18毕业论文：超氧化物歧化酶的现状与发展

是生物体防御氧毒性的关键性防线。

的药用研究，国内外主要用于治疗因超氧阴离子伤害引起的疾病如心肌缺血与缺血再灌注综合症类风湿关节炎红斑狼疮等。

此外，对治疗贝切特氏病心肌梗塞等血虚性心脏病胶原病新生儿呼吸困难综合症防御放射线作用等也东圃渴望有效。

大豆与的生产广泛存在于动物植物微生物等体内。

如果能从各种生物体内提取出，使其广泛的应用于医疗保健食品等方面，这项技术将会带来巨大的社会效益。

国外提取纯化上艺在年代已经成型，目前的研究方向主要在医疗方面的检测酚的自氧化速率。

样品光密度值变化速率。

的电泳采用圆盘电泳的方法，根据表配置浓缩胶为，分离胶为，起始电压，起始电流分别点样样品液各微升。

电泳完成后分别进行蛋白质常规染色和中年其活性仍不见下降。

的应用与其它抗氧化剂样，可作为罐头食品果汁啤酒等的抗氧化剂，防止过氧化酶引起的食品变质及腐败现象还可作为水果蔬菜等的良好保鲜剂。

另外还可以作为值磷酸钾溶液中，测得此酶的最适为，高于或低于，酶活力均有明显下降趋势，在以下和以上，酶活力为零。

牛血红细胞的和来自细菌中的对表现很不敏感，即使将其保存在值的磷酸盐缓冲液中，于保温并定时测活力，发现猪血在时比较稳定，以下，以上不稳定，时极不稳定，酶活力仅为，仅为。

阂丽娥等人将蜂王浆在不同示了较强的结构稳定性。

李泽浩报道在为时，中的离子要被脱落，在小于时，的结合位点仅要移动，大于时，酶的构象会发生变化而失活。

据有关材料介绍，将溶于不同合状态，而影响其活性。

般认为在范围内，其稳定胜较好，对不甚敏感。

等报道在范围内基本稳定，在此范围内可见紫外光谱和电子自旋共振波几乎不发生改变，显象熔点温度的测定表明是迄今发现热稳定性最高的球蛋白之。

而对热比较敏感。

对的影响酶活性受值的影响，这是人所共知的理论，对来说，值改变将会改变酶蛋白金属辅因子的结下活性降低。

温度对的影响对热稳定，天然牛血在下加热数分钟，其酶活性丧失很少。

在离子强度很低的情况下，加热至，的活性损失亦很少，构催化速率常数样，但在碱性条件下明显减小时，时。

而也有不同实验表明有较宽的最适范围。

在高族氨基酸残基，因此决定其具有较好的溶解性能。

歧化反应速度在催化下歧化反应的速率常数大约为，而且在范围内几乎不变。

在时，与，和与样，对酶活性是必需的。

的亲水性是能在水中有较好溶解性能的蛋白质，结构已研究较多的牛红细胞中，已知个氨基酸残基，其中是极性氨基酸，仅有左右的芳香恢复而对维持酶分子结构的完整性有着重要的作用。

有实验表明在中，旦与结合的组氨酸和天冬氨酸被丙氨类型理化性质酸取代，则酶的折叠结构及完整性遭到破坏。

在和中酶含的和的牛血和牛心。

实验表明，与的作用是不同的，与催化活性有关，透析去除则酶活性全部丧失，旦贡新加入，其活性又可重新线可见光氨基酸组成特点酪氨酸和色氨酸缺乏含酪氨酸和色氨酸含酪氨酸和色氨酸含酪氨酸和色氨酸抑制明显抑制无无无处理明显失活无影响无影响明显失活是金属酶，用电子顺磁共振测得，每化性质表现出异常的稳定性，的主要理化性质见表。

表的些理化性质分子量含有金属数，最大光吸收紫外较好的测定方法之。

在般情况下，酶活性测定只能应用间接活性测定法。

本实验采用邻苯三酚自氧化方法。

的理化性质是种酸性蛋白，在酶分子上共价连结金属辅基，因此它对热，以及些理应用受到限制。

亚硝酸盐形成法与抑制剂或处理相结合，应用于测定，灵敏度比还原法提高数倍，而且专性强，重复性好，操作方便，不需要特殊仪器和设备，易于实际应用和推广，是目前实用。

化学发光法和光化学扩增法不适用于测定，但对于反应极灵敏。

还原法用于活力测定结果稳定，重复性好。

但专性和灵敏度不够理想，而且需要特殊仪器，实际应实用。

化学发光法和光化学扩增法不适用于测定，但对于反应极灵敏。

还原法用于活力测定结果稳定，重复性好。

但专性和灵敏度不够理想，而且需要特殊仪器，实际应用受到限制。

亚硝酸盐形成法与抑制剂或处理相结合，应用于测定，灵敏度比还原法提高数倍，而且专性强，重复性好，操作方便，不需要特殊仪器和设备，易于实际应用和推广，是目前较好的测定方法之。

在般情况下，酶活性测定只能应用间接活性测定法。

本实验采用邻苯三酚自氧化方法。

的理化性质是种酸性蛋白，在酶分子上共价连结金属辅基，因此它对热，以及些理化性质表现出异常的稳定性，的主要理化性质见表。

表的些理化性质分子量含有金属数，最大光吸收紫外线可见光氨基酸组成特点酪氨酸和色氨酸缺乏含酪氨酸和色氨酸含酪氨酸和色氨酸含酪氨酸和色氨酸抑制明显抑制无无无处理明显失活无影响无影响明显失活是金属酶，用电子顺磁共振测得，每酶含的和的牛血和牛心。

实验表明，与的作用是不同的，与催化活性有关，透析去除则酶活性全部丧失，旦贡新加入，其活性又可重新恢复而对维持酶分子结构的完整性有着重要的作用。

有实验表明在中，旦与结合的组氨酸和天冬氨酸被丙氨类型理化性质酸取代，则酶的折叠结构及完整性遭到破坏。

在和中，和与样，对酶活性是必需的。

的亲水性是能在水中有较好溶解性能的蛋白质，结构已研究较多的牛红细胞中，已知个氨基酸残基，其中是极性氨基酸，仅有左右的芳香族氨基酸残基，因此决定其具有较好的溶解性能。

歧化反应速度在催化下歧化反应的速率常数大约为，而且在范围内几乎不变。

在时，与催化速率常数样，但在碱性条件下明显减小时，时。

而也有不同实验表明有较宽的最适范围。

在高下活性降低。

温度对的影响对热稳定，天然牛血在下加热数分钟，其酶活性丧失很少。

在离子强度很低的情况下，加热至，的活性损失亦很少，构象熔点温度的测定表明是迄今发现热稳定性最高的球蛋白之。

而对热比较敏感。

对的影响酶活性受值的影响，这是人所共知的理论，对来说，值改变将会改变酶蛋白金属辅因子的结合状态，而影响其活性。

般认为在范围内，其稳定胜较好，对不甚敏感。

等报道在范围内基本稳定，在此范围内可见紫外光谱和电子自旋共振波几乎不发生改变，显示了较强的结构稳定性。

李泽浩报道在为时，中的离子要被脱落，在小于时，的结合位点仅要移动，大于时，酶的构象会发生变化而失活。

据有关材料介绍，将溶于不同值的磷酸盐缓冲液中，于保温并定时测活力，发现猪血在时比较稳定，以下，以上不稳定，时极不稳定，酶活力仅为，仅为。

阂丽娥等人将蜂王浆在不同值磷酸钾溶液中，测得此酶的最适为，高于或低于，酶活力均有明显下降趋势，在以下和以上，酶活力为零。

牛血红细胞的和来自细菌中的对表现很不敏感，即使将其保存在中年其活性仍不见下降。

的应用与其它抗氧化剂样，可作为罐头食品果汁啤酒等的抗氧化剂，防止过氧化酶引起的食品变质及腐败现象还可作为水果蔬菜等的良好保鲜剂。

另外还可以作为营养强化剂加入食品中制成新的保健食品，例如绿茶饮料有预防龋齿敏感症痛风降压抑制氧化等作用，番木瓜酒采用低温生物技术发酵而成，是种低度纯天然的绿色健康型果露酒，能帮助消化，消除慢性胃炎，舒张血管，降低血压等作用。

目前已开发的还有蛋黄酱酸牛奶可溶性咖啡奶糖等产品。

在医学上有着广泛的应用。

人类机体所处的环境复杂，体内经常不断地产生自由基，特别在病理过程中，产生大量的，这些反过来促进病情加重，因而在清除中则显得异常重要。

是生物体防御氧毒性的关键性防线。

的药用研究，国内外主要用于治疗因超氧阴离子伤害引起的疾病如心肌缺血与缺血再灌注综合症类风湿关节炎红斑狼疮等。

此外，对治疗贝切特氏病心肌梗塞等血虚性心脏病胶原病新生儿呼吸困难综合症防御放射线作用等也东圃渴望有效。

大豆与的生产广泛存在于动物植物微生物等体内。

如果能从各种生物体内提取出，使其广泛的应用于医疗保健食品等方面，这项技术将会带来巨大的社会效益。

国外提取纯化上艺在年代已经成型，目前的研究方向主要在医疗方面的检测酚的自氧化速率。

样品光密度值变化速率。

的电泳采用圆盘电泳的方法，根据表配置浓缩胶为，分离胶为，起始电压，起始电流分别点样样品液各微升。

电泳完成后分别进行蛋白质常规染色和酶活性染色。

表格不连续电泳浓缩胶和分离胶配方贮液凝胶终浓度单体贮液浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液双蒸水过硫酸铵注在加过硫酸铵以前，溶液应抽气，过硫酸铵应该在即将灌胶前加。

过硫酸铵和的量应根据室温和聚合情况而定。

凝胶聚合后，应在保存再用，以使凝胶充分聚合，孔径均匀，改善电泳分辨率。

蛋白染色脱色，考马斯亮蓝溶于过氯酸的甲醇溶液中，固定和染色到见带为止约，用醋酸甲醇脱色。

活性染色，黑暗中将电泳后的凝胶片浸泡于氮蓝四唑，然后将凝胶片移入含有四甲基乙二胺，核黄素和磷酸钠缓冲液中，浸泡，最后将胶片浸在含有磷酸钠缓冲液，溶液，并用光照，同工酶活性谱带是出现在蓝色背景上的无色透明区带。

第章实验结果与讨论硫酸铵分级盐析法和热变性法的对比由文献知，邻苯三酚法可作为快速检测活性的首选方法。

首先，按照使用步骤要求，利用紫外分光光度计测量出现场配置的邻苯三酚自氧化速率。

如实验要求配置溶液并混匀后，迅速于石英比色杯波长测光密度值，每隔测次光密度值共测，求出邻苯三酚的自氧化速率。

表邻苯三酚自氧化速率数据表时间值时间值分别加入两种使用不同初提方法的样品溶液到蒸馏水中，并迅速混匀，再加邻苯三酚于波长测定光密度值，测次，测，得如下表盐析法处