【课堂设计】2015-2016学年高中生物 4.2.1 基因工程的操作程序（Ⅰ）课件 北师大版选修3

标记基因缝合限制酶磷酸二酯键连接酶连接酶保存复制限制酶单切点知识储备区本课栏目开关常用载体质粒质粒是种的结构于细菌之外，并具有能力的分子。

最常用的质粒是的质粒，其中含有。

抗生素抗裸露简单拟核自我复制双链环状大肠杆菌性基因知识储备区本课栏目开关探究点目的基因的获得目的基因观察下图，回答相关问题学习探究区本课栏目开关图中为目的基因，目的基因是指。

目前，获取目的基因的方法主要有两种法和从基因组中法。

化学合成法材料自动合成仪工作原理是依照蛋白质的氨基酸序列，通过密码子推导出其碱基序列，然后直接合成目的基因。

直接分离胰岛素基因人们化学合成所需要的进行研究的基因学习探究区本课栏目开关材料中展示的是利用直接合成基因的方法即化学合成法。

化学合成法适用的条件是目的基因的制备。

到目前为止，已经成功地合成了人的生长激素释放抑制因子表皮生长因子等数十种基因。

白细胞介素Ⅱ化学反应已知核苷酸序列的相对分胰岛素干扰素子质量较小的从基因组中直接分离法传统方法鸟枪法结合的溶液Ⅰ溶液Ⅱ学习探究区本课栏目开关以离心，取于另新管中。

加入等体积的异丙醇或乙醇，混匀后静置于冰箱的冷冻室。

离心，弃上清液。

待沉淀稍干后，溶于蒸馏水中。

取两支试管，分别加入蒸馏水，其中的支加入提取的质粒溶液，向两支试管中各加入，混匀后，放入沸水中加热。

⑩待试管冷却后，观察两支试管中溶液颜色的变化发现，加入提取的质粒的溶液变，另个不变色。

蓝上清液预冷二苯胺学习探究区本课栏目开关基因表达载体的构建目的基因与运载体结合的过程，实质上是不同来源的重新组合的过程，其基本过程如下以质粒作为运载体，结合教材，由材料思考学习探究区本课栏目开关构建基因表达载体的目的使目的基因在，并且可以。

使目的基因能够作用。

基因表达载体的构建过程基因表达载体的构建切割质粒，使环状质粒出现个切口，露出。

用切割目的基因，使目的基因暴露出两个与质粒相同的黏性末端。

同样的限制性内切酶受体细胞中稳定存在遗传给表达和发挥限制性内切酶末端下代学习探究区本课栏目开关用使有同样黏性末端的质粒和目的基因结合成新表达载体。

目的基因和运载体起进入受体细胞的原因保护目的基因不被受体细胞识别并破坏。

环状质粒分子连接酶小贴士切割质粒和目的基因的限制酶必须是同种酶，以获得互补的黏性末端，利于重组质粒的构建。

插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作运载体的质粒的插入部位前须有启动子，否则目的基因无法转录，后须有终止子，转录才能停止。

终止子是分子上决定转录停止的三个相邻碱基终止密码子是指分子上决定翻译停止的三个相邻碱基。

学习探究区本课栏目开关归纳提炼将目的基因导入受体细胞前构建基因表达载体的原因目的基因是指编码蛋白质的结构基因，没有启动子。

若只将目的基因导入受体细胞中则无法转录。

目的基因的表达需要调控序列，因而用作运载体的质粒在插入目的基因前须有启动子，后须有终止子。

检测目的基因是否导入受体细胞中需要有筛选标记标记基因。

因此，个基因表达载体的组成应该包括启动子终止子目的基因标记基因。

学习探究区本课栏目开关活学活用如图为表达载体的模式图，若结构是表达载体所必需的，则最可能是氨苄青霉素抗性基因启动子限制酶连接酶学习探究区本课栏目开关解析启动子是该表达载体所必需的，功能是启动插入基因的转录过程。

氨苄青霉素抗性基因可以作为标记基因，但不是必须用它作标记基因。

限制酶和连接酶都不是表达载体所需要的。

答案学习探究区本课栏目开关目的基因的获得从基因组中直接分离法法仪扩增基因表达载体的构建启动子目的基因终止子标记基因反转录法化学合成法鸟枪法目的基因学习探究区本课栏目开关基因工程的操作程序Ⅰ学习目标定位了解目的基因的含义，掌握目的基因的常用获取方法。

通过实验掌握基因表达载体的构建。

掌握大肠杆菌质粒的提取。

本课栏目开关限制性内切酶简称。

来源主要是从中分离纯化而来的类酶。

种类约种。

功能识别双链分子种使每条链中的断开。

功能特点识别序列和酶切位点的。

专性限制酶原核生物特定核苷酸序列特定部位的两个核苷酸之间磷酸二酯键知识储备区本课栏目开关酶切结果黏性末端当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧切开时错切，产生的是黏性末端。

黏性末端是指双链被限制酶切开后，切口处的两个末端伸出的由若干核苷酸组成的单链。

平末端当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时平切产生的则是平末端。

知识储备区本课栏目开关连接酶作用将两个分子片段起来，恢复被切开了的两个核苷酸之间的。

种类和。

进入受体细胞的载体必备条件在宿主细胞中能下来并能大量多个，供外源片段插入有定的，便于筛选。

标记基因缝合限制酶磷酸二酯键连接酶连接酶保存复制限制酶单切点知识储备区本课栏目开关常用载体质粒质粒是种的结构于细菌之外，并具有能力的分子。

最常用的质粒是的质粒，其中含有。

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目前，获取目的基因的方法主要有两种法和从基因组中法。

化学合成法材料自动合成仪工作原理是依照蛋白质的氨基酸序列，通过密码子推导出其碱基序列，然后直接合成目的基因。

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化学合成法适用的条件是目的基因的制备。

到目前为止，已经成功地合成了人的生长激素释放抑制因子表皮生长因子等数十种基因。

白细胞介素Ⅱ化学反应已知核苷酸序列的相对分胰岛素干扰素子质量较小的从基因组中直接分离法传统方法鸟枪法结合教材，完成“鸟枪法”分离目的基因的步骤学习探究区本课栏目开关限制性内切酶同样的限制性内切酶连接酶质粒转化细菌克隆“鸟枪法”分离基因示意图学习探究区本课栏目开关现代方法扩增和反转录法设计引物，利用的条件是在掌握了目的基因的部分或全部信息后。

反转录法以为模板，借助，通过仪合成与序