降低产量和质量，给生产者造成经济损失。牛奶中抗生素残留产生的原因对泌乳期奶牛的用药治疗对泌乳期奶牛用药不当或不注意安全时间是造成牛乳中抗生素残留的重要原因，尤其是采用乳房灌注治疗奶牛乳房炎时，更易造成牛乳中抗生素的残留。美国食品和药品管理局调查结果表明，用药不当是造成牛乳中抗生素残留的主要原因。抗生素作为奶牛饲料添加剂使用在饲料中添加抗生素，可有效抑制或杀灭畜体内的有害微生物，维持畜体胃肠道微生物的平衡，从而促进动物的健康，提高其生产性能但是，奶牛如果长期食用含抗生素的饲料，很容易造成牛奶中抗生素残留，这也是造成牛奶中抗生素残留问题的个重要原因。受到抗生素污染的挤奶工具和贮奶用具些奶牛场由于操作不规范，在尚未彻底清洗和消毒患乳房炎的奶牛使用过的挤奶工具和贮奶设备情况下，用于其它健康牛只，造成抗生素残留问题。在牛奶中加入抗生素防止牛奶腐败些不法交奶户在高温季节为了防止牛奶酸败，在牛奶中掺杂各种抗生素通过抑制细菌生长以达到防止牛奶酸败，保持牛奶品质的目的，这也是牛奶中抗生素残留的个重要原因。牛奶中抗生素残留的现状牛奶中抗生素残留问题日益受到国际社会的重视。联合国粮农组织和世界卫生健康组织早在年就提出，应对各种动物性食品中的抗生素残留规定允许标准，并建议在奶牛接受抗生素治疗停药后至少最好的牛奶不能作为食用奶的原料。欧美国家多年前即已明文禁止抗生素残留超量的牛奶上市对青霉素类药物的限量为。我国虽然也颁布了相关管理条例，但是由于各种原因牛奶中抗生素残留问题依然十分严重。丁洁等在年对南京市牛奶中抗生素残留进行了调查，发现消毒牛奶奶粉婴幼儿奶粉和生牛奶的阳性率分别为广州市卫生防疫站对广州市牛奶中抗生素残留进行监测，结果如下消毒牛奶奶粉婴幼儿奶粉和生牛奶的阳性率分别为。可见国内市场中牛奶抗生素超标现象十分严重，应引起社会重视。牛奶中抗生素残留检测研究进展微生物检测法微生物检测法测定原理是根据抗生素对微生物的生理代谢作用的抑制作用，来定性或定量确定样品中抗生素的残留，如纸片法法，法，拭子法等。微生物法具有费用低，操作简便，可靠性高等特点。但该方法必须经过几个小时才能观察到结果，测定的结果与试验菌株的敏感性，琼脂平板中的试验菌株数，培养基及其成分的值有关，且通过肉眼判断显色状态，容易产生误差。目前常用的两种方法是纸片法法和法。纸片法常用的纸片法包括枯草杆菌纸片法和嗜热脂肪杆菌纸片法，主要用于检测牛奶中的内酰胺类抗生素。枯草杆菌纸片法只适用于内酰胺类抗生素的检测，检测限为，而嗜热脂肪杆菌纸片法不仅适用于内酰胺类抗生素的检测，他还可检测到奶样中其它抗生素的存在，检测限为。法法，即氯化三苯四氮唑试验，它是目前我国食品卫生标准中规定的检测牛奶中抗生素残留的检测方法。此方法为向检样中加入嗜热乳酸链球菌和试剂，通过观察显色状态的变化判定检样中有无抗生素存在。乳样中有抗生素存在，则在向检样中加入菌液培养时细菌不增殖，此时由于加入的指示剂不还原，所以不显色。相反，如果没有抗生素存在，则加入菌液即进行增殖，被还原而显红色。也就是说当检样呈乳的原色时为阳性，微红色是为可疑，桃红色或红色时为阴性。目前法检测的各种抗生素灵敏度如下青霉素为单位链霉素单位庆大霉素单位卡那霉素单位。戴尔沃检测法检测法是由荷兰公司开发的。其与先前的相似，但用时更短，只需培养，对青霉素的检测灵敏度提高到。它可检测的抗生素种类更多，包括青霉素氨苄青霉素头孢噻林新霉素土霉素阿莫西林螺旋霉素磺胺二甲嘧啶磺胺嘧啶四环素金霉素红霉素庆大霉素卡那霉素林可霉素氯霉素泰乐菌素和甲氧苄氨嘧啶等。，等通过实验比较和两种检测方法得出以下结论能准确测定原料奶中的内酰胺类抗生素，可应用于农场外散装原料奶的检测。由于使用快速方便，价格更低，因此适合奶牛场微粉色桃红色阳性对照未显色未显色阴性对照桃红色桃红色注为阳性，为阴性,为可疑。国标检测法检测结果未显颜色的奶样有奶样，为阳性，有抗生素存在显微粉色的奶样有奶样，为可疑对象，可能有抗生素残留显桃红色的奶样有奶样，为阴性，无抗生素残留。阳性对照试验结果未显色，为阳性，说明有抗生素残留。对照实验成功。阴性对照试验结果桃红色，为阴性，未检出抗生素残留。对照实验成功。试剂盒法判定方法从微孔面观察结果。绿黄色或者黄色表示抗生素不存在阴性，蓝紫色表示抗生素存在阳性。判定结果测得结果见表表试剂盒法测得结果品种编号显色状态判断纯牛奶淡黄色紫色黄色紫色紫色紫色花色奶淡黄色淡紫色紫色浅紫色紫色黄色紫色阳性对照紫色深紫色阴性对照黄色淡黄色注为阳性，为阴性,为可疑。快速检测法测得的结果显紫色的奶样有奶样，为阳性，有抗生素存在显淡紫色奶样有奶样，为可疑奶样，可能含有抗生素残留显黄色的奶样有奶样，为阴性，无抗生素残留。样品为对照实验，均显紫色，为阳性，青霉素抑制微生物生长样品为对照实验，均显黄色，为阴性，说明无抗生素。实验表明试剂盒没有问题，对照实验成功，抗生素抑制微生物生长。纸片法判断方法把含有青霉素的对照纸片也安放在琼脂表面，各作个滤片，标记不同的滤片位置。翻转平皿，于，直到对照滤片得到很好确定的抑菌圈，般为。样品纸片如有明显的抑菌圈，直径，表示确诊有抑菌物质，为阳性，并结合青霉素滤片的抑菌情况来确证是否为青霉素所致如则为阴性。判定结果测得结果见表表纸片法测得结果品种编号抑菌圈判断纯牛奶花色奶阳性对照阴性对照注为阳性，为阴性,为可疑。纸片法测得结果有抑菌圈的奶样有奶样和，大约的抑菌圈，为阳性，有抗生素存在奶样和有大约左右的小圈,为可疑对象其他奶样均无抑菌圈存在，为阴性说明无抗生素存在。对照奶样中青霉素抑制了微生物生长所以有大约的抑菌圈存在对照奶样无抗生素存在，没有抑菌圈生成，说明对照实验成功。结果统计以上结果可以总结为下表表结果统计表方法阳性份数份阴性份数份可疑份合计份阳性率法试剂盒法纸片法合计由上表可以看出，被检份样品经国标法检测出份阳性样品。阳性率为纸片法检测可检出份，阳性率为快速试剂盒法检测可检出份，阳性率为。三种方法检测结果差异显著。方法比较从检测时间纸片法需培养以上才可见清晰明显的抑菌圈，为了得到更为密集的菌落，可延长培养时间至而国标法需的检测时间试剂盒法的在可以出具体检测结果。但纸片法和法所需前处理时间较长，试剂盒法因试剂盒是现成的不需要太久的准备工作。在检测时间方面，采用试剂盒法较试管检测的法和纸片法鉴定平皿要节省时间。从灵敏度上试剂盒法在抗生素检测的广普性上明显优于国标方法，灵敏度高。法的检测限值较高，无法适应现阶段乳制品抗生素的测定需要，且在实验中不断的接种翻代使细菌抗药性增加，导致结果不准确。纸片法易出现假阳性，微生物的量及操作不规范等因素会引起结果的不准确性。应用场所试剂盒法适合于实际应用现场测定及快速检测,对于食品卫生监督部门来说是种快速现场检测抗生素残留的有效手段，同时作为企业该方法亦可成为质量控制的质检手段。而法和纸片法需要专门的实验室和检验人员，检测费用较高，现场可操作性较差等，且结果需要几十小时才能完成。法及纸片法在我国应用较多，活性试验在小规模工厂经常使用。判定结果的方便性试剂盒法检测方法简单，判定非常清晰，肉眼判读容易紫色和黄色及酶标读数，法判断较难粉色且不能仪器读数。纸片法判断较简单，但易出现假阳性。综上所述，快速检测方法检测乳及乳制品中残留抗生素最主要的特点是携带方便，操作简单，省时省力，结果可靠，灵敏度高。同时提高了检测的广度既广普性准确度和精确度。传统微生物检测法经济简便，但国标法检测限低于欧盟法典规定的残留浓度，经国标法检测合格的奶样，抗生素含量仍旧超标，对食品加工及消费者食用安全有很大潜在的危害，所以在实际检测过程中，可以选用特异性灵敏度与检测限达到规定的纸片法作为国标法的补充。当前，试剂盒法是最为理想的微生物检测方法，但产品的价格对中等发达国家来讲相对较高。这些微生物检测法方便经济，不同程度的应用于原料乳及乳制品中抗生素检测，但由于乳本身因素和外部因素，常出现假阳性检测结果，降低了检测的准确性。结论本实验采用三种微生物法检测牛奶中抗生素的结果如下法检测阳性率为纸片法检测阳性率为试剂盒法检测阳性率为快速检测法比法和微生物纸片法的灵敏度要高，国标法检测结果判断不方便纸片法虽然较准确但前序工作所耗时间特别长。用微生物抑制方法检测牛奶中的抗生素残留，具有灵敏快速操作方便和易掌握的特点，该方法不需要复杂的仪器设备，非常适合基层食品厂和检验检测机构作为抗生素残留的快速筛选方法。参考文献马双青消毒奶中抗生素残留的调查中国奶牛李爱师动物性食品中兽药残留问题解放军预防医学杂志刘健华,陈杖榴动物性食品中抗菌药残留对人体肠道菌群的影响及其研究模型与方法动物医学进展胡松华乳房炎治疗后牛奶中的抗生素残留中国兽医杂志,陈怀宇,黄周英,林育腾等牛乳中抗生素的残留与危害现状泉州师范学院学报丁洁南京市牛乳中抗生素残留的现状分析中国食品卫生陈邵铃畜产品药物残留问题及检测技术的展望中国禽业导刊,阚鹿枫用细菌抑菌实验法快速检测抗微生物药物在动物组织中的残留中国兽药杂志中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验鲜乳中抗生素残留量检验孟昭赫食品卫生检验方法注释微生物学部分北京人民卫生出版社,吴国娟市售消毒纯牛奶中抗菌药物残留的检测北京农学院学报刘宏道中华人民共和国国家标准食品卫生检验方法微生物部分,北京,中国标准出版社,马兆瑞,祝战斌,卡尔莱金特乳和乳制品中残留抗生素的检测方法中国乳品工业，黄怡君,姜也文,胡松华,等法检测牛奶中的抗菌药物中国乳业陈福生，高志贤，王建华食品安全检测与现代生物技术北京化学工业出版社致谢在这短暂的实验期间，我学到了很多东西老师严谨的治学态度，丝不苟的科研精神，渊博的知识，这切将在我未来的人生和科学道路上产生深远影响。在此，向给予我不倦教诲和关怀的钱镭老师表示忠心的感谢。钱镭老师的悉心教诲，使我在学术专业方面有了定的提高，更为重要的是，老师在治学为人上的那份耐心执著和热诚，也深深地影响着我，并将鼓励我在未来的路上不断地探索前进,在试验的设计，实施和论文撰写过程中钱镭老师给予了极大的帮助和指导。在试验过程中，还得到了雒江菡张筠老师的热心帮助，在此并