TOP31生物科学专业毕业论文--_凡纳滨对虾线粒体控制区群体遗传学分析.docx文档免费在线阅读

表凡纳滨对虾样品来源与养殖情况样品群体名称样品来源样品数量养殖状态塞班群岛号养殖池塞班补充灭菌的去离子蒸馏水至总体积。

反应条件为预变性变性，退火，延伸，个循环最后延伸保存。

扩增产物用的琼脂糖凝胶于扩增获得了稳定清晰的条带，可用于全部样品的扩增。

反应体系为模板上下游引物各聚合酶程上海股份有限公司合成完成的。

将正反向引物两两交叉筛选，通过设置温度梯度进行引物扩增。

扩增产物经的琼脂糖凝胶电泳检测结果，最终确定正向引物，反向引物组合引物的合成通过生工生物工。

反向引物的凡纳滨对虾线粒体全序列来设计引物，正向引物上海有限公司提取凡纳滨对虾基因组总。

提取得到样品经的琼脂糖凝胶电泳检测纯度，紫外分光光度计测定浓度，保存于冰箱备用。

控制区基因序列的扩增及测序依据中已公布基地群体表。

实验样品成年虾对每组，酒精密封于样本瓶中，带回实验室后于冰箱保存备用。

每群体随机挑选尾取眼柄进行的提取。

本研究使用海洋动物组织基因组提取试剂盒天根生化科技作为凡纳滨对虾选育群体的遗传育种选优种群测评和生物多样性提供有利的科学方法。

材料与方法研究样品来源及总的提取本研究材料样本取自美国塞班岛凡纳滨对虾养殖基地群体，美国关岛凡纳滨对虾养殖论依据。

本研究正是以此为基础，以凡纳滨对虾为研究对象，设计引物得到凡纳滨对虾线粒体控制区序列，分析检测控制区序列作为种基因识别标记在凡纳滨对虾不同养殖群体多态性研究中的可行性，大多数对虾控制区基因序列多态性展开研究，可以有效了解群体的遗传结构变异程度基因流动及系统发育进化等方面的情况，更为探究线粒体控制区作为种基因条形码来识别不同群体的遗传关系是否有效提供理多。

凡纳滨对虾本身具有丰富的遗传多样性和遗传杂合水平，而具有独特的优点分子量小单拷贝数高结构和组织简单而高度保守母系遗传，缺乏重组突变率高。

通过对凡纳滨。

通过分析鉴定凡纳滨对虾全序列或部分基因片段，全部分析结果其物种进化与遗传关系的已被广泛应用到南美白对虾的研究领域中，其中有关，等基因片段的研究较序列重复，表达序列标签，单核苷酸多态性等分子标记分析技术为主的研究，目前，生物线粒体已然成为研究动物系统天然进化和种群种群遗传学的主要研究对象遗传多样性及其相关分析的成果多来自于以限制性片段多态性，随机扩增多态性，序列特异性扩增区，线粒体标记，扩增片段长度多态性，简单遗传多样性水平的影响进行了解，为今后合理开发保护和利用凡纳滨对虾的种质资源以及遗传改良奠定基础。

日前凡纳纳滨对虾在世界范围的养殖已经非常广泛，研究其用于养殖及生态多样越来越丰富。

目前关于凡纳滨对虾遗遗传多样性水平的影响进行了解，为今后合理开发保护和利用凡纳滨对虾的种质资源以及遗传改良奠定基础。

日前凡纳纳滨对虾在世界范围的养殖已经非常广泛，研究其用于养殖及生态多样越来越丰富。

目前关于凡纳滨对虾遗传多样性及其相关分析的成果多来自于以限制性片段多态性，随机扩增多态性，序列特异性扩增区，线粒体标记，扩增片段长度多态性，简单序列重复，表达序列标签，单核苷酸多态性等分子标记分析技术为主的研究，目前，生物线粒体已然成为研究动物系统天然进化和种群种群遗传学的主要研究对象。

通过分析鉴定凡纳滨对虾全序列或部分基因片段，全部分析结果其物种进化与遗传关系的已被广泛应用到南美白对虾的研究领域中，其中有关，等基因片段的研究较多。

凡纳滨对虾本身具有丰富的遗传多样性和遗传杂合水平，而具有独特的优点分子量小单拷贝数高结构和组织简单而高度保守母系遗传，缺乏重组突变率高。

通过对凡纳滨对虾控制区基因序列多态性展开研究，可以有效了解群体的遗传结构变异程度基因流动及系统发育进化等方面的情况，更为探究线粒体控制区作为种基因条形码来识别不同群体的遗传关系是否有效提供理论依据。

本研究正是以此为基础，以凡纳滨对虾为研究对象，设计引物得到凡纳滨对虾线粒体控制区序列，分析检测控制区序列作为种基因识别标记在凡纳滨对虾不同养殖群体多态性研究中的可行性，大多数作为凡纳滨对虾选育群体的遗传育种选优种群测评和生物多样性提供有利的科学方法。

材料与方法研究样品来源及总的提取本研究材料样本取自美国塞班岛凡纳滨对虾养殖基地群体，美国关岛凡纳滨对虾养殖基地群体表。

实验样品成年虾对每组，酒精密封于样本瓶中，带回实验室后于冰箱保存备用。

每群体随机挑选尾取眼柄进行的提取。

本研究使用海洋动物组织基因组提取试剂盒天根生化科技上海有限公司提取凡纳滨对虾基因组总。

提取得到样品经的琼脂糖凝胶电泳检测纯度，紫外分光光度计测定浓度，保存于冰箱备用。

控制区基因序列的扩增及测序依据中已公布的凡纳滨对虾线粒体全序列来设计引物，正向引物。

反向引物引物的合成通过生工生物工程上海股份有限公司合成完成的。

将正反向引物两两交叉筛选，通过设置温度梯度进行引物扩增。

扩增产物经的琼脂糖凝胶电泳检测结果，最终确定正向引物，反向引物组合于扩增获得了稳定清晰的条带，可用于全部样品的扩增。

反应体系为模板上下游引物各聚合酶补充灭菌的去离子蒸馏水至总体积。

反应条件为预变性变性，退火，延伸，个循环最后延伸保存。

扩增产物用的琼脂糖凝胶电泳检测后，直接送生工生物工程上海股份有限公司进行测序。

表凡纳滨对虾样品来源与养殖情况样品群体名称样品来源样品数量养殖状态塞班群岛号养殖池塞班群岛号养殖池关岛号养殖池关岛号养殖池线粒体控制区序列的整理与分析将测序所获序列用序列编辑软件软件进行比对整理并辅以人工校对，去除两端多余序列后，用软件进行多重比对分析，使用计算变异位点和简约信息位点，并计算基因核苷酸多样性单倍型多样性和平均核苷酸差异数用软件计算统计碱基组成多态位点数转换颠换和缺失等分子多态性指数，对个群体遗传多样性进行中性检验对群体内和群体间的遗传变异进行分子方差分析和遗传分化指数检验。

用软件计算最大分化指数来确定群体间的最大遗传分组。

用软件中的，得到想要并满意的产物再者是具有遗传变异的多样性，能够将物种和群体区别开来。

等认为，在动物界中，线粒体基因是合适的用于物种鉴定的条形码标准基因，因为动物的结构功能性简单明显的家族母系遗传的特点进化稳定并快速很少发成突变重组等特点，是物种间系统发育和物种进化常有用的基因。

目前，线粒体基因用于种间条形码的有效性已经得到广泛证明，并且随着数据库的产生，来自世界各个国家物种的条形码序列正在以每年万条的速度增加，该数据库使得种质鉴定的学术交流更加方便，并且提供个更广阔的集成平台。

线粒体控制区用于种内不同群体间的鉴定，目前报道相对较少，本研究目的在于探究线粒体控制区应用于不同群体间的鉴定是否有效，结果表明，线粒体控制区对于种内不同群体间的种质鉴定可行，但是仍有定局限性。

但可以肯定的是，基于序列分析技术的分子标记，是种实际可行和快速简便的物种群体鉴别方法，代表了未来物种鉴别研究的发展趋势。

随着对凡纳滨对虾线粒体序列不同标记基因研究的深入，将更能够准确地探讨凡纳滨对虾及其与其它对虾种间的系统进化关系，这些都对凡纳滨对虾生物多样性资源保护及研究提供了新的方向和科学材料。

结论本研究是承上启下的工作，为正确良好的构建凡纳滨对虾家系遗传育种的良好基础，又为凡纳滨对虾生物多向性提供有利序列。

为提高南美白对虾的养殖选优，本实验从他的保守序列线粒体控制区去开始做起，而线粒体控制区既稳定又突变明显易于检测和对照，选用四种种群，两大家系。

为不影响本实验的准确性和精确性，在进行重要环节核苷酸检测，扩增，序列比对等环节均进行了不同程度的多次重复实验和不同软件进行实验，但难免不了实验过程中的出现误差以及数据不理想情况，但都进行处理核实，为把实验误差降低到最低，不排除序列本身的突变等多态性结果。

放眼当今世界凡纳滨对虾选优育种科技方法，在改良凡纳滨对虾的遗传性状预防病毒性侵害培育遗传性状稳定的优良品种增强免疫反应增长抗药性和耐受性的复杂过程中，为了了解以上特征，并提高对虾育种计划的遗传改良的速度，决定这些特征的遗传位点首先需要通过连锁反应和数量性状基因座作图而被识别。

为了增加进行映射的多态性标记数目，与含有个或多个具有多个个或更多的重复的基序的微卫星侧接的引物组被设计并测试。

常常是多层次多领域的学科知识和多方位多角度的现代科学技术，采用新技术与常规择优育种相辅相承的，我们努力将科研成果应用到实际生活中，实现凡纳滨对虾研究育种的飞跃式发展。

参考文献杨彦豪，陈晓汉，谢达祥等分子标记技术在凡纳滨对虾中的应用进展广西水产科技梁宏伟，邹桂伟，罗相忠，等种中国鲤序列的多态性与系统进化研究西北农林科技大学学报自然科学版，−李锋，刘楚吾，林继辉两个凡纳滨对虾亲本群体的研究湛江海洋大学学报沈琪，任春华，胡超群，等凡纳对虾细角对虾和斑节对虾的标记研究热带海洋学报杜启艳，常重杰条形码在鉴定物种中的应用生物学教学−，−邱高峰，常林瑞，徐巧婷，等中国对虾基因序列多态性的研究动物学研究高天翔，张秀梅，渡边精中华绒螯蟹与日本绒螯蟹线粒体序列的比较水产学报，−，−律迎春，左淘，唐庆娟，等海参条形码的构建及应用中国水产科学−郭昱嵩，王中铎，贾菠，等南海常见种石斑鱼的水生生物学报−单云晶，鲁翠云，李超，等基于线粒体基因序列的种鲤养殖品种遗传多样性研究中国水产科学，−何继满分支系统学的外群分析方法中外群性状状态确定的探讨动物学报，−−，−，−−，−