毕业设计_基于微流控芯片的肿瘤微环境酸化及循环肿瘤细胞分选研究

在三年的研究生学习期间我不仅从导师那里学习到了有关临床检验和微流控芯片的各种基础专业知识，还学会了作为个科研人员所具有的各种品质。

导师还传授我做人的准则，这将成为我终生受益的精神财富。

导师严谨科研态度求实的工作作风以及创新的科学精神，是我终生学习的榜样。

在我整个课题的设计完成以及论文写作过程中，刘老师给予我莫大的帮助和支持，同时还在生活上给予我很多帮助。

在此我向我的导师刘大渔老师表示深切的谢意和祝福，感谢周小棉老师，从他那里我学会了很多关于检验的系列的理论知识和技术。

在整个课题的设计完成过程中，从他那里得到了非常多的帮助。

感谢他在我实验遇到挫折和失败时给予的指导和鼓励。

感谢广州市第人民医院检验科研究室的李伟萱陈斌梁广铁张琼张其超王秋平文小霞在整个课题中对于本人的帮助。

感谢市检验科徐邦牢主任和全体老师对我的指导和帮助，在这三年的学习和生活中给我提供了诸多方便。

感谢我的父母和家人这么多年来对我如既往的照顾理解与支持。

年月学位论文原创性声明学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，进行研究工作所取得的成果。

文中依法引用他人的成果对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中做出明确标注或得到许可。

论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。

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论文作者签名日期年月日学位论文知识产权权属声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属广州医学院及附属单位。

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论文作者签名导师签名日期日期年年日日关于学位论文使用授权的说明学校可以保留本学位论文的原件及复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印缩印或扫描等复印手段保存汇编学位论文本人授权学校向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。

论文作者签名导师签名日期日期年年日日基于微流控芯片的肿瘤微环境酸化及循环肿瘤细胞分选研究作者严伟学位授予单位广州医学院引用本文格式严伟基于微流控芯片的肿瘤微环境酸化及循环肿瘤细胞分选研究学位论文硕士广州医学院硕士学位论文基于微流控芯片的肿瘤微环境酸化及循环肿瘤细胞分选研究研究生严伟导师刘大渔申请学位级别医学硕士年级二级学科专业临床检验诊断学论文提交日期年月学位类型医学科学学位研究方向微流控方向论文答辩日期年月学位授予单位广州医学院答辩委员会主席评议人硕士学位论文基于微流控芯片的肿瘤微环境酸化及循环肿瘤细胞分选研究姓名严伟年级二级指导老师刘大渔副研究员专业名称临床检验诊断学二三年五月目录中文摘要英文摘要第部分基于微流控多层纸芯片乳腺癌组织的微环境酸化研究前言材料与方法结果讨论结论参考文献第二部分过滤式微流控芯片上的循环肿瘤细胞分选前言材料与方法结果讨论结论参考文献综述已发表和待发表的论文致谢学位论文原创性声明英文缩略词缩略词英文名称中文名称聚二甲基硅氧烷硝酸纤维素吖啶橙溴化乙锭聚碳酸酯磷酸盐缓冲液乳酸聚甲基丙烯酸甲酯循环肿瘤细胞氨丙基三乙氧基硅烷中文摘要基于微流控芯片的肿瘤微环境酸化及循环肿瘤细胞分选研究中文摘要本文工作以微流控芯片为基本研究平台，进行了肿瘤细胞相关研究，包括肿瘤细胞微环境及循环肿瘤细胞分选研究。

研究内容包括基于微流控多层纸芯片乳腺癌组织的微环境酸化研究目的发展种基于微流控多层纸芯片的肿瘤组织，用于肿瘤微环境酸化研究。

方法自行制作种包含多层硝酸纤维素薄膜的微流控芯片。

取指数生长期的乳腺癌细胞悬液，种植在各层硝酸纤维素薄膜上。

将种植有细胞的硝酸纤维素薄膜叠放在芯片细胞培养池内，其间填充水凝胶使多层薄膜聚合为个整体，用以构建乳腺癌组织。

上述多层纸芯片乳腺癌组织在微流控芯片中以不同流速连续灌流培养，并平行进行传统静态培养。

培养天后，拆分多层纸芯片以荧光染色和全自动生化分析仪检测各层薄膜上细胞生存增殖以及胞内乳酸含量，以解析肿瘤组织内部细胞微环境酸化情况。

结果多层纸芯片层叠方式不仅可以快速构建具有结构肿瘤组织，还可以有效模拟乳腺癌肿瘤微环境。

实验发现多层纸芯片乳腺癌组织内部处于相对缺氧的状态，符合实体瘤中外部生长较快而内部生长较慢，并存在坏死的现象。

多层纸芯片可分解的特性，便于解析肿瘤中不同部位的细胞生存和代谢情况。

实验结果显示，微流控多层纸芯片肿瘤组织中细胞增殖以及微环境酸化程度受灌流速度影响。

高灌流速度可以增加纸层上细胞密度，因而酸性代谢产物排出增加。

相比之下，低灌流速度造成细胞营养供给不足，细胞生长缓慢，乳酸生成的量较少。

缺氧也是导致微环境酸化的重要因素，随着氧气扩散距离的增加，多层纸芯片乳腺癌组织中细胞酸化程度有所加重。

实验还发现随着微环境酸化程度的加重，肿瘤细胞生存率和增殖率相应地降低。

结论这种基于多层纸芯片的肿瘤模型能有效模拟实体瘤的微环境且便广州医学院硕士学位论文于检测，是肿瘤微环境酸化研究的有力平台。

过滤式微流控芯片上的循环肿瘤细胞分选目的发展种基于过滤的微流控循环肿瘤细胞分选方法。

方法设计并加工种具有辐射状通道的微过滤装置。

微流控芯片为三层复合结构，顶层和底层是使用标准软刻蚀工艺加工的层，分别包含流入与流出通道，中间层是多孔聚碳酸酯薄膜。

芯片入口与微量注射泵连接，控制过滤流速。

完成过滤后，捕获细胞使用微小染色体维持蛋白，抗体标记，以区分肿瘤细胞和血细胞。

之后，芯片在荧光显微镜下拍照并对照片进行处理和分析。

结果分析的全过程，包括细胞过滤固定标记和计数，均可以在微过滤芯片上完成。

以细胞为考察对象的测试显示，发展的微过滤芯片可以选择性富集肿瘤细胞。

在的流速下，细胞的回收率可以达到，而且血细胞残留可以控制在个以下。

截留细胞使用微小染色体维持蛋白抗体标记，能够有效辨别肿瘤细胞与血细胞。

结论基于过滤式微流控芯片上的循环肿瘤细胞分选方法简单快速成本廉价，有望成为种实用的循环肿瘤细胞检测技术。

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