成本底，投资风险小。

五项目预计社会效益环境效益对社会发展作用抗菌肽是类具有巨大发展潜力新型抗菌药物，具有非特异性抗细菌真菌病毒等病原体作用，还有抗肿瘤细胞作用，因此又称为肽抗生素。

抗菌肽抗菌谱广，对多重耐药菌肿瘤细胞艾滋病毒有杀伤作用，甚至还可能有抗重症急性呼吸综合征，病毒作用。

因此对社会发展具有重要作用。

对抗菌肽。

其是直接从生物体内分离抗菌肽，用这种方法不能获得大量抗菌肽。

其二是根据已发现抗菌肽基因序列设计引物在不同生物中通过技术克隆抗菌肽基因，该方法只能在不同生物中获得该抗菌肽同源基因，而不能获得新抗菌肽基因。

在本项目中，我们将前期作中获得抗菌肽基因与载体连接，构建抗菌肽酵母高效表达体系，以工程菌工业化发酵生产抗菌肽，用这种方法可获得大量新高效广谱抗菌肽。

计算机检索结果表明，人们对昆虫抗菌肽进行了较多研究，而对鱼类抗菌肽研究很少。

目前国内只有厦门大学最近采用传统方法从海水养殖鲈鱼中分离出种抗菌肽基因，但并未对该基因表达及其产物抗菌活性进行分析，也没有开发出基于鱼类抗菌肽基因广谱抗菌肽制剂。

本项目将开发出具有自主知识产权新型抗菌肽制剂。

项目完成时至少可达到国内领先水平。

项目技术方案论述生产技术工艺流程主要技术参数将采用技术从鱼类克隆抗菌肽全长基因与表达载体连接构建重组载体重组载体转入酵母筛选抗菌肽高效表达酵母体系大量表达抗菌肽抗菌肽抗菌活性和抗菌谱测定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验重组表达载体构建将我们从淡水鱼中诱导表达抗菌肽基因与具有高效表达启动子表达载体连接，构建重组表达载体。

抗菌肽基因酵母表达体系构建及高效表达系统筛选采用醋酸锂法将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因酵母表达系统。

采用法和法从转录和翻译两个水平上筛选抗菌肽高效表达酵母。

抗菌肽大量表达。

利用筛选到高效表达酵母菌发酵产生抗菌肽。

抗菌肽分离纯化。

离心收集表达上清液，采用硫酸铵沉淀抗菌肽。

经层析，收集各个洗脱峰，用分析鉴定目多肽所在峰。

将含有目多肽洗脱液用透析，选题的必要性项目所处技术领域产业政策自从青霉素被发现以来，人们对病原菌引起的感染性疾病不再束手无策，特别是内酰胺类抗生素的发现，对病原菌感染性疾病的治疗产生了革命性飞跃，抗生素已成为临床治疗病原菌感染的强有力武器。

但是，随着抗菌药物的广泛应用和滥用，耐药菌株不断增加，使抗感染治疗陷入耐药菌危机之中。

重点建设大学，人才资源丰富，科研力量雄厚。

生命科学学院有专任教师人，其中正副教授人，讲师人，中高级技术人员比例。

项目组人员专业结构职称结构项目组科研人员人，主要由生物化学与分子生物学专业微生物学专业人员组成，专业结构合理。

科研人员中，教授人副教授人助教人研究生人。

其中具有博士学位教师人。

项目新增投资筹集情况本项目申请科研经费万元。

四项目预期经济效益预期市场需求由于抗菌药物广泛应用和滥用，耐药菌株不断增加，对人类和动物健康造成了严重威胁。

抗菌肽杀菌力强，抗菌谱广，不良反应少，不诱导产生耐药菌株，因此，必将成为今后抗菌药物主导产品。

目前，国内还没有高效广谱抗菌肽产品面市，开发抗菌肽前景广阔。

预期盈利水平该技术推广可产生明显经济效益。

预期产业化前景本项目以现代生物技术方法研制具有较强广温箱中培养，观察抑菌效果，测定抑菌圈直径，了解抗菌肽抗菌谱。

将抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验。

项目技术质量指标选题的必要性项目所处技术领域产业政策自从青霉素被发现以来，人们对病原菌引起的感染性疾病不再束手无策，特别是内酰胺类抗生素的发现，对病原菌感染性疾病的治疗产生了革命性飞跃，抗生素已成为临床治疗病原菌感染的强有力武器。

但是，随着抗菌药物的广泛应用和滥用，耐药菌株不断增加，使抗感染治疗陷入耐药菌危机之中。

重点建设大学，人才资源丰富，科研力量雄厚。

生命科学学院有专任教师人，其中正副教授人，讲师人，中高级技术人员比例。

项目组人员专业结构职称结构项目组科研人员人，主要由生物化学与分子生物学专业微生物学专业人员组成，专业结构合理。

科研人员中，教授人副教授人助教人研究生人。

其中具有博士学位教师人。

项目新增投资筹集情况本项目申请科研经费万元。

四项目预期经济效益预期市场需求由于抗菌药物广泛应用和滥用，耐药菌株不断增加，对人类和动物健康造成了严重威胁。

抗菌肽杀菌力强，抗菌谱广，不良反应少，不诱导产生耐药菌株，因此，必将成为今后抗菌药物主导产品。

目前，国内还没有高效广谱抗菌肽产品面市，开发抗菌肽前景广阔。

预期盈利水平该技术推广可产生明显经济效益。

预期产业化前景本项目以现代生物技术方法研制具有较强广分阶段描述项目执行过程中各阶段目标年月将抗菌肽基因与具有高效表达启动子表达载体连接，构建重组表达载体。

月将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因酵母表达系统。

月筛选高效表达抗菌肽酵母系统。

月酵母发酵条件优化。

年月采用发酵法生产抗菌肽。

月抗菌肽分离和纯化