值得关注。基因阳性菌株与基因阴性菌株基因携带率有显著性差异，可能有协同耐药机制存在，有待进步研究。关键词感菌株中均存在，喹诺酮类药物敏感菌株中基因的检出值得关注。基因阳性菌株与基因阴性菌株基因携带率有显著性差异，可能有协同耐药机制存在，有待进步研究。关键词肠杆菌属产气肠杆菌耐药性喹诺酮类质粒连续分离菌株温州医学院硕士学位论文，。温州医学院硕士学位论文用力震荡，离心吸弃上层小心吸取，不要破坏中层加，混合均匀，离心吸弃上层，将底层液体转到膜上，置新的的管上，离心去掉，加至滤液中，混匀将滤液转移至，离心加入于中，离心用洗两次将置的管上，离心将置新的管上，加预热后洗脱效果更好于膜中央，室温静置离心，收集洗脱液，即为细菌基因组。细菌电泳定量制备的琼脂糖凝胶上样随机挑取部分菌株进行估计，将的稀释倍后与上样缓冲液混匀，用加样枪加入凝胶样品孔中，分别取，的的加入其余样品孔中电泳后在紫外灯下观察并估约的浓度根据估计的浓度稀释至所需浓度，冰箱保存，以备作为的模板。温州医学院硕士学位论文引物设计首先在的中查找基因的序列信息，然后利用软件，遵循引物设计原则，根据实验需要来设计引物，引物设计好后用验证其特异性，符合要求的引物由上海生工合成比较成熟的基因引物，和基因参照参考文献，用验证其特异性后由上海生工合成。所用引物详见表和。表基因所用引物列表表检测基因型所用引物列表基因型引物序列产物长度退火温度引物名称引物序列参考序列产物长度退火温度参考文献本研究本研究本研究温州医学院硕士学位论文检测基因与基因初筛基因与基因用反应体系表，初筛后耐药基因阳性菌株测序体系用反应体系表，反应循环参数设置如图和，每次扩增时加标本阳性对照试剂阴性对照作为质控。表初筛体系各成分名称各成分体积终浓度正向引物反向引物聚合酶模板总计表测序体系温州医学院硕士学位论文各成分名称各成分体积终浓度正向引物反向引物聚合酶模板总计图基因反应循环参数注为反应条件中的退火温度。图基因反应循环参数注为反应条件中的退火温度。产物电泳检测用电子天平称取琼脂糖，量取，加入锥形瓶中，在微波炉中加热溶解直至溶液变清，制得的琼脂糖溶液待溶液冷却到左右，加入溴化乙锭，使其终浓度为，混匀温州医学院硕士学位论文将凝胶倒入凝胶槽中，放置梳子待凝胶完全凝固后，将凝胶槽放入盛有缓冲液的电泳槽中，缓缓垂直拔出梳子，凝胶应完全被缓冲液覆盖，般没过胶面约取扩增产物与上样缓冲液混匀，用加样枪依次加入凝胶样品孔中，以和为标准盖上电泳槽，接通电源，以的电压进行电泳电泳结束后，用全自动凝胶成像分析系统观察结果，拍照保存。阳性产物测序与目的片段大小相符的阳性产物由北京华大基因公司纯化后进行正反向双向测序，测序结果先在本地数据库比对，然后再在中用进行比对分析。比对有差异的序列用软件递交至。质粒接合转移试验参照王明贵等的方法，以大肠埃希菌对叠氮化钠耐药为接合实验受体菌，基因阳性产气肠杆菌为供体菌。方法为取对数生长期的供体菌及受体菌各加到新鲜液体培养基中过夜培养。接合子以胰蛋白胨大豆琼脂平板筛选，根据供体菌及受体菌的药敏结果确定筛选平板中药物的浓度，针对不同供体菌选用不同的药物筛选，筛选平板中含叠氮化钠及复方新诺明甲氧苄啶磺胺甲噁唑，氯霉素庆大霉素头孢唑啉或四环素中的种，置孵育。在筛选平板上生长的菌落同时接种至含及不含环丙沙星的平板上，以了解基因是否同时转移。筛选成功的接合子用大肠显色培养基予以初步确认，为进步确证供体菌的喹诺酮类耐药基因和基因是否共同传递到受体株，提取接合子进行相对应耐药基因的扩增。接合转移实验判断标准见表。表接合转移实验判断标准接合转移实验供体菌受体菌接合子阳性不生长不生长生长阴性不生长不生长不生长失败供体菌或受体菌有种生长生长琼脂稀释法检测供体菌对喹诺酮类药物的值用推荐的琼脂稀释检测临床分离菌株对环丙沙星诺氟沙星左氧氟硕士学位论文论文题目产气肠杆菌耐药特性及其质粒介导的喹诺酮类耐药基因研究研究生姓名学科专业临床检验诊断学类型科学型指导教师二年五月目录缩略词表中文摘要英文摘要前言第部分肠杆菌属细菌临床感染及耐药性特性研究材料和方法结果分析与讨论第二部分产气肠杆菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因及其相关特性研究材料和方法结果分析与讨论小结正文参考文献附录致谢综述综述参考文献独创性声明温州医学院硕士学位论文缩略词表缩写英文全称中文全称质粒介导的喹诺酮类耐药喹诺酮类药物耐药决定区最低抑菌浓度敏感中介耐药聚合酶链反应三磷酸脱氧核苷环丙沙星左旋氧氟沙星诺氟沙星萘啶酸头孢曲松头孢他啶氨基酸超广谱内酰胺酶胰蛋白胨大豆琼脂温州医学院硕士学位论文产气肠杆菌耐药特性及其质粒介导以上城市灾害应急避难场所的规划设计，对应急避难场所的规划原则建设思路管理要求提出了建议，并要求各省自治区直辖市地震局要加强与各地政府的沟通，在年内，先在有条件的城市完成个应急避难场所建设试点工作，随后在辖区范围内逐步推进。建立抗灾减灾应急避难场所，是认真贯彻落实突发事件应对法，全面履行政府职能的重要方面，是加强社会管理和公共服务的重要内容，同时也是积极应对突发公共事件最大限度地减少人民群众生命财产损失的必然要求。项目建设的必要性项目建设是抗击特大自然灾害，最大程度确保人民生命财产安全的需要每年全球都有数以万计的人们，受到地震飓风洪水等自然灾害的影响失去他们的住所，在露天度过灾后最艰难的段日子，由于没有受到及时的庇护和救助，更多的生命消失在本不该让其陨落的时刻。而在世纪的今天，除自然灾害外，公共卫生事件恐怖事件战争等人为灾害更在不断地威胁着人类的生命和财产安全。年突如其来的汶川大地震是建国以来我国遭遇的最大次地质灾害，惨烈的地震给我国人民带来了巨大灾难和切肤之痛，至今仍历历在目，也给我们人类在应对突发危机的问题上敲响了警钟。面对无法预测的各种危机，我们不能再手足无措，无以应对，应站在关注民生，尊重生命的高度上，大力开展以防灾自救，应急避险为主要内容的民防知识教育，同时加快避难场所等硬件设施的规划和建设。城区是由于受地理位臵的限制，城区范围小，人口密集，加之城市建设规划落后，万真有突发危机发生，则人们出逃极为不便，无处藏身。为此，加快完善城区避难场所的规划和加快建设符合我县实际的避难场所，实是今后减灾防灾工作的重中之重。项目建设体现“以人为本”“执政为民”的理念应急避难场所是项崭新的工作，它符合“以人为本”执政为民的政府科学发展观执政理念，能够加强大城市应对灾害事件的能力，彰显政府处理灾害事件能力，是项利民便民服务于民，实现最广大人民根本利益的工程。加强和促进应急避难场所的建设工作，是地震部门为政府增强应急意识，为加强人民群众的自救能力，最大程度减少灾害给人民群众造成生命财产损失的重要举措该项目的建设是广大群众迫切期盼实施的项民生工程，项目建成后，有利于提高居民的生活质量，改善生活环境，共享改革发展成果，提高党和政府的威信，增强人民群众的向心力和凝聚力。应急避难广场建设是广大群众迫切期盼的实施的项民心工程，项目建成后，能使数万人受益。第三章项目业主单位基本情况基本概况位于河北低平原区，属黑龙港流域滏阳河冲积平原，境内地势平坦开阔，地表自西南向东北缓倾，海拔高程在米之间，坡降为。按地形全县大体分四种类型卑湿积涝地，面积平方公里，占全县总面积的沙压地，面积平方公里，占全县总面积的低洼地，面积平方公里，占全县总面积的平原地，面积平方公里，占全县总面积的。境内地质构造较破碎，从整个县域看来，这里古河道纵横交错，在最古老的古河道尚能见到些零星分散的沙丘洼地等痕迹县域西侧有束鹿凹陷内最主要的断裂带牛家桥百尺口断裂带。城管局基本概况城管局始建于年，现有职工人，其中党员人，内设个科室，即办公室法规股财务股环境卫生管理所垃圾污水处理所园林绿化管理所市政维护管理所城市管理综合执法大队。主要职能职责行使城市市容环境卫生管理方面法律法规规章规定的行政处罚权，强制拆除不符合城市容貌标准环境卫生标准的违法建筑物或设施。行使城市园林绿化管理方面法律法规规章规定的行政处罚权。行使城市市政管理方面法律法规规章规定的行政处罚权。行使城市规划管理方面法律法规规章规定的部分行政处罚权。行使城市环境保护管理方面法律法规规章规定的部分行政处罚权。行使工商行政管理方面法律法规规章规定的对场外店外经营的无照商贩，以及虽然有照，但不按执照规定场地而进行店外经营的行为的行政处罚权行使对违反户外广告设臵规定行为的行政处罚权，行使对破损或者残缺等影响市容的广告行为的行政处罚权。贯彻执行国家省市县人民政府关于开展城市管理相对集中行政处罚权工作的有关规定，依据国家有关法律法规和规章，研究拟定我县城市管理行政执法方面的规范性文件，按程序报批后组织实施。负责全县城市管理行政执法工作的组织指挥协调等有关工作负责本局城市管理行政执法人员业务培训业务考核和评比工作。承办县委县政府交办的其它事项。第四章项目建设选址及建设条件场址选择选址地点本项目拟建于新河镇内时代路以南齐家庄以北，裕华街以东，泰大街以西，场址地势平坦，地块比较规则，目前项目场址周边环境良好，交通便利。场址选择的原因时代路以南齐家庄以北，裕华街以东，泰大街以西是目前最大的空旷场地，面积达到亩，同时也是指挥系统调度监控系统套应急广播系统套高音大功率喇叭支发电机台千瓦应急灯个多功能手提式三应急储备物质雨衣雨鞋套电筒把床垫草席张各张饮水机台应急棉被床总平面布臵避难场所是将时代路以南齐家庄以北，裕华街以东，泰大街以西，作为避难广场，建卫生管理方面法律法规规章规定的行政处罚权，强制拆除不符合城市容貌标准环境卫生标准的违法建筑物或设施。行使城市园林绿化管理方面法律法规规章规定的行政处罚权。行使城市市政管理方面法律法规规章规定的行政处罚权。行使城市规划管理方面法律法规规章规定的部分行政处罚权。行使城市环境保护管理方面法律法规规章规定的部分行政处罚权。