1、予脱毛备皮，手术区域络合碘消毒次，铺盖无菌巾单见图。取中下腹部做纵行正中切口约长，逐层切开皮肤及皮下，进腹，盐水纱布保护切口见图。显露肠管，将部分肠管拖出腹腔，找到回盲部，取据回盲部约处，切断小肠肠管，于近端小肠残端切除部分肠管，长约。络合碘消毒小肠残端见图。以医用可吸收缝合线做单层间断内翻缝合吻合术行小肠端端吻合。夹闭吻合口两侧肠管，以注射器向肠管内缓慢注入生理盐水，若未见吻合口漏水为吻合成功。吻合过程中注意保护肠系膜血管，以免引起肠管缺血坏死见图。抽签随机分为空白对照组云南白药组及组，每组只。云南白药组吻合口旁喷涂云南白药，组吻合口旁喷涂，对照组吻合口旁喷涂生理盐水见图。彻底止血，肠管回纳入腹腔，以蚕丝线逐层关闭腹腔见图。术后自由进食饮水，术前术后肌注氨苄青霉素万单位万方数据天。术后。

2、物，细胞悬液接种于孔板内，设个空白对照组和个药物实验组，每组设个副空，细胞培养小时后将不同浓度的药物加入实验组，置于培养箱中继续培养，分别于细胞培养后加入，观察不同浓度的云南白药水溶物作用细胞培养小时后细胞的生存率状况。结果大鼠麻醉效果满意，以医用可吸收线吻合肠管，针距约，共缝合针，缝合完毕后肠管注水均未见渗漏。吻合口处喷涂云南白药均匀，效果满意。手术顺利，用时约。吻合口情况术后第天肠吻合口处血供良好，肠管见轻微充血水肿。术后第天吻合口愈合良好，周围见少量疤痕组织生成。术后第天吻合口处见大量疤痕组织，与肠系膜有轻微粘连。吻合口处均未见云南白药残留，药物吸收完全。腹腔粘连情况各组大鼠均具有不同程度的粘连，术后第天云南白药组大鼠腹腔粘连指数明显高于对照组，云南白药组术后第天腹腔粘连指数高于组。

3、混匀，煮沸分钟，蒸馏水定容至，加入碘酸钠充分混匀，过滤。苏木精染液呈紫红色。伊红溶液的配制伊红克，蒸馏水，先将水溶性伊红加入蒸馏水中，用玻万方数据璃棒将伊红搅起泡沫后过滤，每加冰乙酸滴。二实验设计雄性大鼠只，由南华大学动物实验部提供。行肠切除肠吻合术后，抽签随机分为空白对照组云南白药组及组，每组只。云南白药组吻合口旁喷涂云南白药，组吻合口旁喷涂，对照组吻合口旁喷涂生理盐水。分别于吻合术后的第天个时间点各组随机取只动物处死。取吻合口附近肠管行吻合口爆破压测定吻合口处羟脯氨酸测定染色染色及免疫组化检测吻合口表达。三实验方法动物实验手术在南华大学外总实验室模拟手术室进行见图。术前开始禁食，自由饮水，大鼠称重后，以氯胺酮腹腔麻醉。麻醉满意后，大鼠取仰卧位，固定四肢及头部。取中下腹部拟行手术切口区。

4、检查无漏后抽签随机分为空白对照组云南白药组与组。予吻合口旁对照组喷涂生理盐水，云南白药组喷涂云南白药，组喷涂。分别于术后第天各组大鼠麻醉处死只，大体观察肠吻合口吻合情况，有无吻合口漏局部炎症反应及腹腔粘连情况检测各组吻合口爆破压羟脯氨酸含量及吻合口组织染色染色免疫组化组织学改变，评价两种药物对吻合口的影响。第二部分云南白药水溶物的抑菌作用研究。配置不同浓度的云南白药水溶物，各药物组浸泡直径圆形灭菌纸片，并过夜。阴性对照组纸片浸泡于无菌生理盐水中。将纸片置于接种有金黄色葡萄球菌大肠杆菌绿脓杆菌白色念球菌的培养皿中，观察抑菌环的大小，评价云南白药水溶物对四种细菌的抑制作用，间接证明云南白药的促吻合口愈合的作用。第三部分云南白药水溶物的抗肿瘤作用研究。取前期配制的不同浓度的万方数据云南白药水溶。

5、物能够抑制金黄色葡萄球菌绿脓杆菌等细菌的生长，预防吻合口处局部感染。云南白药水溶物对结肠癌细胞具有定的抑制作用，且具有浓度依赖性。关键词云南白药三七总皂苷肠吻合促进愈合万方数据海梅特勒托利多有限公司万像素数码相机索尼电热恒温水箱天津市泰斯特仪器有限公司可见分光光度计上海菁华科技仪器有限公司烤箱上海跃进医疗器械消毒锅日本公司生物机能实验系统成都泰盟科技有限公司麦克奥迪厦门销售有限公司移液器北京平利洋医疗设备有限公司移液器北京平利洋医疗设备有限公司光学显微镜日本奥林巴斯公司倒置显微镜日本奥林巴斯公司试纸上海三爱思试剂有限公司主要试剂配制的配制浓盐酸为，于蒸馏水稀释为。苏木精改良配法液苏木精克，无水乙醇液硫酸铝钾克，蒸馏水硫酸铝钾放入蒸馏水，适当加热，至其完全溶解将苏木精溶于无水乙醇中将液与液。

6、第天个时间点各选只大鼠处死，行各项指标检测。云南白药与药量的确定目前临床关于局部用药量的问题大多没有明确规定，很多药品说明书给出的都是“适量”，本实验参照皮肤用药的原则，予以初步探索。大鼠小肠直径约，药物喷涂面积为吻合口两侧各旁开，厚度为，称的云南白药的质量约为，故大鼠吻合口处喷涂的云南白药药量约为。剂量确定方法同上。大体观察观察术后大鼠生存状况，有无死亡，分别于术后第天麻醉处死大鼠，开腹，观察有无腹水，有无吻合口漏吻合口感染，观察腹腔肠系膜粘连情况，腹腔内粘连分级根据提出的分级法予以评定。评价标准见表。表腹腔内粘连分级评定标准评价标准得分无粘连单的易分离的粘连不很广泛的轻微粘连，能够抵抗定的分离拉力大量广泛内脏粘连，伴有肠壁张力增大大量广泛紧密粘连，包括邻近肠系膜肠管以及网膜直至腹壁的。

7、对照组组术后第天腹腔粘连指数均高于对照组。爆破压情况术后第天，云南白药组吻合口爆破压明显高于对照组，同时也高于组，组高于对照组随着时间的推移，各组吻合口爆破压成升高趋势，术后第天，云南白药组明显高于对照组与组，组吻合口爆破压稍高于对照组。术后第天，云南白药组与组均明显高于对照组。羟脯氨酸测定术后对照组云南白药组及组的均随着时间的推移缓慢升高。术后第天，云南白药组均高于组和对照组术后第天组也明显高于对照找组术后第天，组稍高于对照组。染色观察随着时间的推移，各组吻合口炎症逐渐减弱，云南白药组表现较为明显。术后第天，云南白药组的炎症反应程度明显低于组和对照组。万方数据染色胶原纤维呈蓝色，肌肉纤维素呈红色，胞核黑蓝色。术后第天，各组吻合口组织均见少量的胶原纤维，且可见胶原纤维比较纤细杂乱无章，随。

8、同组别间差异，炎症反应评价标准见表表炎症反应评价标准评价标准得分中性粒细胞弥漫性浸润，组织广泛坏死积中性粒细胞多灶性浸润组织多灶性坏死以淋巴细胞巨噬细胞为主，有部分中性粒细胞，组织少量点状坏死以淋巴细胞巨噬细胞为主，组织无坏死三色染色吻合口组织经福尔马林固定后，常规石蜡包埋，切片，常规脱蜡至水。苏木素染流水冲洗，的盐酸酒精分化流水冲洗，温水返蓝流水冲洗。丽春红酸性品红加温染，蒸馏水冲洗。磷钼酸分化，不洗，擦净载玻片上的磷钼酸残液，至胶原呈淡红色，但肌肉纤维仍呈鲜红色。苯胺蓝复染，的酒精冲洗，酒精及无水酒精脱水。常规脱水，透明，中性树胶封固。法检测表达烤片分钟，万方数据常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水二甲苯⇒二甲苯⇒酒精⇒酒精⇒酒精⇒酒精⇒酒精阻断灭活内源性过氧化物酶孵育，冲洗抗原修复置枸橼酸。

9、着时间的推移，胶原合成越来越多，且其排列方向呈现定的趋向性。同时期相比，云南白药组吻合口组织胶原含量明显高于对照组和组，胶原纤维较粗大致密，且趋向性更加明显。组较对照组也表现轻微优势。免疫组化结果随着时间的推移，各组阳性表达细胞呈逐渐升高趋势，前期，云南白药组升高最为明显。同期相比，术后第天，云南白药组明显高于组和对照组，组高于对照组。术后第天，云南白药与的促血管生成作用优势稍减弱。培养后，云南白药水溶物对四种细菌的生长均表现定的抑制作用，其中云南白药水溶物对金黄色葡萄球菌抑制作用最为明显。不同浓度的云南白药水溶物作用细胞后对细胞均具有定的抑制作用，且为。结论局部使用云南白药或，在胃肠吻合口愈合的前期具有明显的促进作用，且云南白药的效果优于云南白药粉剂不宜直接应用到肠管浆膜面。云南白药水。

10、混匀后，转分离心分钟，取上清作检测。按照下表依次加入试剂空白管标准管测定管蒸馏水标准应用液检测液试剂混匀，静置分钟试剂二混匀，静置分钟试剂三混匀，水浴分钟，冷却后，转分离心分钟。取上清在处，光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。按以下公式计算样品中羟脯氨酸含量。染色组织石蜡切片在置于温箱烘烤小时，二甲苯脱蜡。羟脯氨酸含量湿重测定管吸光度空白管吸光度标准管吸光度空白管吸光度标准管含量水解液总体积组织湿重万方数据不同梯度的乙醇各和蒸馏水水化。苏木精。自来水冲洗，使组织发蓝，再的盐酸乙醇分色，以洗去多余的染料，切片变红，自来水洗，切片变蓝。不同梯度的乙醇分别脱水。的伊红乙醇分色。的乙醇ⅠⅡ分别脱水。二甲苯ⅠⅡ分别透明。中性树脂封片，显微镜观察并摄像。观察吻合口组织炎症反应程度，予以炎症反应分级，对比。

11、缓冲液中用煮沸自然冷却以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，冲洗。正常羊血清工作液封闭倾去勿洗。滴加抗冰箱孵育过夜，冲洗用缓冲液代替抗作阴性对照滴加生物素标记二抗，孵育，冲洗滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，孵育，冲洗反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。使用图像处理软件，分析阳性表达的平均灰度值，并统计学分析。四统计学分析应用软件进行统计分析。计量数据以均数ⅹ表示，组间比较使用单因素方差分析，具有统计学意义。万方数据结果大鼠肠切除肠吻合术手术在南华大学外总实验室模拟手术室进行。大鼠麻醉比较满意，进腹后观察，解剖结构清晰，小肠肠管红润，未见明显肠内容物，说明禁食效果满意。距回盲部约处行小肠肠切除肠吻合术，以医用可吸收线吻合肠管，针距约，共缝合针。

12、连吻合口爆破压测定切取吻合口及其周围约肠管，肠管的端连接生物机能实验系统，并固定，另端连接注射器见图。肠管残端与注射器针头紧密固定，用注射器向肠管内缓慢注射生理盐水，同时观察压力曲线，当压力曲线突然下降时，读取此刻数值，即为吻合口爆破压。图爆破压测定装置图爆破压测定曲线万方数据羟脯氨酸测定使用样本酸水解法经脯氨酸测试盒检测，具体步骤如下准确称取吻合口组织湿重，剪碎，加，放磨口试管中加盖，沸水浴水解小时。调值至左右将各试管流水冷却后加入指示剂滴，并摇匀各管准确加入调甲液，混匀各管加入调的乙液，混匀，并用试纸测，大约在之间，各管逐滴小心加入乙液，每滴加入后均要混匀，直至液体中指示剂的颜色变成黄绿色，此时值在左右然后加蒸馏水定容至，混匀。取稀释的水解液，加入活性炭，以上清液离心后澄清无色为准，。

参考资料：

[1]雨雪天气出行安全与保暖知识宣传学习PPT课件 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[2]雨雪天气出行安全与保暖知识宣传学习PPT课件 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[3]雨雪天气出行安全与保暖知识宣传学习PPT课件 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[4]雨雪天气出行安全与保暖知识宣传学习PPT课件 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[5]雨雪天气出行安全与保暖知识宣传学习PPT课件 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[6]雨雪天气出行安全与保暖知识宣传学习PPT课件 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[7]雨雪天气出行安全与保暖知识宣传学习PPT课件 编号202（第20页，发表于2022-06-24）

[8]雨雪天气出行安全与保暖知识宣传学习PPT课件 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[9]雨雪天气出行安全与保暖知识宣传学习PPT课件 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[10]增强党的意识坚定理想信念党课宣传学习PPT课件 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[11]增强党的意识坚定理想信念党课宣传学习PPT课件 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[12]增强党的意识坚定理想信念党课宣传学习PPT课件 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[13]增强党的意识坚定理想信念党课宣传学习PPT课件 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[14]增强党的意识坚定理想信念党课宣传学习PPT课件 编号238（第22页，发表于2022-06-24）

[15]增强党的意识坚定理想信念党课宣传学习PPT课件 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[16]增强党的意识坚定理想信念党课宣传学习PPT课件 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[17]增强党的意识坚定理想信念党课宣传学习PPT课件 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[18]增强党的意识坚定理想信念党课宣传学习PPT课件 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[19]增强党的意识坚定理想信念党课宣传学习PPT课件 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[20]最美公务员争做人民好公仆、从“最美公务员”中汲取精神力量，为实现中华民族伟大复兴而奋斗PPT课件 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）