每个通过的细胞可被个光电装置记录下来，这可谓流式细胞仪的最初模型。概述年用紫外吸收和可见光散射两个参数同时测量未染色的细胞，给出了细胞中核酸的含量和细胞大小，奠定了多参数流式细胞测量的基础。概述年和采用了设计的层流流动室和氩离子激光器开发出了液流束照明光轴，检测系统三者互相垂直的流式细胞仪，成为目前各种流式细胞测量仪的基础。概述年利用的静电墨水喷射液滴偏转技术，建立了流式细胞分选术。和利用飞点扫描技术和缝扫描技术使零分辨率的流式细胞仪变成了低分辨率的流式细胞仪。概述年代以来，流式细胞仪的数据采集存储显示分析日趋完善，随着样品制备方法的增多，新的荧光染料和细胞标记物的出现，流式细胞仪的应用范围逐渐扩大。概述进入年代，标本制备仪和自动进样器的问世，以及适合临床应用的单克隆抗体的增加，使流式细胞仪不仅出现在大专院校和科研单位，它也逐渐进入医院的中心实验室和检验科。第节流式细胞仪的工作原理细胞分析原理二细胞分选原理第节流式细胞仪的原理样品的技术要求检测样品制备的重要性因为流式细胞仪测量的是每个细胞所产生的散射光和荧光信号，如果两个或多个细胞间粘连重叠或细胞碎片过多，都会影响信号的收集及所收集信号的真实性，所以制备单细胞悬液是进行流器，除了对仪器各方面性能指标有严格的要求以外，在实验设计与样品处理方面也需要有丰富的基础理论及操作经验。检测样品制备的重要性二常用的荧光染料与标记染色三操作技术的质量控制第四节流式细胞仪提取所要细胞的个数。•分选纯度指要分选的目的细胞占分选出细胞的百分比。•分选收获率指被分出的细胞与原来溶液中该细胞的百分比。第四节流式细胞仪的技术要求流式细胞分析仪器是项集多学科知识综合应用的复杂仪死时间。死时间越短，仪器处理数据越快，般可达到个秒左右。大型机已达到每秒几万个细胞。第三节流式细胞仪的性能指标四分选指标分选指标主要包括分选速度分选纯度和分选收获率。•分选速度指每秒可，是分布的平均值第三节流式细胞仪的性能指标三分析速度分析速度以每秒分析的细胞数来表示。当细胞流过光束的速度超过仪器响应速度时，细胞产生的荧光信号就会丢失，这段时间称为仪器的化的可以测量到左右。第三节流式细胞仪的性能指标二仪器的分辨率分辨率是衡量仪器测量精度的指标，通常用变异系数值表示是分布的标准误差的结构三光学系统或荧光分子数目来表示，现在的均可达到检测小于个荧光分子的指标。第三节流式细胞仪的性能指标灵敏度前向角散射光检测灵敏度是指能够检测到的最小颗粒大小，般目前商品稳定性高的光照。由于细胞的快速流动，每个细胞经过光照区的时间仅为左右，且细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号强弱，与被照射的时间和激发光的强度有关，因此细胞必须达到足够的光照强度。第二节流式细胞仪样本速率选择高速时，处在样本流不同位置的细胞或颗粒，受激光照射的能量不样，从而被激发出的荧光强度也不相同。第二节流式细胞仪的结构二激光光源与光束形成系统激光是种相干光源，它能提供单波长高强度及空气，通过鞘流压力调节器加在鞘液上恒定的压力，这样鞘液以匀速运动流过流动室，在整个系统运行中流速是不变的。第二节流式细胞仪的结构由于激光焦点处的能量分布为正态分布见右图，中心处能量最高。因此，当的中心，流动室内充满了鞘液,鞘液的作用是将样品流环抱。•样品流在鞘流的环抱下形成聚焦，保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而得到准确的细胞荧光信息。第二节流式细胞仪的结构由右图可知，空气泵产生压缩动系统二激光光源与光束形成系统三光学系统四信号检测与分析五细胞分选器第二节流式细胞仪的结构流动室与液流驱动系统•流动室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央开个孔，供细胞单个流过，检测区在该孔会在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴充以特定的电荷，带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电场时，依所带电荷的符号分别向左偏转或向右偏转，落入指定的收集器内。第二节流式细胞仪的结构流动室与液流驱生光散射。这些信号分别被光电倍增管和光电二极管接收，经过计算机储存计算分析这些数字化信息，就可得到细胞大小和核酸含量等指标。第节流式细胞仪的原理当类细胞的特性与要分选的细胞相同时，流式细胞仪就的鞘液流，鞘液和样品流在喷嘴附近组成个圆柱流束，自喷嘴的圆形孔喷出，与水平方向的激光束垂直相交，相交点称为测量区。第节流式细胞仪的原理信号的产生与接收染色的细胞在测量区受激光照射后发出荧光，同时产人样品管。在气体压力的作用下，悬浮在样品管中的单细胞悬液形成样品流垂直进入流式细胞仪的流动室，沿流动室的轴心向下流动。第节流式细胞仪的原理鞘液的作用流动室轴心至外壁的鞘液也向下流动，形成包绕细胞悬液专院校和科研单位，它也逐渐进入医院的中心实验室和检验科。第节流式细胞仪的工作原理细胞分析原理二细胞分选原理第节流式细胞仪的原理样品进入流动室将悬浮分散的单细胞悬液，经特异荧光染料染色后，放人专院校和科研单位，它也逐渐进入医院的中心实验室和检验科。第节流式细胞仪的工作原理细胞分析原理二细胞分选原理第节流式细胞仪的原理样品进入流动室将悬浮分散的单细胞悬液，经特异荧光染料染色后，放人样品管。在气体压力的作用下，悬浮在样品管中的单细胞悬液形成样品流垂直进入流式细胞仪的流动室，沿流动室的轴心向下流动。第节流式细胞仪的原理鞘液的作用流动室轴心至外壁的鞘液也向下流动，形成包绕细胞悬液的鞘液流，鞘液和样品流在喷嘴附近组成个圆柱流束，自喷嘴的圆形孔喷出，与水平方向的激光束垂直相交，相交点称为测量区。第节流式细胞仪的原理信号的产生与接收染色的细胞在测量区受激光照射后发出荧光，同时产生光散射。这些信号分别被光电倍增管和光电二极管接收，经过计算机储存计算分析这些数字化信息，就可得到细胞大小和核酸含量等指标。第节流式细胞仪的原理当类细胞的特性与要分选的细胞相同时，流式细胞仪就会在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴充以特定的电荷，带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电场时，依所带电荷的符号分别向左偏转或向右偏转，落入指定的收集器内。第二节流式细胞仪的结构流动室与液流驱动系统二激光光源与光束形成系统三光学系统四信号检测与分析五细胞分选器第二节流式细胞仪的结构流动室与液流驱动系统•流动室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央开个孔，供细胞单个流过，检测区在该孔的中心，流动室内充满了鞘液,鞘液的作用是将样品流环抱。•样品流在鞘流的环抱下形成聚焦，保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而得到准确的细胞荧光信息。第二节流式细胞仪的结构由右图可知，空气泵产生压缩空气，通过鞘流压力调节器加在鞘液上恒定的压力，这样鞘液以匀速运动流过流动室，在整个系统运行中流速是不变的。第二节流式细胞仪的结构由于激光焦点处的能量分布为正态分布见右图，中心处能量最高。因此，当样本速率选择高速时，处在样本流不同位置的细胞或颗粒，受激光照射的能量不样，从而被激发出的荧光强度也不相同。第二节流式细胞仪的结构二激光光源与光束形成系统激光是种相干光源，它能提供单波长高强度及稳定性高的光照。由于细胞的快速流动，每个细胞经过光照区的时间仅为左右，且细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号强弱，与被照射的时间和激发光的强度有关，因此细胞必须达到足够的光照强度。第二节流式细胞仪的结构三光学系统或荧光分子数目来表示，现在的均可达到检测小于个荧光分子的指标。第三节流式细胞仪的性能指标灵敏度前向角散射光检测灵敏度是指能够检测到的最小颗粒大小，般目前商品化的可以测量到左右。第三节流式细胞仪的性能指标二仪器的分辨率分辨率是衡量仪器测量精度的指标，通常用变异系数值表示是分布的标准误差，是分布的平均值第三节流式细胞仪的性能指标三分析速度分析速度以每秒分析的细胞数来表示。当细胞流过光束的速度超过仪器响应速度时，细胞产生的荧光信号就会丢失，这段时间称为仪器的死时间。死时间越短，仪器处理数据越快，般可达到个秒左右。大型机已达到每秒几万个细胞。第三节流式细胞仪的性能指标四分选指标分选指标主要包括分选速度分选纯度和分选收获率。•分选速度指每秒可提取所要细胞的个数。•分选纯度指要分选的目的细胞占分选出细胞的百分比。•分选收获率指被分出的细胞与原来溶液中该细胞的百分比。第四节流式细胞仪的技术要求流式细胞分析仪器是项集多学科知识综合应用的复杂仪器，除了对仪器各方面性能指标有严格的要求以外，在实验设计与样品处理方面也需要有丰富的基础理论及操作经验。检测样品制备的重要性二常用的荧光染料与标记染色三操作技术的质量控制第四节流式细胞仪的技术要求检测样品制备的重要性因为流式细胞仪测量的是每个细胞所产生的散射光和荧光信号，如果两个或多个细胞间粘连重叠或细胞碎片过多，都会影响信号的收集及所收集信号的真实性，所以制备单细胞悬液是进行流式细胞仪分析最关键的第步。第四节流式细胞仪的技术要求二常用的荧光染料与标记染色散射光信号是激光照在细胞上所产生的前向光和侧向光信号。荧光信号来自于细胞的自发荧光或被分析细胞经特异性荧光标记染色后通过激光束激发后所产生的。因此，被分析细胞在制备成单细胞悬液后，经过与荧光染料染色后才能上机进行检测。第四节流式细胞仪的技术要求三流式细胞仪操作技术的质量控制在临床检测中，应对各个工作环节和仪器性能进行严格的质量控制和规范化操作，以保证各项检测数据和指标的可靠性。光路与流路校正校准绝对计数的校准第四节流式细胞仪的技术要求光路与流路校正主要目的在于确保激光光路与样品流处于正交状态，使仪器检测时的变异减少到最小，从而控制仪器的值。在流路校正物中，有标准大小的荧光微球，其物理性质生物学特性和化学特性均经过标定。第四节流式细胞仪的技术要求光电信增管校准流式细胞仪在使用过程中，光电倍增管随时间的增加，其放大功率会有所改变，对样品检测的灵敏度会产生影响。为保证样品检测时仪器处于最佳工作状态，采用质控品进行校准，必要时进行电压补偿。第四节流式细胞仪的技术要求绝对计数的校准为保证仪器在计数时的准确性，仪器应采用绝对计数标准品建立绝对计数标准。该标准品是经标定的，如以计算个细胞为，作为设定标准。在样本测定时，以此为标准进行绝对计数，从而获得绝对计数的标准值。第五节流式细胞仪的维护仪器的维护激光电源的波动范围应小于。冷却水须用过滤器，并保证压力和流量。室温在，相对湿度小于。安装单独的可靠的地线。仪器操作必须有经过培训的人员操作。样品和鞘液管道每周应用漂白粉液清洗。第五节流式细胞仪的维护故障信息引起故障的原因解决方法清洗液高度错误清洗液少了加清洗液清洗液高度警示清洗液传感器失灵与公司联系数据处理速率错误数据太大，难以处理稀释样品文件名错误输入的文件名与系统冲突输入另个文件名二常见故障及排除第十五章流式细胞仪本章学习要求掌握流式细胞仪的原理掌握流式细胞仪的结构熟悉流式细胞仪的性能指标熟悉流式细胞仪的技术要求熟悉流式细胞仪的维护熟悉流式细胞仪的应用了解流式细胞仪的发展史概述第节流式细胞仪的工作原理