素的方法之。图是该方法所用的基因表达载体，图表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程融合蛋白分别表示半乳糖苷酶与胰岛素链融合的蛋白。请回答下列问题图图图基因表达载体中没有标注出来的基本结构是。图中启动子是酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达氨苄青霉素抗性基因的作用是。构建基因表达载体时必需的工具酶有。半乳糖苷酶与胰岛素链或链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于。溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的链或链，且半乳糖苷酶被切成多个肽段，这是因为。根据图中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量。你的推测结果是，理由是。答案终止子聚合作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来限制酶和连接酶防止胰岛素的链被菌体内蛋白酶降解半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸，而胰岛素链中不含甲硫氨酸至少个两条肽链的端各有个游离的氨基，氨基酸基团中可能还含有游离的氨基福建卷，是种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含基因的表达载体如图所示，并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是。构建含基因的表达载体时，需选择图中的限制酶进行酶切。经酶切后的载体和基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有种单个载体自连基因与载体正向连接基因与载体反向连接如图所示。为鉴定这种连接方式，选择酶和酶对筛选得到的载体进行双酶切，并对酶切后的片段进行电泳分析，结果如图所示。图中第泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测基因是否成功表达，可用相应的与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到定密度时，需进行培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。解析动物细胞间的物质主要成分是蛋白质，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理段时间，目的是使组织中的细胞分散成单个细胞。据图可知，基因两端和载体上都有限制酶的酶切位点。据图可知，用和限制酶对三种载体进行酶切，单个载体自连只有限制酶的酶切位点，得到的片段正向连接重组载体有和限制酶的酶切位点，得到的片段和的片段反向连接重组载体有和限制酶的酶切位点，得到的片段和的片段。检测目的基因是否成功表达，可采用抗原抗体杂交法。培养的原代细胞贴满瓶壁重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程通常称为传代培养。传代培养的细胞般传至代后就不易传下去，科研上使用的正常细胞通常为代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。答案使细胞分散开抗体传代区分连接酶和聚合酶限制性核酸内切酶和解旋酶连接酶连接两个片段，而聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。限制性核酸内切酶是切割种特定的脱氧核苷酸序列，并使两条链在特定的位置断开，而解旋酶是将的两条链间的氢键打开形成两条单链。启动子起始密码终止子终止密码根据受体种类确定基因工程的受体细胞植物植物体细胞或受精卵动物受精卵或体细胞微生物细菌。注目的基因导入受体细胞不是基因工程成功的标志，基因工程是否成功在于目的基因是否成功表达。题组综合考查基因工程的应用及蛋白质工程江苏单科，小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因目的基因后再重组表达。下列相关叙述正确的是多选设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列用方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列体系中定要添加从受体细胞中提取的聚合在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重蔗糖浓度和的变化如图所示。细胞干重在后下降的原因有培养液中蔗糖的作用是。多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常用纤维素酶和酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞经诱导处理后，观察到染色体数为的细胞，合理的解释是。为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有填序号。选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋必须在光照条件下培养培养过程中需通空气固定化后植物细胞生长会变慢解析外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为脱分化。蔗糖在细胞培养的过程中不断被消耗，细胞干重在后下降的原因有蔗糖浓度下降，降低。蔗糖的作用是提供能源和调节渗透压。秋水仙素低温可诱导染色体数目加倍。般采用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁的细胞经染色体加倍后变成，处于有丝分裂后期时，染色体数目再加倍，变成或者经加倍到的细胞处于有丝分裂中期。植物细胞的固定化过程不需要光的参与，般选旺盛生长的愈伤组织细胞包埋，正确培养过程中需通空气，使细胞进行有氧呼吸，正确固定化后植物细胞与外界培养液的物质交换会受定的影响，生长会变慢，正确。答案脱分化蔗糖浓度下降，降低提供能源调节渗透压秋水仙素低温果胶经加倍到的细胞处于有丝分裂后期经加倍到的细胞处于有丝分裂中期高考必记关键点植物组织培养的关键条件离体，定营养物质，激素生长素细胞分裂素等。培养基状态固体培养基需脱分化生根培养基及生芽培养基。体内细胞未表现全能性的原因基因的表达具有选择性。植物激素的使用脱分化阶段细胞分裂素比例较高，以促进细胞的分裂再分化阶段生长素比例较高，以促进芽与根的形成。光照的使用脱分化阶段不需要给予光照，再分化阶段需要给予光照，以利于叶绿素的形成。植物体细胞杂交的关键酶解法用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。促融剂聚乙二醇。杂种细胞的形成标志新细胞壁的形成。培养杂种植株的技术植物组织培养。培养成功的原理细胞全能性。动物细胞培养的特殊条件胰蛋白酶的两次使用首先用胰蛋白酶处理动物的器官或组织，以制备单细胞悬液培养过程中发生接触抑制时，同样要用胰蛋白酶使细胞分散开。避免杂菌污染的措施培养液及培养用具灭菌处理，加入定量的抗生素，定期更换培养液。特殊的营养条件液体培养基。加入动物血清血浆等。通入氧气以满足代谢的需要。通入二氧化碳以维持培养液的。克隆动物的技术手段动物细胞培养核移植早期胚胎培养和胚胎移植。题组植物细胞工程江苏单科，明党参是我国珍稀药用植物，对其进行保护性开发利用的方法有多选设计细胞培养反应器，实现药用成分的工厂化生产大量培养愈伤组织，直接提取药用成分大规模栽培组织培养苗，获取药用成分利用组织培养获得胚状体，制工种子解析保护珍稀药用植物，可利用植物组织培养技术，获取试管苗或人工种子，通过栽培或种植，获得药用成分也可以培养到愈伤组织阶段后，直接提取药用成分，或通过处理得到细胞悬液，利用细胞培养反应器进行药用成分工厂化生产，故四个选项都正确。答案江苏单科，下列有关植物组织培养的叙述，正确的是愈伤组织是团有特定结构和功能的薄壁细胞二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株用人工薄膜将胚状体愈伤组织等分别包装可制工种子植物耐盐突变体可通过添加适量的培养基培养筛选而获得解析在普通培养基中添加适量的，制成选择培养基，可用来筛选植物耐盐突变体，故选项正确。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是团没有特定结构和功能并处于旺盛分裂状态的薄壁细胞二倍体植株的花粉经离体培养后得到单倍体植株，该单倍体高度不育，不能稳定遗传用人工薄膜将胚状体等进行包装可制工种子，愈伤组织不能作为制作人工种子的材料，故选项错误。答案根据图示回答相关问题过程中使用了酶，以使植物原生质体相互分离，此处使用的溶液浓度较大，保证植物细胞会发生，以保护细胞原生质体不被破坏在动物细胞培养技术中，使细胞分离开来的酶是。处的细胞与处的细胞相比，最大的区别是不具有动物细胞与处的细胞相比，在功能上的特点是不具有。过程属于再分化动植物细胞发生分化的根本原因都是。处的细胞在化学药剂的作用下，会发生细胞融合动物细胞融合方法与植物细胞不相同的是。解析从题中图示可知，过程是使用含有纤维素酶和果胶酶的高浓度溶液处理植物叶片的细胞，使植物叶片的细胞发生质壁分离且原生质体相互分离，处植物细胞的部分细胞壁已经被水解，处是去除了细胞壁的植物细胞原生质体，处是再生出细胞壁的植物细胞，处是再生出细胞壁的细胞进行了第次分裂，处是再生出细胞壁的细胞进行了第二次分裂，处是再生出细胞壁的细胞经多次细胞分裂形成了集群的细胞团，处是形成的愈伤组织，是发生再分化的过程，⑩是胚状体继续分化的过程。答案纤维素酶和果胶质壁分离胰蛋白酶细胞壁分化的全能性⑩基因的选择性表达聚乙二醇可以使用灭活的病毒杂种细胞形成的标志新的细胞壁的生成。杂种植株遗传物质的变化杂种植株的变异类型属于染色体变异，杂种植株的染色体数目通常是两亲本体细胞染色体数目之和，杂种植株属于异源多倍体。动物细胞融合形成杂交细胞，杂交细胞进行细胞培养，获得大量的克隆细胞，但没有形成生物体，因此动物细胞融合的原理是细胞增殖和细胞膜的流动性，不包含细胞全能性。题组动物细胞工程重庆卷，如图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述正确的是是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应淋巴细胞中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群解析是获得的已经免疫的淋巴细胞，项错误胰蛋白酶使得组织块分散为单个细胞，项错误同时具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞的特性，项错误是经筛选后获得的能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，项正确。答案江苏单科，下列事实能体现细胞全能性的是多选棉花根尖细胞经诱导形成幼苗单细胞的在体外大量扩增动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体小鼠体细胞经诱导培育成小鼠解析本题考查细胞全能性的知识。棉花根尖细胞经诱导形成幼苗，小鼠体细胞经诱导培育成小鼠，这均是细胞发育成完整个体，体现了细胞的全能性，故符合题意在体外大量扩增属于克隆，故不符合题意单克隆抗体的制备属于动物细胞融合的应用，故不符合题意。专题基因工程与细胞工程考纲要求基因工程的诞生。基因工程的原理及技术。基因工程的应用。蛋白质工程。植物的组织培养。动物的细胞培养与体细胞克隆。细胞融合与单克隆抗体。连接酶基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞药物基因自然界中没有全能性体细胞杂交细胞增殖动物细胞核化学法抗原江苏卷，下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图图中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题考点基因工程典例引领个图所示的质粒分子经Ⅰ切割前后，分别含有个游离的磷酸基团。若对图中质粒进行改造，插入的Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越。用图中的质粒和外源构建重组质粒，不能使用Ⅰ切割，原因是。与只使用Ⅰ相比较，使用Ⅰ和Ⅲ两种限制酶同时处理质粒外源的优点在于可以防止。为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。为了从文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失