毕业论文_ELISA技术在马铃薯病毒检测中的应用_本科毕业设计论文

下表列出了些病毒的颗粒大小传播方式和地理位置。

表马铃薯病毒的结够特征病毒属或科病毒成员颗粒大小自然传播方式地理分布烟草脆裂病毒属线虫欧洲美国毛病毒属机械种子安第斯黄症病毒属，直径蚜虫世界范围联体病毒科，成对的三联体叶蝉未知南美洲秘鲁病毒对马铃薯的影响产量的影响马铃薯病毒对马铃薯的产量有很大的影响，能够侵染很多种不同的作物，遗传范围非常广泛，能够侵染马铃薯烟草辣椒西红柿等，严重者可导致品种退化甚至绝产。

有病毒病引起的数量损失最为严重，产生严重茎叶症状的马铃薯病毒所引起的产量损失要比症状轻微或侵染后不产生症状的马铃薯病毒所引起的产量损失要高得多。

植物病毒为专性寄生物，只能在其寄主的活细胞内复制，马铃薯为营养体繁殖，病毒在寄主体内随继代繁殖而逐渐积累，导致马铃薯种性退化，最后导致产量严重降低。

块状大小形状口感的影响感染病毒的马铃薯会影响到马铃薯的商品性。

研究病毒病引起的损失在确定该病毒危害的经济显著性方面是很有必要的。

品质损失对块状的加工或销售的品质对于马铃薯而言，马铃薯病毒对马铃薯生产的影响与马铃薯病毒的种类环境条件有关。

而抗病毒品种感染马铃薯病毒后对马铃薯质量和产量影响都很小。

实际中马铃薯生产田中受两种以上病毒复合侵染的现象非常普遍，是马铃薯植株病毒病害症状更为复杂，不同病毒和病毒不同株系的复合侵染对马铃薯生产的质量和产量影响也较复杂。

马铃薯病毒的类型俗称马铃薯退化类型，有，。

其致病毒源复杂。

由于品种抗病性不同，或者因温度条件等的影响，有时马铃薯病症相似，但其病原不同。

的病原虽较单纯，但常与花叶型的病毒复合侵染，呈综合症状。

其中矮生型病株，除种病原的特定症状外，有时些抗病弱的马铃薯品种，如果被多种病原侵染，发病严重，导致植株生育停滞，从而造成植株矮缩现象。

马铃薯病毒的传播方式分布及其防治传播方式要成功地传播具有寄生特性的植物病毒，需要其他介体将他们从感病的细胞传到健康植株的细胞中去。

其传播方式大体分为五种植株之间的接触传播当感病植株伤口流出的汁液侵染健康植株的伤口时才会发生这种类型的传播，要使这种类型的传播起作用，病毒应达到定的浓度而且寄主植物易受侵染。

机械传播即植株间的接触传播。

侵染性病毒作为侵染源先沾染物，后者再与健康植株接触而传播病毒，当手触摸过带毒植株后可以机械的传播病毒或偶尔也会通过沾染病毒的衣服摩擦植株而机械传播病毒。

当动物在田间行走时也会以同样的方式传播病毒。

然而在田间最重要的是农用机具和田间作业。

嫁接传播在自然的条件下，这种传播方式很少发生，马铃薯卷叶病毒可通过此方法传毒。

介体传播昆虫线虫和真菌均是马铃薯的传播媒介，由于昆虫的数量居多，所以是主要的媒介，其中蚜虫最为主要。

线虫传播线虫作为病毒传播媒体在马铃薯上并不常见。

分布马铃薯的病毒这种病毒属于马铃薯的病毒科属。

病毒粒子是弯曲的螺旋结构纤丝，约长，宽。

目前在世界范围内以鉴定出三种主要株系。

代表普通的种类，初期感染造成程度不同的叶片枯斑和脉缩，次生感染造成严重的皱缩和花叶。

称为坏死的株系，因为它造成烟草的叶脉坏死，而马铃薯的主要症状是花叶并伴有定程度的皱缩，敏感栽培种有坏死的现象。

造成茎条斑和大多数栽培种的坏死。

此株系的病毒进来较少在马铃薯上发现。

病毒寄主范围广泛但大多数寄主属于茄科。

主要由蚜虫以非持久性方式进行传播，由于其传播途径较复杂，因而在国外马铃薯产区广泛传播，并且造成敏感栽培品种减产可达，与其他病毒尤其是协同作用是，造成更加严重的病害称为皱花叶病，减产可达。

马铃薯的卷叶病毒被认为是马铃薯中最重要的病毒。

他是黄症病毒属的成员，具有六角形的等轴外形，直径为。

主要经过桃蚜传播。

寄主范围较窄，敏感性寄主主要是属于茄科。

大多数栽培品种中使初期感病植株卷曲并且顶端褪绿，使次生植株感病矮化，并且基部叶片卷曲，顶部的叶片黄花并且显紫色，极度敏感品种的块茎内部有坏死斑，通常呈网状。

因栽培种对的敏感性而造成的减产可达。

这种病毒几乎发生在所有马铃薯种植区域，然而，在高温气候地区印度平原和北非并没有那么严重。

马铃薯的病毒马铃薯的病毒，又名马铃薯的普通花叶病，是发现最早，传播最广的种马铃薯病毒，症状表现出轻微的斑驳至严重的皱缩花叶，引起植株矮化，叶片缩小。

病原为马铃薯的病毒，是弯曲的线条状病毒。

这种病毒属于马铃薯的病毒属，由弯曲的纤细螺旋构成特征性的病毒粒子，约长，宽。

在自然界中主要靠接触传播。

在世界范围内分布于马铃薯和其他的茄科寄主中。

除非和其他病毒尤其是协同作用，否则并不造成严重减产。

单纯有引起的减产在时，样品离心时的效果定要好，否则样液有杂质，扩散不均匀，检测结果不直观。

制膜大早尤金中大早尤金中大早尤金荷大早尤金荷黄早尤金阳性对照黄早中阴性对照根据检测样品量的多少，制得相应大小的膜。

本实验共个样品，另加两个对照共点个样品孔，所以应将膜剪成孔的膜。

每应用铅笔划好印，防止相邻的两个样品之间发生扩散。

点样将制好的样品用的微量移液枪，逐个点在已制好的膜上，室温下干燥分钟。

封闭取的封闭液现用现配，将其倾入培养皿中，把以干燥好的膜用镊子轻轻的放入培养皿中，混匀并盖上封口袋，套上皮套，恒温振摇。

洗涤取出培养皿，摘下皮套，拿下封口袋，将封闭液弃去，加入洗液，浸泡分钟，充分洗涤四次。

加抗用移液枪取的抗体缓冲液现用现配放入的小烧杯中，用量程为的移液枪向其中加入血清，混匀以后倾入以弃去洗液的培养皿中，再用封口袋盖上，套上皮套，温育振摇。

然后取出洗涤，方法同上。

加二抗用移液枪取的抗体缓冲液现用现配放入的小烧杯中，用的移液枪向其中加入山羊抗兔，混匀后倾入以弃去洗液的培养皿中，再用封口袋盖上，套上皮套，温育振摇。

然后取出洗涤，方法同上。

加底物显色用量筒量取的底物缓冲液，倾入的小烧杯中，再用移液枪分别取和底物溶液各，倾入后充分混匀，再倾入以弃去洗液的培养皿中，在暗处下显色。

清洗将底物溶液倾出，用清水冲洗遍，取出晾干。

观察结果第章结果与讨论法常规检测的实验记录与结果分析实验记录表结果数据表阴性对照阳性对照表结果统计样品编号标号样品状态状态各项检测结果茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶茎叶阴性对照粉末状阳性对照粉末状结果分析从表中我们可以看出，此品种的马铃薯脱毒苗脱毒效果很好，阴性对照值为，临界值为，而样品的光密度值均在倍的阴性值以下，且都不在临界值范围内，六种病毒的阳性值都很好，可见中间操作环节并未发生。

由此可得出结论，该批样品可以放心种植。

验证试验的实验记录与结果分析法的实验记录与结果分析实验记录表结果记录表种薯信息样品的光密度值检测结果大大大大黄黄早早早早早早尤金尤金尤金尤金尤金中中中荷荷阳性对照阴性对照结果分析通过对采集的种样品进行病毒的检测，发现阴性样品有个，阳性样品有个，没有临界值，阴阳性对照结果很好。

从中我们也发现尤金早大白中薯号等品种不易感染病毒，克新号易感染病毒。

法的实验记录与结果分析实验记录见表，每个样品的实验记录都对应如下的实验结果的位置。

最右侧的为阳性对照和阴性对照，记录时写在第六列的第个位置。

实验结果图法的检测结果结果分析从图中我们可以看出，紫黑颜色的样品孔为阳性，颜色浅的为阴性。

其中最右侧的那两个，上端为阳性对照，下端的为阴性对照。

可以看出有个样品被检测出阳性值，个样品被检测出阴性值。

结果目了然，但它却没有方法结果准确度高，需要目测观察，而法却能读出数值，克服了人为的主观性，另外法的临界值不易判断，而法却可通过计算的方法将其算出来阴性对照值倍的。

两种方法优缺点及适用范围法检测马铃薯病毒操作比较方便，但由于它的成本较高，目前有很多单位和种薯生产者不具备相应的检测条件，而技术可将田间采回的样品进行简单处理后，点在硝酸纤维素膜上，然后可将膜送到有检测能力的质检部门进行检测，也可以自己检测，膜还可以长期保存。

因此在生产中可推广使用。

两种方法吻合率的比较两方法的检出率表检出率比较方法阳性样品数阴性样品数临界值合计阳性率法法法法阳性检出率图两方法阳性检出率比较吻合率比较将采集的种样品分别用法和法进行病毒的检测，比较两种方法的检测结果。

其中法的检测结果见表，其中它的阳性对照值和阴性对照值分别为，以大于阴性对照孔光密度值的倍判定为阳性。

法的检测结果见图，带有紫黑色斑点的判定为阳性，接近阴性对照颜色的判定为阴性。

两者检出率见表图相比较其吻合率达到。

结论本实验采用法和检测马铃薯病毒得到如下结论双抗体夹心酶联免疫吸附测定法检测马铃薯病毒具有操作简单，适用性强，准确性好等优点。

硝酸纤维素膜酶联免疫吸附测定法具有造价低，反应特异性强，灵敏度较高等优点。

法适合于中小型企业做病毒检测工作法适合于国家企事业单位大型工厂农场做病毒检测工作。

参考文献李芝芳中国马铃薯北京中国农业出版社吴云峰蚜虫传毒机制研究西北农业大学学报，吴尔福植物病毒危害及其防治北京中国科学出版社，马铃薯病毒及其防治谢开云译北京中国农业科技出版社郭志乾，董凤林马铃薯病毒性退化与防治中国马铃薯库尔斯塔克，著裴美云译植物病毒比较诊断指南北京农业出版社管致和蚜虫与植物病毒病贵州贵州人民出版社吕典秋，李学湛，白艳菊等马铃薯病毒和烟草花叶病毒的提纯及抗血清的制备中国马铃薯安云庆免疫学基础北京科学技术出版社唐英章现代食品安全检测技术北京科学出版社，江汉湖食品免疫学导论北京化学工业出版社，罗贯民酶工程第二版吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室组织，科学出版社，附录附录马铃薯病毒检测的基本参数样品名称马铃薯样品编号检测日期检测地点病毒实验室病毒名称，取样量检测依据主要仪器名称及编号见仪器室温相对湿度检测前仪器状况正常检测后仪器状况正常抗体工作浓度酶标抗体工作浓度病毒种类样品批号抗原抗体酶标抗体阳性对照阴性对照检测过程微孔加液量反应温度反应时间洗涤次数包被微量滴定板加样品液或隔夜加酶标液加底物液备注阳性对照阴性对照状态为粉末状。

样品状态为茎叶。

检测人申徐朝阳复核人范审批人白检测日期完成日期致谢感谢钱镭老师，本论文从选题构思资料收集到修改定稿，无不凝聚着老师的心血。

正是老师的辛勤劳动，我才有了今天的成绩，钱雷老师广泛渊