展现状与趋势我省现有技术基础立题必要性项目申报单位实施该项目的优势提示主要研发内容拟解决技术关键点及主要技术指标提示主要创新点，尤其是预期获得的知识产权简况提示项目预期目标与效果包括经济社会环境效益等前景分析简况提示项目拟采取的研究方法或技术路线实施方案的可行性简况提示注明预期实施进度安排的初步计划即阶段性工作要点特别提示环境能力建设中仪器设备购置的必要性说明相关领域国内外发展形状与趋势红豆杉又名紫杉也称赤柏松。系红豆杉科，属浅根植物,其主根不明显，侧根发达，是世界上公认的濒临灭绝天然珍稀植物红豆杉也是第四世纪冰川遗留下来的古老树种，在地球上已有万年的历史。红豆杉果实成熟时，外红里艳红果满枝。艳丽多姿，宛如南国的相思豆，故而得名。全世界的红豆杉根据生长地域和生物学特性可分为个种类，除澳洲的产于南半球外，其余分别分布在北半球的温带至亚热带地区。中国有个种类南方红豆杉，主要分布在滇西与其它个县东北红豆杉，主要分布在吉林长白山和黑龙江带，辽宁东部山区也有分布西藏红豆杉，主要分布在石南西北部西藏南部和西南部④中国红豆杉变种，主要分布在江苏浙江等地云南红豆杉。其特点是分布地域广生长分散无纯林多为林中生木数量极少自身繁育能力低。红豆杉是世界十大濒危物种之，也是我国级保护植物。红豆杉是全世界公认的药用植物，特别是所含有的紫杉醇，是全世界推崇的广谱抗癌药物，治愈率高，也是治疗肾炎糖尿病的有效药物。近年来，正在大力开发紫杉醇的其它保健和药用功能，红豆杉作为个产业，正在我国蓬勃兴起。产于我国境内的红豆杉紫杉醇的含量极低，又多含于树皮和树根之中，为此，野生资源遭到大量盗伐破坏严重，资源总量急剧减少，已经到了濒临灭种的程度。近年来，有关执法部门加大了打击力度情况有所缓解。红豆杉人工种植起步较晚，目前尚属起步阶段，所呈现的特点是种植我国本土红豆杉较多，个别的规模较大如四川北京等地引种高品质曼地亚红豆杉少，未能形成产业化规模和深加工产业链。曼地亚红豆杉是美国于年发现的种天然杂交种，其母本为东北红豆杉，父本为欧洲红豆杉。在美国和加拿大已有多年的历史。后经人工杂交培育出多个曼地亚红豆杉品系，希克沙品系则是其中个优良品系。曼地亚红豆杉作为新品种，其紫杉醇含量比其他红豆杉高几倍到十几倍。它多为灌木型，四季常青树，主根不明显，侧根发达，枝叶茂盛，萌发力强，耐修剪，耐寒，能耐摄氏度的低温。曼地亚红豆杉的特点容易繁殖红豆杉可用种子繁殖，但出芽较慢需两年，现多用扦插繁殖生长快实测年高生长厘米，最高可达厘米，为国内红豆杉中国红豆杉云南红豆杉等的，生长优势明显。年生生物量积累为克株年，年生时产干原料公斤株，即可用于提炼紫杉醇。也就是说栽植年即可产生丰厚的经济效益，被称为黄金树。抗病虫能力强经数年观察，尚未发现曼地亚红豆杉有规模化的病虫害发生紫杉醇含量高曼地亚红豆杉通过栽培选育已发展，其中由选育的品系是美国食品及药物管理局批准可以用作提取紫杉醇的红豆杉之。年生的曼地亚红豆杉叶子和树枝中紫杉醇含量与生长年天然红豆杉树皮的紫杉醇含量相当。天然红豆杉包括国内种在内的全球个红豆杉品种，紫杉醇含量般在之间，而曼地亚红豆杉的紫杉醇含量则高达，是国内品种的倍。曼地亚红豆杉植株各部分均含有紫杉醇，仅枝叶的含量就达，根系高达，这意味着曼地亚红豆杉可全株用于提取紫杉醇，植株利用率高，其综合经济价值更高。红豆杉相关领域国内外发展形状与趋势红豆杉作为具有巨大经济效益和研究价值的药用植物，在国内外已大量的栽培，但其系统的质量评价及指纹图谱研究目前仍是空白。在紫杉的含量测定方面的研究虽然很多，但大部分都集中测定紫杉醇的含量，而忽略了其他有效成分或可用做合成中间体的成分。而本项目将建立同时测定多个成分的定量分析方法，实现多组分的含量控制。紫杉醇的分离纯化工作开展较早，最早的分离工艺是年采用逆流分配色谱法，从太平洋红豆杉树皮中提取了紫杉醇，其历时两年，这种工艺十分烦琐，收率极低。随着紫杉醇科学技术的不断进展，分离工艺也获得了很大的改进，收率大为提高，分离时间大大缩短。国外由于占有定的资源优势，其提取分离方法较为先进，主要有固相萃取法超临界流体萃取法鲜法匀浆高效提取方法及高效液相色谱法超临界流体色谱法电泳色谱法等提取分离方法。但这些工艺大都存在的缺点是收率低工艺流程长生产能力小，无法适应工业化生产等特点。国内因受资源限制，目前仍处于经典溶媒萃取和色谱分离，且大部分提取方法只能应用于对树皮的提取，从枝叶中提取分离除杂仍停留在传统方法，特别是对曼地亚红豆杉中紫杉烷类和其它成分的分离尚未见报道。因此开发新的高效特异性的分离方法，对于紫杉醇的提取纯化有重要意义。目前以紫杉醇为原料作为抗癌药的制剂主要为注射剂和静脉输液，如紫杉醇注射液和多西紫杉醇注射液，目前国外已完成的和正在研究的制剂有紫杉醇注射液多西紫杉醇注射液紫杉醇粉针剂紫杉醇脂质体注射液注射用紫杉醇纳米粒纳米粒胶体注射液紫杉醇支架聚谷氨酸紫杉醇紫杉醇紫杉醇，维生素型紫杉醇乳剂微胶囊化紫杉醇紫杉醇吸入剂紫杉醇植入剂紫杉醇凝胶剂等多种制剂，国内已完成的和正在研究的制剂有紫杉醇注射液多西紫杉醇注射液紫杉醇粉针剂紫杉醇脂质体注射液注射用紫杉醇纳米粒以及注射用紫杉肽。从国内外研发状况来看，国外紫杉类制剂的开发品种多，并且给药途径多样，除了注射给药外，正在开发的有外用制剂口服制剂以及吸入剂，而国内研发还停留在注射给药上，对口服给有效成分种类相结合，建立紫杉烷类提取物指纹图谱。脂质体凝胶剂含量形态观察粒径大小和分布包封率黏度表面电位可工业化生产。六主要创新点及预期获得知识产权简况创新点综合利用多种提取纯化技术，大大缩短提取过程和时间，避免了紫杉醇在高温下转化为其它物质，提高了包括紫杉醇在内的多种紫杉烷类成分的提出率。分离纯化新设施创新了模拟移动床技术特点为分离效率高，且填料和溶剂的用量小产品纯度高，适合工业化生产要求。改变了紫杉醇的传统给药途径，增加了新的给药途径和适应症及新剂型，扩展了紫杉醇的应用范围。预期获得知识产权申报个具有自主知识产权的提取纯化工艺专利申报国家专利包括新的适应症专利和新制剂专利七项目研究的技术路线提取技术路线红豆杉超声提取固相萃取除杂常规分离模拟移动床半合成或酶解模拟移动床或常规分离紫杉醇多烯紫杉醇紫杉烷类单体成分紫杉烷组分。制剂技术路线资料检索，方案设计制剂工艺配比研究小试研究中试放大及稳定性考察动物药理毒理研究临床研究质量评价技术路线资料检索样品采集研究方法制定红豆杉样品提取分离紫杉醇及紫杉烷类化合物含量测定方法和高效液相色谱指纹图谱检测方法的建立方法学验证样品检测相应信息进行数字化处理绘制标准指纹图谱制定样品的农残重金属检测方法实验整体复核实验总结成果申报。八实施进度初步计划查阅与本项目相关的国内外文献，设计本项目研究方案。完成样品采集及对照品的购置工作。以华源三药种植基地的曼地亚红豆杉为样本，对其中各有效组分进行提取分离纯化方法的研究初步建立红豆杉高效液相指纹图谱检测方法并对所建立的方法进行验证参照中药注射剂指纹图谱研究的技术要求制剂工艺配比的筛选。分离纯化系统工艺的优化和改进采用所建立的指纹图谱方法对不同种属产地和采收期的红豆杉进行检测，得到各类型红豆杉的液相分析色图谱新制剂临床前动物药理毒理研究。分离系统的试运行和参数优化采用计算机汇总数据对红豆杉液相色谱图谱进行分析，制定出标准的紫杉烷类化合物高效液相指纹图谱。新制剂临床研究。项目总体总结报告。九项目预期目标与效果前景分析简况项目预期目标建立完善的红豆杉样品前处理方法，能快速完全地对紫杉醇和紫杉烷类化合物进行提取分离纯化得到种以上的紫杉烷类提取物及标准品。通过收集不同品系产地采收期的曼地亚红豆杉样品，绘制各类红豆杉的指纹图谱建立完善的曼地亚红豆杉质量评价体系。利用提取纯化不同阶段的提取物，研究制备新型制剂种。项目预期效果通过该项目研究建立的紫杉烷类化合物指纹图谱及红豆杉质量评价体系，将广泛地应用于红豆杉质量评价和紫杉醇类制剂的质量控制，弥补了我国在紫杉醇质量研究方面的个空白，增加了我国紫杉醇类制剂的技术含量，大大提高我国紫杉醇类制剂的在国际市场上的竞争力。通过本项目的研究，采用指纹图谱的方式来表征红豆杉中的紫杉烷类抗癌活性成分，它提供的有关质量的信息比单成分含量更为丰富和更有应用价值。红豆杉中紫杉烷类化合物标准指纹图谱的建立将为生产企业及研究单位评价红豆杉的质量提供全面可靠的依据，同时也为以红豆杉为原料的中药新制剂的研究开发和质量标准的制定奠定基础。优化的红豆杉的提取分离纯化工艺，实现紫杉醇的高效分离，同时为红豆杉中其它紫杉烷的利用提供了强有力的技术支持，使宝贵的红豆杉资源得到节约，从而创造巨大的经济效益。预计可提高红豆杉中紫杉醇收率综合利用率仅我公司就可增加效益亿元降低紫杉醇制剂生产成本，扩大制剂原料来源，使其成为国内治疗癌症首选药物。通过本项目研究，拟完成新型制剂研究个分离纯化紫杉烷类组分个预期申报专利个培养高层次科技人才人其中培养硕士研究生人，引进博士后人十环境能力建设利用该项目对中心的提取纯化制剂检测设施和装备进行全面提升，并利用该项目系统研究，进步提高中心的综合研究实力，并培养批高层次高素质的科研人才，重点加强以下设施和装备的建设提取分离设施模拟移动床台超声提取设备台制剂设备冷冻干燥机台质量检测设备液质联用台气相色谱台通过上述建设可行成年处理公斤紫杉醇中试提取分离制剂生产线条仪器设备明细如下单位元仪器设备名称来源价格新进仪器设备资金来源拨款自筹高效液相色谱原有气相色谱新进液质联用新进超声提取设备新进模拟移动床色谱新进冷冻干燥机新进合计可另加页资金情况表工程技术研究中心投资与申请资金情况中心总投资万元已完成投入万元投入来源及到位情况来源经费到位情况依托单位投入万元到位万主管部门投入万元国家财政投入万元省财政投入万元市财政投入万元银行贷款万元其他万元新申请财政专项资金的用途及预算合计万元其中科研开发项目投入万元中试及产业化项目投入万元环境条件投入万元其他投入万元其他万元支出预算万元调研培训费用设备购置费用能源材料费用公务业务费用验收鉴定费用环境条件改善其他费用设备购置明细设备名称型号数量单价金额用途气相农残检测液质质量评价超声提取立提取移动床分离纯化冻干机平干燥及制剂研究推荐意见依托单位推荐意见负责人签字公章年月日省直主管部门推荐意见负责人签字公章年月日地方科技财政部门推荐意见负责人签字公章年月日负责人签字公章年月日辽宁省工程技术研究中心计划项目申报书项目名称曼地亚红豆杉质量评价及提取新工艺新剂型的研究与开发技术领域生物与医药项目负责人李为理依托单位辽宁华源本溪三药有限公司中心名称国家中成药工程技术研究中心负责人李为理通讯地址辽宁本溪经济技术开发区医药园区邮政编码电子邮箱联系电话传真主管