毕业论文：放线菌发酵产物对核盘菌的抑制

目前正在寻找种简单有效安全的植物病害防治方法，即生物防治。

生物防治是指通过除人以外的种或多种生物来降低病原微生物数量或减弱病原菌的致病能力，从而减少病原微生物所致病害的发生。

它是通过植物病原物生防菌植物表面及其周围微生物群落和自然环境等因素的互作关系，来达到促生防病的作用。

拮抗微生物具有不易使病原菌产生抗性对环境安全生产工艺相对简单以及不少微生物同时具有促进作物生长等优点而受到人们的关注和重视。

利用拮抗微生物产生的抗菌物质进行生物防治已成为研究的热点，已开发的有灭瘟素放线菌酮井冈霉素多抗霉素农抗等。

近年来，随着研究的深入和生防要求的提高，人们开始将更多的注意力转移到些新型抗菌物质上，如新型抗生素抗真菌蛋白等，因而需要不断地发掘和利用新的拮抗微生物资源。

生防菌应用的种类生防菌的种类繁多，生产上广泛应用的有真菌细菌放线菌等。

真菌主要有木霉菌毛壳菌酵母菌淡紫拟青霉菌厚壁孢子轮枝菌及菌根真菌等细菌主要有芽孢杆菌假单胞杆菌等促进植物生长菌放射性土壤农杆菌和巴氏杆菌等放线菌主要有链霉菌及其变种。

对生防真菌研究最广泛的是木霉菌，常见的木霉菌有哈茨木霉绿色木霉钩状木霉长枝木霉康氏木霉和绿粘帚霉等。

它广泛存在于土壤及植物表面，经常可从植物病残体种子球茎表面分离到。

如文成敬等将油菜菌核作为诱饵埋入土壤中个月后从菌核表面和内部分离到株木霉，分别为黄绿木霉钩状木霉哈茨木霉康化木霉拟康化木霉。

目前国际上用于防治土传病害的拮抗细菌常见的有以下属产碱菌属无定形孢囊菌属节杆菌属固氮菌属芽孢杆菌属肠杆菌属欧文氏菌属黄杆菌属哈夫尼菌属小单孢菌属假单孢菌属巴斯德氏芽菌属根瘤菌属沙雷氏菌属和黄单胞菌属。

已开发为生防农药的生防细菌主要有芽孢杆菌属链霉菌属假单胞菌属和土壤杆菌属等。

目前国内外应用芽孢杆菌防治植物病害非常广泛，据报道，芽孢杆菌对马铃薯环腐病菌梨灰霉病菌油菜菌核病菌水稻白叶枯病菌稻瘟病菌和小麦赤霉病菌等具有潜在的生防利用价值。

张学君等表明芽孢杆菌对棉花枯萎病菌立枯病菌黄萎病菌炭疽病菌棉铃疫霉病菌和棉叶斑病菌均有强烈的抑菌作用。

魏春妹等制得的生防制剂青枯散，不仅对青枯病菌的拮抗率为，而且能促进番茄花生黄瓜烟草油菜等作物生长。

目前用于生防细菌的种类有枯草芽孢杆菌多粘芽孢杆菌蜡状芽孢杆菌巨大芽孢杆菌和短小芽孢杆菌等。

放线菌由于菌落呈放射状而得名。

从发现放线菌至今，已经报道了个属，个种。

应用于生物防治的放线菌主要是链霉菌属，其次有乙霉威嘧霉胺清水对照处理菌核单重图发酵产物对核盘菌菌核单重的影响发酵液乙霉威嘧霉胺清水对照处理菌核数个图发酵产物对核盘菌菌核形成数量的影响发酵产物对核盘菌菌核萌发的影响结果经放线菌发酵产物的浓度浓度的倍处理后，菌核的萌发与清水对照相比虽然延迟了，且萌发率有所降低，但并不能被完全抑制。

对照药剂乙霉威和嘧霉胺在约相当于其浓度的倍时分别为和也不能完全抑制菌核的萌发。

发酵产物对核盘菌菌丝体细胞膜渗透势的影响结果黄瓜菌核病菌菌丝体在经放线菌发酵产物处理后，随时间的延长及发酵产物浓度的提高，其电导率并未显著升高，在处理后，仍与未处理时即分钟时无显著差异。

而对照药剂嘧霉胺可以使电导率在内迅速提高，且随时间的延长，电导率不断增大图，。

这表明二者的在此方面的抑菌作用机制有显著不同。

时间电导率发酵液发酵液发酵液时间分钟电导率图发酵产物对核盘菌菌丝细胞膜透性的影响注发酵产物处理嘧霉胺处理讨论在获得株有效的放线菌后，需要明确其抑菌谱及对靶标致病菌的作用机制。

再根据放线菌的生态习性及将要应用的环境，确定适宜的生产及使用剂型。

由于放线菌具有特殊的生物学及生态学习性在大量发酵生产后如何将其制成高活性适宜较长期保存的制剂，是个亟待研究解决的课题。

要克服对环境敏感的放线菌活菌剂在田间防病效果不稳定的弊端，在实际应用中可以人工改造自然的放线菌获得具有抗药性的菌株，与低剂量的高效低毒低残留的杀菌剂混合使用，这不仅能够明显提高放线菌的防病效果，也会增加其生态竞争能力。

国内外防治菌核病菌等核盘类真菌病害的链霉素菌株尚不多见，董美玉等分离到株能够拮抗油菜菌核病菌的放线菌株，在高温强酸和强碱的环境下抑制活性变化不大。

齐艳春从土壤中分离到株黄色链霉菌，喷施发酵液，有效降低了甜叶菊斑枯病病情指数，防效达，且明显提高了甜叶菊叶片产量，平均增产。

另外，曾庆飞等利用放线菌菌株发酵液用于根结线虫的防治，对根结线虫的击倒率在。

本实验室分离获得的黄色链霉菌除了对黄瓜菌核病菌表现出强烈的抑制活性外，对棉花红腐病菌等种供试菌均表现出不同程度的抑制另外发酵液的热稳定性贮存稳定性紫外光稳定性良好，在对菌核病等真菌病害的生物防治上具有定的应用潜力。

关于放线菌发酵液对核盘菌的作用机制的探索，国内外的文献的报道非常有限，多数文献只是从发酵液对病原菌孢子萌发和菌丝生长的抑制作用入手，探索其对病原菌菌丝造成生长缓慢，扭曲，肿大，畸形，有的顶部出现膨大的泡囊，有的原生质体外露。

因而使菌丝不能向前扩展，失去了侵袭能力。

同时产孢能力下降，孢子萌发率及芽管长度下降。

这可能与发酵液抑制菌丝和孢子的呼吸作用有关。

有报道杀稻瘟菌素便是通过抑制孢子和菌丝的呼吸作用而强烈抑制孢子萌发和菌丝生长的。

此外，发酵液造成敏感菌菌丝尖端形成膨胀泡而破裂，原生质外泄，从而造成溶菌现象，这可能是由于发酵液中的活性物质作用于病原菌的细胞壁细胞膜，造成细胞壁细胞膜破裂而引起的，有此类现象的抗生素很多，研究清楚的为多氧霉素和多烯类抗生素，多氧霉素主要是作为几丁质合成酶的竞争性抑制剂抑制几丁质的合成从而破坏病原菌的细胞壁。

多烯类抗生素通过与质膜中含有的麦角醇作用损伤细胞质膜造成细胞内物质泄漏，而使菌体减少造成溶菌，而放线菌发酵产物处理黄瓜菌核病菌菌丝体，随时间的延长及发酵液浓度的提高，其电导率并未显著升高，在处理后，仍与未处理时即分钟时无显著差异，这表明发酵液对细胞壁细胞膜的作用极小，不同于以往研究的放线菌产生的抗菌物质。

关于其抑菌作用机制，还要进步研究。

参考文献王玉菊，祁红英，等植物土传病害的微生物防治研究进展世界农业，裴炎，李先碧，等抗真菌多肽的分离纯化与特性微生物学报文成敬，牛应泽，等与油菜菌核菌在土壤中存活有关的木霉及其生物防治潜在能力四川农业大学学报范青，田世平，等枯草芽孢杆菌对桃和油桃褐腐病的抑制效果植物学报田宏先，崔林，等马铃薯环腐病菌内生拮抗细菌的分离与筛选山西农业科学廖晓兰，罗宽油菜花上细菌的分离及其对油菜菌核菌的拮抗作用湖南农业大学学报林东，徐庆，等枯草芽孢杆菌分泌蛋白的抑菌作用及抗菌蛋白的分离纯化农业生物技术学报游春平，肖爱萍，等稻瘟病菌拮抗微生物的筛选与鉴定江西农业大学学报余桂容，张敏，等小麦赤霉病的生物防治研究Ⅰ拮抗芽孢杆菌的分离筛选鉴定和防病效果四川农业大学学报张学君，刘焕利，等小麦纹枯病生防菌株产生抗菌物质条件的研究南京农业大学学报魏春妹，张春明，等番茄青枯病生防制剂的研制与应用上海农业学报增刊，程亮，游春平，等拮抗细菌的研究进展西北农业大学学报阮继生，刘志恒，等放线菌研究与应用科学出版社，方羽生，杨卫华，等放线菌对种病原真菌的拮抗作用初探广东农业科学董美玉，许凤春，等株拮抗放线菌菌株发酵液抗菌谱及稳定性的研究贵州大学学报，齐艳春甜叶菊斑枯病生物防治拮抗菌株的筛选中国农学通报曾庆飞，李传浩，等根结线虫拮抗放线菌的筛选与鉴定及其发酵条件的优化中国生物防治张楠，刘训理，等拮抗放线菌的鉴定及抗菌物质粗提物对家蚕主要病原菌的抑制作用蚕业科学祁碧菽，杨文香链霉菌对玉米弯孢霉菌抑制作用的初步研究河北农业大学学报致谢本论文是在导师刘峰副教授和慕卫副教授的悉心指导下完成的，两位导师在我的学习生活中所给予的关心和帮助无以言表。

导师高尚的人格渊博的学识忘我的工作精神和严谨的科学态度时刻影响教育着我，成为今后工作生活中笔宝贵的精神财富。

值此论文完成之际，特向刘老师和慕老师表达我诚挚的敬意。

回忆过去，是为了展望更好的未来，更是鞭策自己。

短暂的本科生学习经历，使我认识到求学就是在困扰和挫折中不断思考和超越自我的过程，没有压力和困难就不会有更大的进步。

研究生期间，我积极进取奋发向上，努力使自己战胜惰性拒绝浮躁，当面对困难时能够的思考，及时发现问题解决问题，在实践中寻找到解决问题的方法。

韩红宁年月号毕业论文题目放线菌发酵液理化性质及发酵产物对核盘菌抑菌机制初探学院植物保护专业班级植检班届次学生姓名韩红宁学号指导教师慕卫副教授二О年六月十日目录中文摘要英文摘要前言生防菌应用的种类拮抗放线菌的主要作用机制本研究的目的及意义材料与方法材料拮抗放线菌发酵液抑菌活性测定方法发酵液的理化性质放线菌发酵产物对核盘菌的抑菌机制研究结果与分析发酵液的理化性质发酵液抗菌谱贮存稳定性热稳定性酸碱稳定性紫外光稳定性发酵产物对核盘菌的抑菌机制结果发酵产物对核盘菌菌丝生长的影响结果发酵产物对核盘菌菌丝形态的影响结果发酵产物对核盘菌菌核形成及单重的影响结果发酵产物对核盘菌菌核萌发的影响结果发酵产物对核盘菌菌丝体细胞膜渗透势的影响结果讨论参考文献致谢放线菌发酵液理化性质及发酵产物对核盘菌抑菌机制初探作者韩红宁植检指导教师慕卫摘要为明确放线菌的理化性质，研究了其抗菌谱，及贮存时间温度酸碱条件紫外光照射等对其发酵液稳定性的影响。

结果表明，发酵液对黄瓜菌核黄瓜蔓枯棉花红腐病菌等有较高的抑制活性贮存稳定性和热稳定性良好，贮存抑菌活性为对照的，处理抑菌活性为对照的对值较敏感，在时活性较高对紫外线稳定，紫外光照射，其活性基本不受影响。

初步研究了发酵产物对核盘菌的抑菌机制，采用菌丝生长速率法测定了其对黄瓜菌核病菌菌丝生长的毒力，及其对菌丝形态菌核形成菌核萌发和菌体细胞膜透性的影响。

结果表明，发酵产物对核盘菌菌丝生长的值为，低于对照药剂乙霉威及嘧霉胺经发酵产物处理后，菌丝形态出现黄化畸形等现象，但尚未发现细胞质外渗菌核形成的时间有所延长，数量有所减少，且重量略有降低在发酵产物浓度为时不能完全抑制菌核萌发对菌体细胞膜渗透势的影响不大。

关键词黄色链霉菌黄瓜菌核病菌发酵液理化特性抑菌机制，前言植物土传病害，其病原菌般为多寄主微生物，通常侵染植物