【医学PPT课件】核酸扩增仪 临床检验仪器学

特点仪器体积较大，但变温快时间准温度均，目前国内应用较少。

普通定性核酸扩增仪变温金属块式仪中心是由铝块或不锈钢制成的热槽，上有不同数目甚至不同规格的凹孔，用来放置样品管。

凹孔内壁加工精密，保证与样品管紧密接触。

般通过半导体加热和冷却，并由微机控制恒温和冷热处理过程，通过键盘和显示器实现人机交流，并可编程存储或删除程序。

特点仪器装置比较牢固耐用，温度变换平稳，有利于保持聚合酶的活性。

普通定性核酸扩增仪变温气流式仪由机壳热源冷空气泵控制器及辅助元件等组成。

热源由电阻元件和吹风机组成，形成热空气枪借空气作为热传播媒介，由大功率风扇及制冷设备提供外部冷空气制冷，精确的温度传感器构成不同的温度循环。

特点仪器不用金属精密加工，成本较低整个系统没有液体流动及制冷剂，安全程度高。

配上微机和软件，可灵活编程。

普通定性核酸扩增仪按照功能用途可分为以下两类梯度仪原位仪普通定性核酸扩增仪梯度仪由普通仪衍生出的具温度梯度功能的核酸扩增仪。

多种变性温度和延伸温度可在台扩增仪上同时完成既节省实验时间提高实验效率，又节约实验成本。

梯度仪每个孔的温度可以在指定范围内按照梯度设置，根据扩增结果，步就可以摸索出最适退火条件。

普通定性核酸扩增仪原位仪是原位杂交与技术的结合。

在细胞内进行扩增，而不破坏组织细胞的形态。

解决了以往手工方法操作复杂，扩增效果及实验结果重复性不理想的问题。

与普通仪的区别其样品基座上有若干平行的铝槽，每条铝槽内可垂直放置张载玻片，每张载玻片面均与铝槽紧密接触，温度传导极佳，控温很精确。

实时荧光定量核酸扩增仪荧光定量仪公司荧光定量仪公司荧光定量仪实时荧光定量核酸扩增仪实时荧光定量，技术是在反应体系中加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实地反映了体系中模板的增加，通过检测荧光信号达到定量的目的。

实时荧光定量核酸扩增仪实时荧光定量核酸扩增仪由两部分组成系统和荧光检测系统。

荧光检测系统主要包括激发光源和检测器，现在的主流的样品槽开始其他定量反应，使用效率非常高。

升降温速度高达，控温精度高。

每个模块控制的激发光源和检测器直接与反应管壁接触，保证荧光激发和检测不受外界干扰。

各孔控温的荧光定量仪该类仪器整合多通道光学检测系统，能有效分辨多种荧光染料，可对同样品进行多靶点分析，同时检测四种荧光信号。

可使用探针分子信标引物等多种检测方法，定量线性范围可达个数量级。

其软件允许台仪器同时操作多个样品模块，既满足高速批量要求，又能灵活运用，还可实现任意梯度反应。

缺点上样不如传统方法方便，而且需要独特的扁平反应管，使用成本较高。

适合多指标快速检测，但目前在国内应用尚少。

第二节扩增仪的分类与结构Ⅱ荧光定量仪第三节核酸扩增仪的性能指标操作规程及常见故障的排除核酸扩增仪的性能指标核酸扩增仪的操作规程核酸扩增仪常见故障的排除核酸扩增仪的性能指标性能指标温度控制荧光检测其他温度的准确性热盖温度不同模式下的相同温度特性升降温的速度温度的均性值重复性误差检测通道数量荧光检测范围基座容量和样品数软件功能温度控制温度的准确性是指样品孔温度与设定温度的致性，是反应最重要的影响因素之，直接关系到实验的成败。

温度的均性是指样品孔间的温度差异，关系到不同样品孔之间反应结果的致性。

如“位置的边缘效应”会影响结果的可重复性。

升降温的速度升降温速度快，能缩短反应进行的时间，提高工作效率，提高反应特异性。

温度控制升降温的速度升降温速度快，能缩短反应进行的时间，提高工作效率，提高反应特异性。

热盖温度热盖可使样品管顶部温度达到左右，避免蒸发而改变反应体积，无需再向反应管内添加石蜡油，减少了后续实验的麻烦。

荧光检测值重复性误差荧光检测范围检测通道数量其他常用样品管管联排管孔微孔板等其他新型的仪都常规使用优质配套软件，此类软件易学易用，还具有实时信息显示记忆存储多个程序，及自动倒计时自动断电保护等功能，很多仪器还可以免费升级。

第三节扩增仪的性能指标操作规程常见故障的排除核酸扩增仪的操作规程普通扩增仪的操作非常简便，接通电源，仪器自检，按照程序设置温度或调出储存的程序运行即可。

定量扩增仪的操作和普通仪基本相同。

核酸扩增仪常见故障的排除荧光染料污染样品孔请工程师清洁样品孔管融化可能是温度传感器出问题或是热盖出问题，需工程师检修个别孔扩增效率差异很大可能的原因是半导体模块出现坏点，需工程师检修核酸扩增仪常见故障的排除荧光强度减弱或不稳定原因有滤光片发霉或有水汽等，需工程师检修或光源损耗需更换光源或需调节检测元件灵敏度，也需工程师调试仪器工作时出现噪声可能的原因是管没有放好或风扇松动，需工程师检修核酸扩增仪常见故障的排除仪器采集荧光时有不正常的噪声些光纤传导信号的定量仪可能出现这问题，需工程师检修或更换配件机器搬动后不能正常工作或不能正常采集荧光信号对于些光路系统复杂的仪器，应尽量避免自行搬动仪器。

出现这种情况后需工程师重新调试反应假阴性原因很多，其中仪控温不准也是个重要原因，可使用电子测温仪校准温度。

第四节核酸扩增仪的临床应用感染性疾病的分子诊断和研究遗传性疾病的分子诊断和研究恶性肿瘤的分子诊断和研究在移植配型中的应用在法医学中的应用在分子生物学其他领域的应用第十三章核酸扩增仪教学基本要求掌握核酸扩增仪的工作原理和主要性能指标。

掌握梯度仪和原位仪的功能和特点。

掌握实时荧光定量扩增仪的种类及特点。

熟悉技术的原理扩增仪的种类荧光实时定量技术原理。

了解扩增仪的操作规程扩增仪常见故障的排除扩增仪的应用。

内容提要第节核酸扩增仪的工作原理第二节核酸扩增仪的分类与结构第三节核酸扩增仪的性能指标操作规程及常见故障的排除第四节核酸扩增仪的临床应用第节核酸扩增仪的工作原理技术的发展简史技术的原理核酸扩增仪的工作原理技术的发展简史年，等描述的项基于酶的体外复制实验。

年美国公司在开车前去北加利福尼亚红树县的条被月光笼罩的山路上构思了。

年，因此项技术获诺贝尔化学奖。

技术的发展简史技术的原理技术的本质是核酸体外扩增加热使双链解开螺旋，在退火温度条件下引物同模板杂交，在聚合酶和合适缓冲液存在条件下延伸引物，重复“变性退火引物延伸”过程至个循环，呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。

技术的原理循环第步加热变性技术的原理循环第二步引物与模板分子退火技术的原理循环第三步引物延伸技术的原理第个循环完成后得到两个拷贝的靶序列技术的原理次循环后靶序列扩增的数量循环数扩增产物量，核酸扩增仪的工作原理核酸扩增仪的工作关键是温度控制核酸扩增仪的工作原理控温方式水浴锅控温压缩机控温半导体控温离心式空气加热控温第二节核酸扩增仪的分类与结构普通定性核酸扩增仪实时荧光定量核酸扩增仪普通定性核酸扩增仪按照变温方式分为以下三类水浴式仪变温金属块式仪变温气流式仪普通定性核酸扩增仪水浴式仪般由三个不同温度的水浴槽和机械臂组成。

采用半导体传感技术电子技术和计算机技术进行水浴温度的测量显示和控制并经计算机控制由机械臂完成样品在每个水浴槽的置放以及槽间的移动。

特点仪器体积较大，但变温快时间准温度均，目前国内应用较少。

普通定性核酸扩增仪变温金属块式仪中心是由铝块或不锈钢制成的热槽，上有不同数目甚至不同规格的凹孔，用来放置样品管。

凹孔内壁加工精密，保证与样品管紧密接触。

般通过半导体加热和冷却，并由微机控制恒温和冷热处理过程，通过键盘和显示器实现人机交流，并可编程存储或删除程序。

特点仪器装置比较牢固耐用，温度变换平稳，有利于保持聚合酶的活性。

普通定性核酸扩增仪变温气流式仪由机壳热源冷空气泵控制器及辅助元件等组成。

热源由电阻元件和吹风机组成，形成热空气枪借空气作为热传播媒介，由大功率风扇及制冷设备提供外部冷空气制冷，精确的温度传感器构成不同的温度循环。

特点仪器不用金属精密加工，成本较低整个系统没有液体流动及制冷剂，安全程度高。

配上微机和软件，可灵活编程。

普通定性核酸扩增仪按照功能用途可分为以下两类梯度仪原位仪普通定性核酸扩增仪梯度仪由普通仪衍生出的具温度梯度功能的核酸扩增仪。

多种变性温度和延伸温度可在台