39【医学PPT课件】第05章 代谢物酶法分析技术 江苏大学基础医学与医学技术学院文档

变为氧化型，测定处吸光度的下降来计算被测物的浓度。

全国高等脱氢酶指示系统，另个为过氧化物酶指示系统。

酶偶联法二全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术脱氢酶指示系统辅酶Ⅰ床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术酶偶联法酶促反应的底物或产物没有可直接检测的成分，将反应产物偶联到另个酶促反应中，从而达到检测目的的方法。

最常用的偶联指示系统有两个个是在羟丁酸脱氢酶的催化下，被氧化生成乙酰乙酸，同时被还原为，在时测定波长下吸光度上升的速率，就可以计算出血浆中羟丁酸的浓度。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临还原为乳酸并生成。

根据吸光度的下降值可测定样品中的丙酮酸。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术第页脱氢酶法测定血浆羟丁酸羟丁酸，可计算出血液中的乳酸含量。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术第页脱氢酶法测定丙酮酸是乳酸测定的逆反应，丙酮酸在的催化下，接受递给的氢，定乳酸根据乳酸在乳酸脱氢酶催化下脱氢生成丙酮酸，氧化型接受氢转变成还原型。

加入硫酸肼可捕获产物丙酮酸促成反应完成。

生成的与乳酸为等量摩尔，于波长测定的吸光度级反应动力学。

以或为底物的终点法测定中，因吸光度的限制，辅酶的用量不可能过高。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术第页脱氢酶法测酶法分析技术二双底物反应直接测定法对于双底物反应，在实验设计时般将所加的另种底物浓度设计得相当大，即，这时的酶促反应动力学可按单底物法处理，整个反应只与待测物有关，呈与胆红素被氧化的量相关。

在为的条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测吸光度的下降值反映的是总胆红素的含量。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术胆红素氧化酶法胆红素呈黄色，在处有最大吸收峰，胆红素氧化酶催化胆红素氧化形成胆绿素，随着胆红素被氧化，胆红素在处吸光度下降，下降程度胆红素尿酸在处有吸收，而尿囊素没有吸收，在处测定吸光度下降来对其定量。

胆红素在处有吸收，而胆绿素没有吸收，在处测定吸光度下降。

尿酸紫外法测定胆红素测定全国高等医药院校医学检验专反应直接法全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术单底物反应直接测定法尿酸尿酸氧化酶尿囊素胆绿素国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术直接法待测物与产物在理化性质上有便于检测的信号，可直接测定待测物或产物本身信号的改变来进行定量分析的方法。

单酶反国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术直接法待测物与产物在理化性质上有便于检测的信号，可直接测定待测物或产物本身信号的改变来进行定量分析的方法。

单酶反应直接法全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术单底物反应直接测定法尿酸尿酸氧化酶尿囊素胆绿素胆红素尿酸在处有吸收，而尿囊素没有吸收，在处测定吸光度下降来对其定量。

胆红素在处有吸收，而胆绿素没有吸收，在处测定吸光度下降。

尿酸紫外法测定胆红素测定全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术胆红素氧化酶法胆红素呈黄色，在处有最大吸收峰，胆红素氧化酶催化胆红素氧化形成胆绿素，随着胆红素被氧化，胆红素在处吸光度下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。

在为的条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测吸光度的下降值反映的是总胆红素的含量。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术二双底物反应直接测定法对于双底物反应，在实验设计时般将所加的另种底物浓度设计得相当大，即，这时的酶促反应动力学可按单底物法处理，整个反应只与待测物有关，呈级反应动力学。

以或为底物的终点法测定中，因吸光度的限制，辅酶的用量不可能过高。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术第页脱氢酶法测定乳酸根据乳酸在乳酸脱氢酶催化下脱氢生成丙酮酸，氧化型接受氢转变成还原型。

加入硫酸肼可捕获产物丙酮酸促成反应完成。

生成的与乳酸为等量摩尔，于波长测定的吸光度，可计算出血液中的乳酸含量。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术第页脱氢酶法测定丙酮酸是乳酸测定的逆反应，丙酮酸在的催化下，接受递给的氢，还原为乳酸并生成。

根据吸光度的下降值可测定样品中的丙酮酸。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术第页脱氢酶法测定血浆羟丁酸羟丁酸在羟丁酸脱氢酶的催化下，被氧化生成乙酰乙酸，同时被还原为，在时测定波长下吸光度上升的速率，就可以计算出血浆中羟丁酸的浓度。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术酶偶联法酶促反应的底物或产物没有可直接检测的成分，将反应产物偶联到另个酶促反应中，从而达到检测目的的方法。

最常用的偶联指示系统有两个个是脱氢酶指示系统，另个为过氧化物酶指示系统。

酶偶联法二全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术脱氢酶指示系统辅酶Ⅰ或氧化型辅酶Ⅱ变为还原型后，在处的吸光度增高来计算出被测物的浓度。

变为氧化型，测定处吸光度的下降来计算被测物的浓度。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术脱氢酶指示系统血清葡萄糖己糖激酶法测定指示酶反应将转化为，测定吸光度上升的速度与葡萄糖的含量成正比全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术脱氢酶指示系统血清尿素测定尿素尿素酶酮戊二酸谷氨酸测定吸光度下降的速度与尿素的含量成正比，可以用速率法测定也可以用平衡法测定。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术但该法存在内源性氨和外源性氨，以及内源性脱氢酶和还原型辅酶的干扰，需采用含抑制剂如高浓度丙酮酸的双试剂法来测定，否则测定结果偏高。

第页酶偶联脱氢酶法测定尿素方法性能评价尿素酶偶联脱氢酶法测定血清尿素方法简便快速，适用于临床常规分析全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术第页脱氢酶法测定肌酐肌酐在肌酐亚氨基水解酶的作用下水解为甲基乙内酰脲和，与和酮戊二酸在的作用下，生成谷氨酸和，记录处吸光度的下降，进而的测定全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术化学名英文缩写最大吸收峰酚，二氯酚乙基甲苯乙酰乙二胺乙基羟基丙磺酰间甲苯胺乙基丙磺酰，二甲氧基苯胺，过氧化物酶指示系统常用的反应生色基团全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术第页葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖根据可以高特异性的催化葡萄糖氧化成为葡萄糖酸并同时产生，生成的参与反应，生成醌亚胺色素，在波长下比色检测，生成的吸光度与葡萄糖浓度成正比。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术第页酮胺氧化酶法测定糖化血清蛋白在蛋白酶的作用下可形成糖化蛋白片段，该片段在的作用下分解为氨基酸葡萄糖和，生成的即可用反应测定。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术第页甘油磷酸氧化酶法测定血清三酰甘油血清可被水解为甘油和脂肪酸，生成的甘油被甘油激酶及磷酸化后形成磷酸甘油，磷酸甘油氧化酶氧化磷酸甘油产生，生成的参与反应而被测定。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术血清总胆固醇氧化酶测定法胆固醇酯胆固醇胆固醇脂肪酸胆甾烯酮红色醌类化合物酚指示酶反应生成的红色醌类化合物可在处比色测定全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术第页匀相法测定利用系列反应先将或其反应产物清除，然后加入种特殊的选择性表面活性剂，使颗粒形成可溶状态，其释放的胆固醇和胆固醇酯与及反应，生成的用反应测定。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术利用底物和辅酶的反复反应，使待测物的酶促反应产物不断扩增。

当待测物浓度很低时，指示反应可检测信号很小。

利用酶促反应，使待测物和终产物之间的部分反应能循环进行，使检测信号不断增加。

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酶循环法三全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术使用两种酶，种氧化酶用于靶物质的氧化，种脱氢酶使其回到还原状态，促使靶物质或其衍生物或靶物质的氧化产物作为底物循环。

产物循环氧化酶脱氢酶系统全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术甘油甘油磷酸磷酸二羟丙酮产物循环氧化酶脱氢酶系统甘油浓度测定检测指示系统循环前后用速率法测定的变化。

检测产物可通过反应比色测定。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术二底物循环全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术二底物循环脱氢酶辅酶系统用种脱氢酶和两种辅酶和。

用波长测定反应中氧化型转为还原型的增加速度。

全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验第二版第五章代谢物酶法分析技术血淸胆汁酸测定黄色胆汁酸循环酮类固醇胆汁酸与酮类固醇之间构成循环，不断产生硫代还原型辅酶Ⅰ黄色，控制好条件，反应速度与代测物胆汁酸呈正比。

灵敏度可增加数十倍。

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