（综合利用）野生三叶青驯化栽培、种质筛选及开发利用项目立项申报申请报告

用三叶青研制出的种创新中药，有抑制和清除乙肝病毒，调整机体免疫保护肝细胞阻断肝纤维化等作用。

恶性肿瘤病人口服金芪片含三叶青，总有效率达。

以清热解毒为主健脾行气活血为辅的中肝合剂含三叶青，配合西药治疗Ⅲ期原发性肝癌，可提高患者生活质量，延长生存期。

鉴于三叶青的良好药用价值，其进步开发利用具有十分广阔的前景。

另外，三叶青可塑性强，三叶青是四季常绿的藤本植物，叶片细小繁密光亮，可根据环境和观赏要求进行多样化栽培和造型。

阴湿的室外环境可铺地栽植，覆盖率很高，藤蔓生长速度快。

作为盆栽，可做成普通挂盆或中小盆在室内摆放，也可培育成特大盆供宾馆办公大厅装饰，长期摆放。

三叶青庭园栽培表现抗病少虫害，十分耐寒。

在长江以南地区，即使在室外越冬，也可完全不用任何防寒措施，室内盆栽则可在江北地区广泛应用。

三叶青野生资源急剧减少，充分利用优良种质资源，进行人工栽培是保障三叶青资源可持续利用产业可持续发展的必然途径。

长期以来三叶青药材直依赖野生资源，资源的利用方式是非再生性采挖，方面导致野生三叶青资源蕴藏量急剧下降，许多传统产区无药可采，如不及时收集和保存，有可能导致灭绝另方面不同的产地野生药材有效成分存在显著的差异，严重影响三叶青的质量。

因此三叶青的驯化栽培是保障三叶青产业持续发展的必然途径。

三叶青主要生长在荫蔽度较高的山谷灌丛林间等腐殖质较高的地方，在阳光直射的地方偶有生长，但生长不良，其生长环境要求相对严格。

不同种质其生物学特性有较大的差异，特别是其药用部位块茎变异幅度更大，有圆形椭圆形长椭圆形葫芦形纺锤形或团块状等。

三叶青的群落结构复杂，伴生植物丰富，近年来野生资源遭受人为破坏十分严重，在我省的分布地已经很狭窄，资源蕴藏急剧减少，据统计其药材总蕴藏量仅有约，已远远不能满足市场需求，价格居高不下，近几年上涨幅度大，且有进步攀升之趋势。

因此在加强三叶青野生资源种质保护的同时进行三叶青驯化栽培育种野生抚育等方面的研究，在广大农村地区进行推广种植，有利于三叶青资源的持续利用。

本项目的研究旨在为扩大野生三叶青的资源，加速三叶青栽培和开发提供新技术本研究还为开展该物种遗传育种和保护生物学等方面的研究提供了良好的试验基础，具有广泛的应用前景利用快繁技术繁殖三叶青，可以提高土地利用率开辟了新的途经，对农业结构调整和贫困山区的经济发展具有重要的现实意义和长远的历史意义还可以保持自然界生物多样性向人们提供丰富的三叶青种质资源，解决三叶青药材来源匮乏的问题，满足人民用药需要，可实现可持续性发展。

而且也可以改进市场三叶青的供应和提高三叶青药材的品质，以及为相应品种的深度系列开发提供研究基础。

此外，对探讨药用观赏植物的人工驯化栽培盆栽培养和快速繁殖均有定的创新价值，故研究三叶青的生态栽培和快速繁殖等方面技术研究有重大的经济和科研价值。

二国内外研究现状和发展趋势目前国内外对三叶青的研究主要集中在化学成分药理以及生药鉴定等方面，钟晓明等通过研究三叶青提取物包括总黄酮总氨基酸及多糖成分对致急性肝损伤小鼠的保护作用，发现其能够明显降低肝损伤小鼠谷丙转氨酶谷草转氨酶的增高，减轻肝细胞变性，炎症浸润及坏死等病变降低肝中丙二醛生成量。

伍昭龙等同时开展了三叶青水煎液对致大鼠急性肝损伤的保护作用研究，研究结果表明，该中药除能降低肝损伤大鼠血清及水平外，还能降低碱性磷酸酶水平而水平明显升高。

基于钟晓明等研究基础，黄真和毛庆秋深入研究了三叶青总氨基酸对诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用，研究结果显示，其能够明显降低急性肝损伤小鼠和活性升高，同时还能降低肝脏指数及肝中生成量，提高肝中活性，减轻肝细胞变性炎症浸润及坏死等病变。

杨雄志采用小鼠尾静脉注射和方法成功造出免疫性肝损伤模型，该模型小鼠血清转氨酶和乳酸脱氢酶显著升高，肝匀浆的含量也显著升高，但水平明显降低对照病理模型组，杨雄志发现不同剂量的三叶青提取液给药组小鼠血清的水平降低肝损伤不同程度减轻，研究结果表明，三叶青提取液对和诱导的小鼠免疫性肝损伤具有良好的防护作用。

恶性肿瘤的治疗目前在医学界尚无理想的药物和方法，且此类疾病药物耐受性明显增高，但同时中医中药及有关营养支持疗法为治疗恶性肿瘤开辟了新途径。

据年报道三叶青的乙酸乙酯溶部分主要成分为苯甲酰基胡萝卜甙具有定的肿瘤抑制和抗病毒作用丁钢强等年研究发现，三叶青提取物中乙酸乙酯溶部分对人肝癌细胞活性具有较强的抑制作用正丁醇部分也有定的作用，有力支持和验证了以上研究结果。

研究同时发现，三叶青提取物对正常原代培养的大鼠肝细胞活性没有明显的影响，对活力影响也较对要小，提示三叶青的各部分提取物对正常细胞影响较肿瘤细胞要小，在此基础上魏克民等年深入进行了三叶青抗恶性肿瘤机制的实验研究，结果表明，三叶生态农业生态有限公司在本项目中的分工生态栽培研究田间试验何国强职务职称总经理出生年月从事专业园艺工作单位杭州鸿越生态农业科技有限公司在本项目中的分工示范基地建设产品试验示范朱岩职务职称教授出生年月从事专业化学分析工作单位浙江大学在本项目中的分工化学检验与品质评价徐明仙职务职称副教授出生年月从事专业环境分析工作单位杭州职业技术学院在本项目中的分工生物产品试验水土环境分析研究实验条件本单位具有以下实验设备拥有面积达栽培实验基地。

植物生理实验室和组培实验室各个。

生物倒臵显微镜台。

人工气候箱三台。

垂直超净工作台四台。

立方式高压灭菌锅二台。

电子精密天平二台。

冰箱三台。

生化培养箱二台。

普通显微镜五十台。

调温调湿箱二台。

培养皿锥形瓶等玻璃器皿若干。

本单位具有以下试验条件公司始年，前后总投资余万元，进行基地建设，其中按要求建设亩的三叶青生产专用基地，搭建钢架大棚个，连栋大棚平方米，基地水电路配套。

亩三叶青基地大棚全部安装地喷雾喷肥水管网，进行人工智能控制。

公司建有平方米的组培工厂座，按年生产能力万瓶设计，目前年生产组培苗万瓶左右。

公司已形成个以三叶青为重点，其他中药材种植为辅的特色农业生产基地和中草药生产的科技型企业。

另外，合作单位的分析测试中心具有许多现代化的仪器设备，能在实验室和栽培基地完成所需的各项研究。

六实施方案包括技术路线进度安排通过严谨先进的实验手段和方法，获得可靠的实验数据，筛选出三叶青无菌培养的最佳培养基和环境条件运用生态栽培技术手段进行三叶青高效栽培，探讨三叶青快速繁殖与生态栽培的环境条件和栽培基质建立三叶青安全生产及品质保证的技术体系。

本项目以三叶青种质筛选快速繁殖生态栽培及活性成分分析为主线，按以下技术路线进行研究。

课题研究采用产学研结合，实施课题制管理，在课题责任人负责的基础上，分课题子课题两级管理，由课题责任人负责签订课题分级合同，并报归口部门备案。

子课题由课题组成员分工研究。

课题分解三叶青种质资源收集与优质种质筛选三叶青扩繁与容器栽培关键技术三叶青复种高效生态栽培关键技术及不同栽培条件下活性成分分析。

六计划进度安排本项目按照生产要求设计生产工艺，实行规范化操作，严格，按照科学选种科学培育科学用药科学管理等工艺技术方案，确保项目提供的三叶青品种好质量高效益三叶青种质收集种质筛选并鉴定三叶青快速育苗技术研究三叶青高效复种技术研究三叶青生态栽培模式三叶青安全高效栽培体系与示范总结及推广应用三叶青活性成分分析与对比好。

进行优良种质选育。

开展种源与无性系选择，并筛选可大力推广的高品质优良三叶青种苗。

项目采用野生种子，筛选原原种，采集种子和外植体进行人工仿野生条件下驯化栽培。

采集种子或外植体进行组织培养，筛选用个培养基进行。

观察后选定最佳培养基进行愈伤组织培养扩繁。

中药材种植准备选择周围无污染源土地，进行大气水质土壤的检测，达到环保标准。

浙江省无公害蔬菜标准设计实施三叶青生态种植模式。

进行脱离净化条件下的自然光炼苗。

开展三叶青种植方法和肥水管理的研究。

人工栽培三叶青与野生三叶青活性成分分析研究，确定优质三叶青生产和质量控制指标。

进行大田栽培，培育管理。

开展三叶青培养土配比适应的有机肥料和病虫害防治的研究。

利用优质三叶青质控指标，于花前花期和花后等分别测定质量变化，使采收更合理。

三叶青生态栽培光温湿度控制研究，确保三叶青最适生长环境。

喷滴灌系统设施安装，保证供水及时安全节能。

测土配方施肥。

通过设计理想的配方肥包括专用复合肥系列专用复合肥，实现养分的平衡。

进行重金属农药残留量与微生物检测。

三叶青优质品系栽培生理与光合生理研究，三叶青高产优质栽培技术体系研究。

项目验收，课题总结。

七项目预算包括经费来源及用途项目经费预算如下杭州市科技局经费万元，经费主要用于购买试验材料试验外协资料印刷会议调研人员劳务管理等。

附表市级科技计划项目经费概算表项目名称金额单位万元序号概算科目名称合计市财政拨款经费地方部门配套经费自筹经费经费支出合计设备费购置设备费试制设备费设备租赁费材料费测试化验加工费燃料动力费差旅费会议费合作协作研究与交流费出版文献信息传播知识产权事务费人员劳务费专家咨询费管理费其他开支二经费来源合计申请市财政经费地方部门配套拨款自筹经费单位自有货币资金其他资金八申请单位概况项目主持单位是家集科研生产销售技术服务于体的规模化专业型农业科技企业。

公司组建有批技术力量雄厚，管理科学，人才精锐的活力团队，公司把握现代农业产业发展方向，加快科技成果产业化进程，努力使产品技术处于同行前列。

近年来公司直致力于药赏兼用植物资源及其系列产品的研制与开发工作，并应用现代生物工程技术对三叶青白背三七等植物进行驯化和培植，逐步形成产业化规模。

公司已建立了药赏兼用植物标准化种植基地，全面开展从育种人工繁育仿野生有机栽培肥料比对现代炮制工艺等系列研究，在种子收集精心育种克隆组培，到生态有机栽培性状鉴定显微鉴定，再到产品研发质量控制有效成分检测等各个方面都取得了突破性的成果，实现公司产品培育种植的科学化标准化产业化，年销售额在万以上。

项目合作单位之是全国优秀高等职业技术学院，是集产学研体化，为地方经济社会发展提供科技支撑和人才的场所。

近几年来，该学院积极承担地方多家企业科研所等的技术服务技术指导工作。

拥有实验实训室个，实训中心个，校内生产性实训基地校外实训基地多个，教学仪器设备多万元实验室拥有完成本项目研究所需的大型仪器，如高