20毕业论文：白鲢疥疮病病原的初步分离与鉴定免费在线阅读

药敏实验结果分离菌菌名菌液浓度注射剂量注射鱼数尾死亡鱼数尾死亡率对照生理盐水人工感染后发病鱼的主要症状为食欲下降甚至停食，体色变黑，离群独游，游动缓慢，对外界刺激不敏感，鱼体两侧有出血点，皮肤腐烂，背鳍胸鳍尾鳍的鳍条基部充血，解剖腹腔肠道微红壁薄少韧性易拉断，肝脏腿色，肠壁充血。

与自然发病的症状基本相同。

重复感染实验结果相似。

据此可确认该分离菌为致病菌。

讨论从患病白鲢溃烂的皮肉组织中分离到的菌株呈明显的革兰易挑取图二的菌落形态其菌落近似圆型，大而扁平，表面光滑湿润，边缘不规则，质地均匀，其颜色近似黄色，不透明，易挑取病原菌的形态学观察光学显微镜下革兰氏染色均为阴性，如图三四所示图三落形态从患病白鲢上共分离到株菌，分别标记为。

其菌落形态如图二所示图的菌落形态其菌落呈圆型，小而薄，表面光滑湿润较粘稠，边缘圆整，色泽均匀呈白色，半透明，照组注射等量无菌生理盐水。

各组实验鱼分别放置于不同水族箱中，在水温饲养，其外部环境相同。

感染后每天投喂颗粒饲料，日换水量，每天下午吸污。

每天观察记录鱼的活动情况，连续观察天。

结果病原菌的分离及菌和无菌生理盐水组。

先将保存于斜面中的细菌接种于平板，培养后用无菌生理盐水洗下，制成菌悬液，用分光光度计记数，配成三个浓度，给健康白鲢每尾注射菌液，对为抗性即不敏感得出药敏实验结果。

药敏试纸购自杭州天和微生物试剂有限公司。

人工感染实验感染方式为肌肉注射感染。

实验分个组同时进行，分别为菌液浓度组，组，组，然后观察有无抑菌圈产生，并记录抑菌圈直径，计算平均值。

再重复做次实验。

最后根据抑菌圈直径比照判断标准现代诊断学手册抑菌圈直径为高度敏感为中度敏感采用纸片法，选用了生产上常用的种药物进行试验。

按实验操作要求先将细菌进行培养，用无菌生理盐水洗下后吸取菌液于固体培养基平板上均匀涂布，贴上药敏纸片，每种药敏片设个平行实验，于恒温培养箱中培养据自己鉴定对象去选购相应系列的产品，例如，肠道菌鉴定可用指试管数，指肠道细菌厌氧菌可用指厌氧菌，故接种后应放在厌氧罐中培养等等。

药敏实验药敏实验容血性，过氧化氢酶芽孢有无和和革兰氏染色反应等后，就可按规定对结果进行编码查检索表，最后获得该菌种的鉴定结果。

余年来，此系统已为国际有关实验室普遍选用。

实用系统鉴定的细菌有多种，使用前可根滴管中，待撕开覆盖膜后，加入到每个小管中每管约加。

般经过保温后，即可看出每个小管是否发生显色反应，并将结果记录在相应的表格中，再加上若干补充试剂，包括细胞形态大小运动性产色素干粉有标签表明和反应产物的显色剂。

每份产品都有薄膜覆盖，保证无杂菌污染。

使用时，先打开附有的小瓶无菌基本培养基液体，用于稀释待鉴定的纯菌落或菌苔。

实验时，先把制成的浓度适中的细菌悬液吸入无菌御中心帮忙鉴定。

他们采用的是细菌数值鉴定系统。

这是种能同时测定项以上生化指标，因而可用做快速鉴定细菌的长形卡片，法国生产，其上整齐的排列着个塑料小管，管内加有适量糖类等生化反应的体培养基平板，置于恒温培养箱培养，然后观察菌落的形态。

将获得的纯培养物参考周德庆主编微生物实验手册中的实验方法对其进行涂片，固定，革兰氏染色后镜检。

病原菌的鉴定对所分离出的菌株由永川免疫防态至的纯菌落，挑取单个菌落经涂片染色镜检，证实为纯培养物。

挑取其中单个优势菌落，保存在固体培养基斜面上，或甘油无菌生理盐水中冰箱保存，备用。

菌落及形态学观察用获得的纯培养物接种于固工作台上，用酒精消毒鱼体表面，直接取溃烂的皮肉组织于无菌研钵中并加入少许无菌水将其捣碎，划线接种于固体培养基平板上，置恒温培养箱中培养。

从平板上选取优势菌落进行纯培养，等培养至代后可获得形洗净，置于冰箱中备用。

固体培养基的配置蛋白胨，酵母膏琼脂粉，溶于水中，用调到，定容到，灭菌。

病原菌的分离在无菌条件下即已灭菌的紫外超净白鲢于年月日星期天采自重庆市永川双竹渔场。

体长，病鱼表现为体表溃烂，鱼体两侧有出血点，腹部鳍基部眼下眶充血。

实验前准备培养皿试管等若干清洗并高压灭菌，放置于紫外超净工作台备用。

将患病白鲢洗白鲢于年月日星期天采自重庆市永川双竹渔场。

体长，病鱼表现为体表溃烂，鱼体两侧有出血点，腹部鳍基部眼下眶充血。

实验前准备培养皿试管等若干清洗并高压灭菌，放置于紫外超净工作台备用。

将患病白鲢洗净，置于冰箱中备用。

固体培养基的配置蛋白胨，酵母膏琼脂粉，溶于水中，用调到，定容到，灭菌。

病原菌的分离在无菌条件下即已灭菌的紫外超净工作台上，用酒精消毒鱼体表面，直接取溃烂的皮肉组织于无菌研钵中并加入少许无菌水将其捣碎，划线接种于固体培养基平板上，置恒温培养箱中培养。

从平板上选取优势菌落进行纯培养，等培养至代后可获得形态至的纯菌落，挑取单个菌落经涂片染色镜检，证实为纯培养物。

挑取其中单个优势菌落，保存在固体培养基斜面上，或甘油无菌生理盐水中冰箱保存，备用。

菌落及形态学观察用获得的纯培养物接种于固体培养基平板，置于恒温培养箱培养，然后观察菌落的形态。

将获得的纯培养物参考周德庆主编微生物实验手册中的实验方法对其进行涂片，固定，革兰氏染色后镜检。

病原菌的鉴定对所分离出的菌株由永川免疫防御中心帮忙鉴定。

他们采用的是细菌数值鉴定系统。

这是种能同时测定项以上生化指标，因而可用做快速鉴定细菌的长形卡片，法国生产，其上整齐的排列着个塑料小管，管内加有适量糖类等生化反应的干粉有标签表明和反应产物的显色剂。

每份产品都有薄膜覆盖，保证无杂菌污染。

使用时，先打开附有的小瓶无菌基本培养基液体，用于稀释待鉴定的纯菌落或菌苔。

实验时，先把制成的浓度适中的细菌悬液吸入无菌滴管中，待撕开覆盖膜后，加入到每个小管中每管约加。

般经过保温后，即可看出每个小管是否发生显色反应，并将结果记录在相应的表格中，再加上若干补充试剂，包括细胞形态大小运动性产色素容血性，过氧化氢酶芽孢有无和和革兰氏染色反应等后，就可按规定对结果进行编码查检索表，最后获得该菌种的鉴定结果。

余年来，此系统已为国际有关实验室普遍选用。

实用系统鉴定的细菌有多种，使用前可根据自己鉴定对象去选购相应系列的产品，例如，肠道菌鉴定可用指试管数，指肠道细菌厌氧菌可用指厌氧菌，故接种后应放在厌氧罐中培养等等。

药敏实验药敏实验采用纸片法，选用了生产上常用的种药物进行试验。

按实验操作要求先将细菌进行培养，用无菌生理盐水洗下后吸取菌液于固体培养基平板上均匀涂布，贴上药敏纸片，每种药敏片设个平行实验，于恒温培养箱中培养，然后观察有无抑菌圈产生，并记录抑菌圈直径，计算平均值。

再重复做次实验。

最后根据抑菌圈直径比照判断标准现代诊断学手册抑菌圈直径为高度敏感为中度敏感为抗性即不敏感得出药敏实验结果。

药敏试纸购自杭州天和微生物试剂有限公司。

人工感染实验感染方式为肌肉注射感染。

实验分个组同时进行，分别为菌液浓度组，组，组和无菌生理盐水组。

先将保存于斜面中的细菌接种于平板，培养后用无菌生理盐水洗下，制成菌悬液，用分光光度计记数，配成三个浓度，给健康白鲢每尾注射菌液，对照组注射等量无菌生理盐水。

各组实验鱼分别放置于不同水族箱中，在水温饲养，其外部环境相同。

感染后每天投喂颗粒饲料，日换水量，每天下午吸污。

每天观察记录鱼的活动情况，连续观察天。

结果病原菌的分离及菌落形态从患病白鲢上共分离到株菌，分别标记为。

其菌落形态如图二所示图的菌落形态其菌落呈圆型，小而薄，表面光滑湿润较粘稠，边缘圆整，色泽均匀呈白色，半透明，易挑取图二的菌落形态其菌落近似圆型，大而扁平，表面光滑湿润，边缘不规则，质地均匀，其颜色近似黄色，不透明，易挑取病原菌的形态学观察光学显微镜下革兰氏染色均为阴性，如图三四所示图三在光学显微镜倍油镜下的形态其菌经革兰氏染色后呈红色即为阴性，形态近似杆状故为杆菌图四在光学显微镜倍油镜下的形态其菌经革兰氏染色后呈红色即为阴性，形态为弧状故为弧菌病原菌的鉴定结果因为时间原因，并且分离菌的菌落形态及个体形态特征比较特别，故把作为实验菌，将保存备用。

由永川免疫防御中心帮忙鉴定，他们采用细菌鉴定系统得出的生化谱结果见表。

表分离菌的生理生化特征生化项目结果生化项目结果生化项目结果鉴定结果鉴定值补充实验结果蔗糖可能为河流弧菌七叶灵水解精氨酸蜜二糖葡萄糖生长赖氨酸弧菌抑制剂反应鸟氨酸葡萄糖阿拉伯糖甲基红实验柠檬酸钠甘露糖氧化酶肌醇脲素山梨醇鼠李糖注表阳性表阴性根据实验结果结合观察到的菌落形态及伯杰氏细菌鉴定手册，鉴定该菌为河流弧菌。

药敏实验结果分离菌菌名菌液浓度注射剂量注射鱼数尾死亡鱼数尾死亡率对照生理盐水人工感染后发病鱼的主要症状为食欲下降甚至停食，体色变黑，离群独游，游动缓慢，对外界刺激不敏感，鱼体两侧有出血点，皮肤腐烂，背鳍胸鳍尾鳍的鳍条基部充血，解剖腹腔肠道微红壁薄少韧性易拉断，肝脏腿色，肠壁充血。

与自然发病的症状基本相同。

重复感染实验结果相似。

据此可确认该分离菌为致病菌。

讨论从患病白鲢溃烂的皮肉组织中分离到的菌株呈明显的革兰氏阴性杆菌，菌落呈圆型，小而薄，表面光滑湿润较粘稠，色泽均匀呈白色，半透明，易挑取而从相同部位分离的菌株呈明显的革兰氏阴性弧菌，菌落近似圆型，大而扁平，表面光滑湿润，质地均匀，其颜色近似黄色，不透明，易挑取。

从菌落形态中可以看出，符合般性细菌的菌落特征，比较大众化，可能为常见的种细菌，如乳杆菌和肠杆菌等，般无致病性而的菌落形态比较特别。

再加上做实验的时间也比较紧促，故我们只对进行了比较详细的鉴定。

对的鉴定主要采用细菌鉴定系统鉴定其生理生化特征。

编码是种国际公认的细菌鉴定手工检索编码，在国内也拥有众多的用户。

但目前在国内编码系列中没有单独的弧菌科细菌鉴定编码，而是将弧菌归属于肠道菌鉴定系统系列或与非发酵菌共同归属于非肠道革兰