29《高效广谱抗菌肽制剂的研制项目投资可行性论证初步设计报告》免费在线阅读

对人才培养情况本课题的实施将为我国培养名生物化学和分子生物学及微生物学专业的硕士研究生。

环境影响及效益。

以工程菌工业化发酵生产抗菌肽，在生产和推广应用过程中均不会影响生态环境。

选题的必要性项目所处技术领域产业政策自从青霉素被发现以来，人们对病原菌引起的感染性疾病不再束手无策，特别是内酰胺类抗生素的发现，对病原菌感染性疾病的治疗产生了革命性飞跃，抗生素已成为临床治疗病原菌感染的强有力武器。

但是，随着抗菌药物的广泛应用和滥用，耐药菌株不断增加，使抗感染治疗陷入耐药菌危机之中。

为了应对耐药菌感染，人们方面对传统抗生素进行结构改造以降低细菌的耐药性，另方面正在不断研究和开发新型抗菌药物。

近年来出现的抗菌肽就是类具有巨大发展潜力的新型抗菌药物，它是宿主产生的类抵抗外界病原体感染的小分子阳离子肽，广泛存在于昆虫成和投资预算申请科技三项经费的使用预算见附表。

申请经费总额万元。

其中仪器设备购置费万元材料样品费万元试验费检测费万元资料调研费万元鉴定费万元。

三项目实施支撑条件项目技术来源生产抗菌肽。

月抗菌肽的分离和纯化。

月抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定。

年月含抗菌肽饲料的配制。

月动物实验。

月课题总结鉴定。

项目经费预算情况项目投资总额项目已完成投资项目须新增投资及投资构将抗菌肽基因与具有高效表达启动子的表达载体连接，构建重组表达载体。

月将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因酵母表达系统。

月筛选高效表达抗菌肽的酵母系统。

月酵母发酵条件的优化。

年月采用发酵法测菌肽。

研制出具有自主知识产权的高效广谱的抗菌肽制剂。

考核指标该酵母表达体系对抗菌肽的表达稳定，表达量的重复性。

抗菌肽的抗菌活性高，抗菌谱广。

分阶段描述项目执行过程中各阶段目标年月层析，收集各个洗脱峰，用的分析鉴定目的多肽所在的峰。

将含有目的多肽的洗脱液用透析，冻干浓缩。

多肽于保存，用于分析鉴定及生物功能试验。

抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱法从转录和翻译两个水平上筛选抗菌肽高效表达酵母。

抗菌肽的大量表达。

利用筛选到的高效表达酵母菌发酵产生抗菌肽。

抗菌肽的分离纯化。

离心收集表达上清液，采用硫酸铵沉淀抗菌肽。

经动子的表达载体连接，构建重组表达载体。

抗菌肽基因酵母表达体系的构建及高效表达系统的筛选采用醋酸锂法将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因酵母表达系统。

采用法和重组载体转入酵母筛选抗菌肽高效表达酵母体系大量表达抗菌肽抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验重组表达载体的构建将我们从淡水鱼中诱导表达的抗菌肽基因与具有高效表达启有自主知识产权的新型抗菌肽制剂。

项目完成时至少可达到国内领先水平。

项目技术方案论述生产技术工艺流程主要技术参数将采用技术从鱼类克隆的抗菌肽全长基因与表达载体连接构建重组载体肽研究很少。

目前国内只有厦门大学最近采用传统方法从海水养殖的鲈鱼中分离出种抗菌肽基因，但并未对该基因的表达及其产物的抗菌活性进行分析，也没有开发出基于鱼类抗菌肽基因的广谱抗菌肽制剂。

本项目将开发出具期工作中获得的抗菌肽基因与载体连接，构建抗菌肽酵母高效表达体系，以工程菌工业化发酵生产抗菌肽，用这种方法可获得大量新的高效广谱抗菌肽。

计算机检索结果表明，人们对昆虫抗菌肽进行了较多的研究，而对鱼类抗菌不能获得大量的抗菌肽。

其二是根据已发现的抗菌肽基因的序列设计引物在不同的生物中通过技术克隆抗菌肽基因，该方法只能在不同生物中获得该抗菌肽的同源基因，而不能获得新的抗菌肽基因。

在本项目中，我们将前它们的全长基因。

这些工作为本项目的实施奠定了基础。

二技术方案论述项目技术关键点或创新点论述，项目完成时达到的技术水平目前，人们主要以两种方法获得抗菌肽。

其是直接从生物体内分离抗菌肽，用这种方法多种微生物诱导鱼，继而采用差异显示技术从经微生物诱导的鱼的肝脏中分离到了三个特异表达的分子，并使用技术克隆了，筛选高效表达抗菌肽的工程菌，以工程菌工业化发酵生产抗菌肽，进而开发出高效广谱的新型抗菌剂。

该项目的实施对相关领域技术进步有定的推动作用。

项目目前进展情况。

我们已进行了前期工作，用引起人畜共患病的推动作用本项目采用的是先进的分子生物学研究技术。

用基因克隆技术将我们从鱼肝脏中分离的抗菌肽基因与具有高效表达启动子的表达载体连接，构建重组分子。

然后用醋酸锂法将重组分子转入解脂耶氏酵母中肽的研究方面起步较晚，仅有少量报道。

大量结果显示不同的抗菌肽其抗菌活性和抗菌谱存在很大的差异，因此继续寻找高效广谱的生物抗菌肽，是广大生命科学工作者努力的方向。

项目技术先进性，对相关领域技术进步的推肽的研究方面起步较晚，仅有少量报道。

大量结果显示不同的抗菌肽其抗菌活性和抗菌谱存在很大的差异，因此继续寻找高效广谱的生物抗菌肽，是广大生命科学工作者努力的方向。

项目技术先进性，对相关领域技术进步的推动作用本项目采用的是先进的分子生物学研究技术。

用基因克隆技术将我们从鱼肝脏中分离的抗菌肽基因与具有高效表达启动子的表达载体连接，构建重组分子。

然后用醋酸锂法将重组分子转入解脂耶氏酵母中，筛选高效表达抗菌肽的工程菌，以工程菌工业化发酵生产抗菌肽，进而开发出高效广谱的新型抗菌剂。

该项目的实施对相关领域技术进步有定的推动作用。

项目目前进展情况。

我们已进行了前期工作，用引起人畜共患病的多种微生物诱导鱼，继而采用差异显示技术从经微生物诱导的鱼的肝脏中分离到了三个特异表达的分子，并使用技术克隆了它们的全长基因。

这些工作为本项目的实施奠定了基础。

二技术方案论述项目技术关键点或创新点论述，项目完成时达到的技术水平目前，人们主要以两种方法获得抗菌肽。

其是直接从生物体内分离抗菌肽，用这种方法不能获得大量的抗菌肽。

其二是根据已发现的抗菌肽基因的序列设计引物在不同的生物中通过技术克隆抗菌肽基因，该方法只能在不同生物中获得该抗菌肽的同源基因，而不能获得新的抗菌肽基因。

在本项目中，我们将前期工作中获得的抗菌肽基因与载体连接，构建抗菌肽酵母高效表达体系，以工程菌工业化发酵生产抗菌肽，用这种方法可获得大量新的高效广谱抗菌肽。

计算机检索结果表明，人们对昆虫抗菌肽进行了较多的研究，而对鱼类抗菌肽研究很少。

目前国内只有厦门大学最近采用传统方法从海水养殖的鲈鱼中分离出种抗菌肽基因，但并未对该基因的表达及其产物的抗菌活性进行分析，也没有开发出基于鱼类抗菌肽基因的广谱抗菌肽制剂。

本项目将开发出具有自主知识产权的新型抗菌肽制剂。

项目完成时至少可达到国内领先水平。

项目技术方案论述生产技术工艺流程主要技术参数将采用技术从鱼类克隆的抗菌肽全长基因与表达载体连接构建重组载体重组载体转入酵母筛选抗菌肽高效表达酵母体系大量表达抗菌肽抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验重组表达载体的构建将我们从淡水鱼中诱导表达的抗菌肽基因与具有高效表达启动子的表达载体连接，构建重组表达载体。

抗菌肽基因酵母表达体系的构建及高效表达系统的筛选采用醋酸锂法将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因酵母表达系统。

采用法和法从转录和翻译两个水平上筛选抗菌肽高效表达酵母。

抗菌肽的大量表达。

利用筛选到的高效表达酵母菌发酵产生抗菌肽。

抗菌肽的分离纯化。

离心收集表达上清液，采用硫酸铵沉淀抗菌肽。

经层析，收集各个洗脱峰，用的分析鉴定目的多肽所在的峰。

将含有目的多肽的洗脱液用透析，冻干浓缩。

多肽于保存，用于分析鉴定及生物功能试验。

抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测菌肽。

研制出具有自主知识产权的高效广谱的抗菌肽制剂。

考核指标该酵母表达体系对抗菌肽的表达稳定，表达量的重复性。

抗菌肽的抗菌活性高，抗菌谱广。

分阶段描述项目执行过程中各阶段目标年月将抗菌肽基因与具有高效表达启动子的表达载体连接，构建重组表达载体。

月将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因酵母表达系统。

月筛选高效表达抗菌肽的酵母系统。

月酵母发酵条件的优化。

年月采用发酵法生产抗菌肽。

月抗菌肽的分离和纯化。

月抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定。

年月含抗菌肽饲料的配制。

月动物实验。

月课题总结鉴定。

项目经费预算情况项目投资总额项目已完成投资项目须新增投资及投资构成和投资预算申请科技三项经费的使用预算见附表。

申请经费总额万元。

其中仪器设备购置费万元材料样品费万元试验费检测费万元资料调研费万元鉴定费万元。

三项目实施支撑条件项目技术来源课题申请人在法国国家农业研究中心分子遗传学实验室工作期间，参加了欧盟资助的有关微生物抗菌肽在解脂耶氏酵母中表达的研究课题，掌握了抗菌肽研究的相关技术，为本课题的顺利完成奠定了技术基础。

项目实验检测条件申请人所在实验室为江西省生物化学与分子生物学重点实验室，具有全自动测序仪型型电转仪高速冷冻离心机超速冷冻离心机超低温冰箱仪，超纯水系统各种规格的电泳仪杂交仪紫外分光光度计设施先进的细菌培养室等仪器设备。

上述仪器设备基本上可满足本项目的研究需要。

项目申请单位人才资源情况技术人员总数中高级技术人员比例项目申请单位南昌大学是我省唯所省部共建的工程重点建设大学，人才资源丰富，科研力量雄厚。

生命科学学院有专任教师人，其中正副教授人，讲师人，中高级技术人员比例。