1、学会传染病与寄生虫病学分会丙型肝炎防治指南中华肝脏病杂志陈广灿,李威,曾永明的基因结构功能与肝细胞癌相关性研究进展中华肿瘤防治杂志翟友刚,史朋核心蛋白致细胞癌变机制的研究进展国外医学病毒学分册焦成松,周永兴丙型肝炎病毒蛋白研究进展国外医学病毒学分册李克,王琳,成军,等丙型肝炎病毒核心蛋白基因的表达载体构建及在酵母中的表达军医进修学院学报,湖南理工学院本科毕业论文参考文献胡刚,薛小平丙型肝炎病毒核心蛋白在大肠杆菌中的表达生物技术成军丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白的研究进展国外医学病毒学分册,张敏睿,朱娟莉,董兆麟,等丙型肝炎病毒核心蛋白在大肠杆菌和毕赤酵母中表达的比较微生物学通报,湖南理工学院本科毕业论文致谢致谢本文所有工作都是在聂东宋教授的悉心指导下完成的。而在实验过程中，聂东宋教。

2、窗口期缩短至周，从而达到准确快速便捷的检测目的。湖南理工学院本科毕业论文材料和方法材料与方法材料实验仪器电子天平,恒温磁力搅拌器，金坛市富华仪器有限公司核酸蛋白检测仪，自动酶标洗板机型，北京拓普分析仪器有限公司酶标仪型，型电热恒温水槽上海博讯实业有限公司层析仪，水平摇床，北京六仪器厂垂直电泳槽，上海天能科技电泳仪，北京六仪器厂水平电泳槽，北京六仪器厂凝胶成像系统，恒振荡器，太仓市实验设备厂水浴振荡器，哈尔滨东联电子技术开发有限公司高速冷冻离心机，广州天美超声波细胞粉碎机，宁波新芝生物科技离心机，低温恒温水槽，仪，超净工作台苏州净化设备厂实验酶及主要试剂公司产品限制性内切酶酶，Ⅱ。公司产品⑿Ⅰ。产品胰蛋白胨酵母提取物。产品氨苄青霉素琼脂糖丙烯酸胺甲叉双丙烯酞胺。兔抗人北京博奥森产品。

3、的优点,其表达目的蛋白快速高效经济。其本身繁殖力强。但由于原核细胞缺乏真核细胞所特有的翻译后加工修饰系统,如糖基化等,使不少具有生物活性的糖蛋白不能利用原核表达系统表达而且蛋白的高水平表达常形成包涵体,而包涵体的溶解纯化步骤繁琐,也正因为如此,以包涵体形式表达的重组蛋白的分离纯化以及融合蛋白的复性成为了原核表达系统应用过程中遇到的主要障碍之。本研究还可以优化地方,如工程菌在大肠杆菌中诱导时间的优化，可以选择多个时间段诱导比较蛋白表达量，从而选择个最佳的诱导时间湖南理工学院本科毕业论文实验讨论诱导时的浓度优化，本实验中加入的对蛋白表达量的影响不明显，还可以在这个基础上增加或减少其浓度，比较结果，从而选取个最佳的浓度。湖南理工学院本科毕业论文参考文献参考文献中华医学会肝病学分会,中华。

4、丙肝治疗尚未完全纳入医保，公众对丙肝认知水平也较低，调查过程中，约的公众不知道丙肝。丙肝，市场上既没有非常明确的药物，也缺少有效的疫苗加以预防和阻止其进步传播。因此，的早期诊断对于筛查的传染源指导临床治疗和预后判断有重大意义。当前，医疗机构主要通过对血清中抗和的检测来筛查丙肝。但感染后到抗抗体的出现有个平均为周周的窗口期,即使患者被高度感染，抗体检测技术也较难检测的存在。所以抗不适合作为感染的早期诊断指标。而的检测方法虽然具有早期敏感和特异等特点，但该方法在技术和设备上要求较高，费时，检出率低，难以在常规工作或基层实验室推广。湖南理工学院本科毕业论文前言针对上述检测中存在的些不足之处，我们通过大肠杆菌中表达并纯化核心蛋白,构建个原核表达载体,用于抗体和核心抗原的联合检测,使感染的。

5、转录,影响细胞分化,细胞信号转导途径,抑制宿主免疫反应等。核心蛋白氨基酸序列上有多个和细胞的抗原表位,能诱导不同病毒株的交叉免疫应答,并具有调控多种细胞基因影响细胞生长增生及凋亡的能力,可能是引起宿主细胞癌变的重要因素。因此,核心蛋白具有的多种功能促使人们从不同角度对其进行研究,以期探讨的致病机制,为预防和治疗感染提供新的策略。本研究旨在在大肠杆菌中原核表达核心基因片段,通过逆转录扩增核心区基因片段，将其连接到经同样酶切的原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌，以诱导，鉴定。结果表明，将目的基因与表达载体进行连接，得原核表达载体，该载体转化大肠埃希氏菌后可诱导表达出分子量约为的重组蛋白。以目前广泛使用的原核表达系统大肠埃希菌来构建核心基因的表达载体。同真核表达系统相比,大肠埃希菌具有较。

6、授渊博的学识严谨的治学态度和平易近人的为人处事之道给我留下了深刻的印象，使我终身受益。从论文的选题实验的开展以及论文的撰写，老师都给予了我莫大的帮助和支持。在这里我要向聂东宋教授致以最衷心的感谢。学号毕业设计论文题目核心区基因片段的原核表达作者李颖届别届系别化学化工学院专业生物工程指导老师聂东宋职称副教授完成时间年月日湖南理工学院本科毕业论文摘要Ⅰ摘要在大肠杆菌中表达核心区基因片段,构建个原核表达载体，用于丙型肝炎核心抗原和丙型肝炎抗体联合检测。通过逆转录扩增核心片段，产物经和双酶切后连接到经同样酶切的原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌，并以诱导蛋白表达，鉴定。结果表明，将目的基因与表达载体进行连接，得原核表达载体，该载体转化大肠埃希氏菌后可诱导表达出分子量约为的重组蛋白。关键词丙。

7、聚苯乙烯酶联板深圳金创华产品。国产分析纯苯酚氯仿无水乙醇异丙醇甘油氯化钠琼脂湖南理工学院本科毕业论文材料和方法醋酸溴化乙锭硼酸磷酸氢二钠磷酸二氢钠醋酸钠。试剂盒购自公司质粒提取试剂盒购自公司胶回收纯化试剂盒购自公司购自公司购自公司购自公司。分子量标准核酸电泳分子量标准和蛋白质电泳分子量标准蛋白均购自公司。引物由上海生物工程有限公司合成菌株和载体菌株大肠杆菌为湖南康润药业有限公司实验室保存。原核表达载体为湖南康润药业有限公司实验室保存。实验血浆实验所用的阳性血浆和阴性血浆，为湖南康润药业有限公司实验室提供。方法主要溶液的配制缓冲液。缓冲液Ⅰ，。缓冲液Ⅱ尿素。缓冲液,尿素。电泳缓冲液，硼酸加水定容至，用前稀释倍即成应用液。缓冲液用水配制。称取无水，加定容至，湖南理工学院本科毕业论要病。

8、以，的核心蛋白可被看作个多功能蛋白，能够影响多种细胞信号转导途径，激活多种病毒及细胞基因启动子，具有广泛的反式激活作用还可与宿主细胞中参与凋亡转录调控转化膜重排及免疫逃逸等的调节分子发生相互作用。目前，国内公众对丙肝流行现状缺乏全面准确的了解。据统计，在的有丙肝高危险因素的人群中，仅有检测过丙肝。并且对丙肝治疗尚未完全纳入医保，公众对丙肝认知水平也较低，调查过程中，约的公众不知道丙肝。丙肝，市场上既没有非常明确的药物，也缺少有效的疫苗加以预防和阻止其进步传播。因此，的早期诊断对于筛查的传染源指导临床治疗和预后判断有重大意义。当前，医疗机构主要通过对血清中抗和的检测来筛查丙肝。但感染后到抗抗体的出现有个平均为周周的窗口期,即使患者被高度感染，抗体检测技术也较难检测的存在。所以抗不适。

9、之,主要由输血引起,与肝细胞癌及肝硬化关系密切,对人类危害巨大。目前全球范围内感染的患者约有亿人,我国约万左右。感染己成为严重的世界公共卫生问题之,但迄今尚无疫苗和特异有效的治疗药物。是种单股正链病毒,其基因组长约,其核心蛋白位于病毒多肽的氨基末端,被宿主的信号肽酶切割后产生,由个氨基酸残基组成。此蛋白被认为是病毒的核壳蛋白,与其它的结构与非结构蛋白相比,其氨基酸序列高度保守。核心蛋白高度碱性,无糖基化位点,且具有细胞毒性,其结构特点使其难以在真核系统中表达。为了表达核心区基因片段,本研究拟构建核心蛋白的原核表达载体并将表达蛋白进行纯化,用于丙型肝炎核心抗原和丙型肝炎抗体联合检测。多项研究均表明核心蛋白能够导致肝细胞恶变和肿瘤的发生,除了参与病毒核衣壳的形成,核心蛋白还能调节基因。

10、者带来极大的健康负担和经济负担，已成为个严重的社会和公共卫生问题。丙型肝炎呈全球性流行，平均感染率在左右，全世界约有亿的感染者，所感染的基因型主要包括种。我国般人群的抗阳性率为，与世界平均水平接近，基因型以和为主，其中型占到以上。基因组是个单股正链的分子，利用依赖于的聚合酶复制其基因组，在结构上可以分为三个区端的非翻译区个长的多蛋白读码框，端的非翻译区,。翻译区的多蛋白读码框可以翻译出多种结构蛋白,和非结构蛋白,。的核心蛋白不仅作为结构蛋白包裹病毒核酸形成病毒的核衣壳，而且可以通过多种途径,抑制宿主对病毒感染的防御反应，参与细胞中的多条信号转导通路，调节细胞的生长周期等。等在对自我调节机制的研究中发现，核心蛋白可以通过与内部核糖体进入位点的结合，特异性的抑制型和帽依赖型的翻译。所。

11、作为感染的早期诊断指标。而的检测方法虽然具有早期敏感和特异等特点，但该方法在技术和设备上要求较高，费时，检出率低，难以在常规工作或基层实验室推广。湖南理工学院本科毕业论文前言针对上述检测中存在的些不足之处，我们通过大肠杆菌中表达并纯化核心蛋白,构建个原核表达载体,用于抗体和核心抗原的联合检测,使感染的窗口期缩短至周，从而达到准确快速便捷的检测目的。湖南理工学院本科毕业论文材料和方法材料与方法材料实验仪器电子天平,恒温磁力搅拌器，金坛市富华仪器有限公司核酸蛋白检测仪，自动酶标洗板机型，北京拓普分析仪器有限公司酶标仪型，型电热恒温水槽上海博讯实业有限公司层析仪，水平摇床，北京六仪器厂垂直电泳槽，上海天能科技电泳仪，北京六仪器厂水平电泳槽，北京六仪器厂凝胶成像系统，恒振荡器，太仓市实验。

12、肝炎病毒核心区基因片段原核表达湖南理工学院本科毕业论文Ⅱ，,湖南理工学院本科毕业论文目录目录中文摘要Ⅰ英文摘要Ⅱ前言材料与方法材料实验仪器实验酶及主要试剂试剂盒分子量标准引物菌株和载体实验血浆方法主要溶液配制培养基配制丙型肝炎病毒提取引物设计逆转录成扩增目的基因载体质粒与目的基因的制备及酶切质粒大片段及目的基因片段的分离回收与纯化目的基因片段与载体连接感受态细胞的制备转化重组克隆的筛选及鉴定重组蛋白的表达与纯化二结果三讨论参考文献致谢附录湖南理工学院本科毕业论文前言前言丙型肝炎病毒是慢性肝炎和肝癌的主要病原体之，感染之后，约有的受染者成为慢性携带者感染后年，约有左右的感染者发生肝硬化而旦发展成为肝硬化，相关的肝细胞癌每年的发生率为而且目前尚无有效的疫苗可以预防感染。因而丙型肝炎给。

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