二划线区域所划的第条线上无菌落，而其他划线上有菌落。造成此现象的原因可能有两个是接种环灼烧后未冷却，菌种接触到高温的接种环而死亡二是划第二划线区域第条线时未从第区域末端开始。根据图乙所示实验中的上清液加入蛋白酶溶液推测，实验目的是探究目的菌株是否能分泌降解苯磺隆的蛋白质，实验设计不合理之处是缺少不加蛋白酶溶液其他条件同图乙的空白对照。答案氮源和无机盐只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长繁殖细胞分裂素母液接种环接种环灼烧后未冷却划线未从第区域末端开始目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质不合理，缺少空白对照全国卷有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力。通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。解析筛选目的菌株应使用选择培养基，可以在这类培养基中加入种营养物质，促进所需要的微生物生长，这就是微生物学家常用的“投其所好”的策略。平板划线法和稀释涂布平板法都可以将聚集在起的细菌分散或稀释成单个细胞，进而得到单菌落。目的菌株可分解原油，从而在培养基上形成以目的菌株为中心的分解圈，分解圈越大表明菌株的降解能力越强。常用的灭菌方法有灼烧灭菌干热灭菌和高压蒸汽灭菌，酒精灯火焰附近是个无菌区，故实验操作在此处进行可防止周围环境中微生物的污染。答案原油选择平板划线法稀释涂布平板法强干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰筛选微生物的两种方法比较项目土壤中分解尿素的细菌的分离分解纤维素的微生物的分离方法使用以为唯氮源的选择培养基进行培养利用的选择培养基进行培养原理土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏而不能正常生长，能够分解尿素的微生物能利用尿素为正常生长，从而起到选择作用因为培养基中含有丰富的纤维素，因此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖特有代谢过程脲酶纤维素酶酶纤维二糖葡萄糖苷酶葡萄糖尿素富含纤维素脲酶氮源统计菌落数目的方法显微镜直接计数法原理利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算定容积的样品中微生物的数量。方法用计数板计数。缺点不能区分死菌与活菌。间接计数法活菌计数法原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的个菌落，来源于样品稀释液中的个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。计算公式每克样品中的菌株数，其中，代表稀释度下平板上生长的平均菌落数，代表涂布平板时所用的稀释液的体积，代表稀释倍数。操作设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经系列倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布于整个平板表面，放在适宜的温度下培养，计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同稀释度的菌液加到个或个以上的平板上，进行涂布培养，般选择菌落数在的平板进行计数，最后计算出菌落平均数。实验误差利用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在起时，平板上观察到的只是个菌落。角度以基础判断或案例分析的形式，考查微生物的分离鉴定与计数全国卷Ⅰ植物秸秆中的纤维素可被些微生物分解。回答下列问题分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将分解成。在含纤维素的培养基中加入刚果红时，可与纤维素形成色复合物。用含有的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的。为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，同学设计了甲乙两种培养基成分见下表酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂溶液水培养基甲培养基乙注表示有，表示无。据表判断，培养基甲选填“能”或“不能”用而应该是涂布的同稀释度的平板均符合“菌落数在的平板”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。角度二以案例分析的形式，考查富集培养分离微生物富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之，主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定环境条件使仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点，从物理化学生物及综合多个方面进行选择，如温度紫外线高压光照氧气营养等许多方面。如图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。本实验所需培养基为，碳源为。实验原理是。重复培养的目的是。的菌落中大部分是降解的微生物。为组，为组，设置的目的是。采用法，接种到的培养基中，在操作过程中为防止污染应注意的事项是。解析富集培养的培养基是种选择培养基，可用于具有种代谢特点的微生物，本题就是为了选择出能分解对羟基苯甲酸的微生物。该实验的培养基的碳源为对羟基苯甲酸全过程包括筛选扩大培养纯化鉴定。答案选择培养基对羟基苯甲酸利用以对羟基苯甲酸为唯碳源的选择培养基，经富集培养，选择出能降解对羟基苯甲酸的微生物增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例对羟基苯甲酸对照实验说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物单细胞挑取接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在空气中冷却，同时打开皿盖挑取菌种接种到试管中，并塞好棉塞，接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物安徽高考如图为通过分子杂交鉴定含有特定的细菌克隆示意图。下列叙述正确的是根据培养皿中菌落数可以准确计算样品中含有的活菌实际数目外源必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制重组质粒与探针能进行分子杂交是因为分子脱氧核糖和磷酸交替连接放射自显影结果可以显示原培养皿中含有特定的细菌菌落位置解析读图可知，接种该微生物所用的方法是稀释涂布平板法，而通过该方法只能估算样品中含有的活菌数外源必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行表达，而不是复制重组质粒与探针之间的杂交原理是碱基互补配对放射自显影结果显示的杂交链位臵与原培养皿中含有特定的细菌菌落位臵相同。答案全国卷Ⅱ临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照定的实验步骤操作，以确定致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题为了从样本中获取致病菌单菌落，可用法或法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养鉴别等步骤获得。取该单菌落适当稀释，用法接种于固体培养基表面，在培养箱中培养，使其均匀生长，布满平板。为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养段时间后，含的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素含的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素含的滤纸片周围的透明圈比含的小，说明含的滤纸片周围的透明圈也比含的小，且透明圈中出现了个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素的。根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好选用抗生素。解析微生物的常用接种方法为划线法和稀释涂布法。能够使菌落均匀生长布满平板的接种方法为涂布法。含的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素敏感含的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素不敏感含的滤纸片周围的透明圈比含的小，说明该致病菌对的敏感性比对的弱含的滤纸片周围的透明圈比含的小，且透明圈中出现了个菌落排除杂菌污染，说明该致病菌可能对抗生素产生了抗药性。答案划线稀释涂布或涂布涂布敏感不敏感该致病菌对的敏感性比对的弱耐药菌考纲考频微生物的分离和培养年考种微生物的数量测定年考培养基对微生物的选择作用年考利用微生物进行发酵来生产特定的产物年考培养基的成分和分类分类固体培养基含凝固剂液体培养基不含凝固剂选择培养基与鉴别培养基种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入物质依据些微生物对些物质的或而设计从众多微生物中所需的微生物加入分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入或产生特定的或其他变化不同种类的微生物用培养基鉴别大肠杆菌些化学特殊需求抗性分离青霉素种指示剂化学药品颜色鉴别伊红美蓝连线无菌技术的类型方法及对象微生物的纯化培养原理在培养基上将细菌或成单个细胞，使其长成的菌落，即个纯化的细菌菌落。方法平板划线法稀释涂布平板法稀释分散单个角度以基础判断或案例分析的形式，考查培养基的制备与无菌技术江苏高考研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是培养基分装到培养皿后进行灭菌转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养培养过程中每隔周观察次解析培养微生物过程中应先灭菌再倒平板，项错误每次划线前都要进行接种环的灼烧灭菌，项正确接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养，光照会影响温度等条件，项错误培养过程中观察间隔的时间般不超过，项错误。答案北京高考高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的项是将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上将转基因植物叶片接种到无菌培养基上将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上解析将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中进行酿酒时，在缺氧酸性环境下其他杂菌不能生长，故不严格灭菌对其影响不大腐乳制作中将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上，毛霉生长繁殖快且抗杂菌能力强，故不严格灭菌对实验结果影响不大进行植物组织培养时，植物材料体积小抗性差，而微生物繁殖快生长迅速会争夺培养基中的营养，产生的代谢废物还会毒害培养材料，故培养材料旦被微生物如细菌污染，将严重影响实验结果选择培养基中已经加入了种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物生长，另外土壤浸出液本身也含有定量的微生物，因此将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上时不进行严格的无菌操作，对实验结果影响不大。答案消毒与灭菌的辨析条件结果常用方法应用范围煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿金属工具灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌扬州测试如图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为。下列叙述正确的是在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的第区和第区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数解析在每次划线前后都要对接种环进行灭菌进行划线操作时，左手将皿盖打开条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖注意接种时不能划破培养基，否