，细胞数目迅速增长。期细胞倍增时间等于细胞周期时间长度。这期常用细胞倍增时间及细胞分裂指数来判定。平衡期平坦期这期细胞数目虽然在增加，但其增加速度在减慢，直至细胞数量不再增加，处于平衡状态。原代细数量不再增加，处于平衡状态。原代细胞培养的传代细胞由培养瓶内分离再培养称之为传代,进行次分离再培养称之为传代。原代培养的首次传代是建系的关键时期，细胞需覆盖大部分瓶底后再传代。首次传代时细胞接种数量要多些，使细胞能尽快适应新环境而利于细胞生存和增殖。细胞传代方法贴壁生长的细胞用消化法传代部分贴壁生长的细胞用直接吹打即可传代悬浮生长的细胞采用离心分离后传代，贴壁细胞传代步骤吸除瓶内旧培养液加入消化液或室温消化分钟显微镜下进行观察，发现胞质回缩细胞间隙增大后直接加少许含血清的培养液，终止消化细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液计数，分别接种在新的培养瓶内。悬浮细胞的传代直接传代即让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清洗掉，然后用吸管吹打形成细胞悬液后，再传代。离心法离心除上清，加新的培养液，然后传代接种。传代。首次传代时细胞接种数量要多些，使细胞能尽快适应新环境而利于细胞生存和增殖。细胞传代方法贴壁生长的细胞用消化法传代部分贴壁生长的细胞用直接吹打即可传代悬浮生长的细胞采用离心分离后传代，处于平衡状态。原代细数量不再增加，处于平衡状态。原代细胞培养的传代细胞由培养瓶内分离再培养称之为传代,进行次分离再培养称之为传代。原代培养的首次传代是建系的关键时期，细胞需覆盖大部分瓶底后再，细胞数目迅速增长。期细胞倍增时间等于细胞周期时间长度。这期常用细胞倍增时间及细胞分裂指数来判定。平衡期平坦期这期细胞数目虽然在增加，但其增加速度在减慢，直至细胞数量不再增加缓慢生长期对数生长期平衡期迟缓期或延迟期当细胞接种到培养瓶后，细胞逐渐贴附于瓶底，并恢复贴壁形状，代谢开始旺盛，出现细胞分裂及增殖，但生长缓慢。对数生长期此期几乎所有的细胞都在进行分裂他方向，保证细胞不会重叠，但接触，这种活动即可停止。所谓接触抑制实际使细胞汇合形成单层时，细胞变得拥挤，与培养液接触的表面区域也相应减少，营养成分消耗，其分裂也将停止。细胞生长曲线细胞数量生长天数或接触抑制年等学者提出的种现象，培养细胞再生长过程中多发生分裂增殖，细胞移动而相互靠近，这时些细胞可移向其现象可能说明生物学衰老的细胞学基础。人胚胎成纤维细胞可以进行代增殖，而岁老人的肺成纤维细胞仅传代了代后便死亡。表皮细胞寿命天红细胞周个月，白细胞天，神经细胞数年或更多。密度抑制胞系，即般通称的细胞系。衰退期传代细胞到达定代数，即发生增殖缓慢，逐渐停止，进而发生衰退死亡，多数传代细胞或叫有限细胞系，不能通过所谓的“危象临界点，导致最终死亡，这殖变慢停止分裂，进入衰退期，我们称之有限细胞系。这转折点有人称之危象临界点有些细胞的少数后代，或通过人工条件转化的细胞可通过这期，获得持久的增殖传代能力，我们称细胞系，或无限细胞种类。维持时间，因细胞种类不同，般周。传代期培养初代培养的细胞生长到定程度，即可连接传代，使其连续生长。般正常二倍体细胞，不加附加条件，可传代代，此时可发生染色体丢失突变细胞增正常细胞则不再生长恶性细胞重叠生长，易于从瓶壁上成片脱落为此传代势在必行。培养细胞的生长过程原代初代培养期从机体取下组织培养到第次传代，此代细胞保持异质性，细胞种类较多，接近原组织细，细胞死亡消化培养法采用前述的组织消化分散法。将妨碍细胞生长的细胞间质去除，使细胞分散，形成悬液，按不同浓度接种培养瓶培养。传代培养和细胞系的维持培养细胞增殖长满瓶壁时，既达到所谓的饱和密度。此时后，接种于培养瓶，小时贴壁后，细胞就从组织周围长出。培养瓶底预先涂以胶原薄层，以利上皮细胞的生长。如需做组织染色或电镜检查，可将组织可放入小盖玻片上后再放进培养瓶培养。换液需轻巧，以免组织块漂起次培养。细胞保持原有的基本性质，仍具二倍体遗传物性。最接近和反映体内生长特性。适合作药物测试，细胞分化研究。原代培养细胞部分生物学特征尚不稳定，供体和细胞间有很大差异。组织块培养法将组织剪成小块用较缓和。主要作用能从组织生长环境中吸取维持组织完整的钙镁离子。单独使用不能使细胞完全分散，常用的和胰蛋白酶混合液原代培养也称初代培养,是从供体取得组织细胞后在体外进行的首产品有等型，分别适用于分离肝细胞胰岛脂肪细胞肾及纤维组织钙镁离子和血清不影响活性,常用剂量为单位或法二乙烯四乙酸二钠作有关，对细胞分离作用与细胞的类型与性质关系密切钙镁离子和血清抑制活性常用剂量为，值温度。度配制应用液。胶原酶法只对细胞间质胶原组织起消化作用，使上皮细胞与胶原成份分离产有关，对细胞分离作用与细胞的类型与性质关系密切钙镁离子和血清抑制活性常用剂量为，值温度。度配制应用液。胶原酶法只对细胞间质胶原组织起消化作用，使上皮细胞与胶原成份分离产品有等型，分别适用于分离肝细胞胰岛脂肪细胞肾及纤维组织钙镁离子和血清不影响活性,常用剂量为单位或法二乙烯四乙酸二钠作用较缓和。主要作用能从组织生长环境中吸取维持组织完整的钙镁离子。单独使用不能使细胞完全分散，常用的和胰蛋白酶混合液原代培养也称初代培养,是从供体取得组织细胞后在体外进行的首次培养。细胞保持原有的基本性质，仍具二倍体遗传物性。最接近和反映体内生长特性。适合作药物测试，细胞分化研究。原代培养细胞部分生物学特征尚不稳定，供体和细胞间有很大差异。组织块培养法将组织剪成小块后，接种于培养瓶，小时贴壁后，细胞就从组织周围长出。培养瓶底预先涂以胶原薄层，以利上皮细胞的生长。如需做组织染色或电镜检查，可将组织可放入小盖玻片上后再放进培养瓶培养。换液需轻巧，以免组织块漂起，细胞死亡消化培养法采用前述的组织消化分散法。将妨碍细胞生长的细胞间质去除，使细胞分散，形成悬液，按不同浓度接种培养瓶培养。传代培养和细胞系的维持培养细胞增殖长满瓶壁时，既达到所谓的饱和密度。此时正常细胞则不再生长恶性细胞重叠生长，易于从瓶壁上成片脱落为此传代势在必行。培养细胞的生长过程原代初代培养期从机体取下组织培养到第次传代，此代细胞保持异质性，细胞种类较多，接近原组织细胞种类。维持时间，因细胞种类不同，般周。传代期培养初代培养的细胞生长到定程度，即可连接传代，使其连续生长。般正常二倍体细胞，不加附加条件，可传代代，此时可发生染色体丢失突变细胞增殖变慢停止分裂，进入衰退期，我们称之有限细胞系。这转折点有人称之危象临界点有些细胞的少数后代，或通过人工条件转化的细胞可通过这期，获得持久的增殖传代能力，我们称细胞系，或无限细胞系，即般通称的细胞系。衰退期传代细胞到达定代数，即发生增殖缓慢，逐渐停止，进而发生衰退死亡，多数传代细胞或叫有限细胞系，不能通过所谓的“危象临界点，导致最终死亡，这现象可能说明生物学衰老的细胞学基础。人胚胎成纤维细胞可以进行代增殖，而岁老人的肺成纤维细胞仅传代了代后便死亡。表皮细胞寿命天红细胞周个月，白细胞天，神经细胞数年或更多。密度抑制或接触抑制年等学者提出的种现象，培养细胞再生长过程中多发生分裂增殖，细胞移动而相互靠近，这时些细胞可移向其他方向，保证细胞不会重叠，但接触，这种活动即可停止。所谓接触抑制实际使细胞汇合形成单层时，细胞变得拥挤，与培养液接触的表面区域也相应减少，营养成分消耗，其分裂也将停止。细胞生长曲线细胞数量生长天数缓慢生长期对数生长期平衡期迟缓期或延迟期当细胞接种到培养瓶后，细胞逐渐贴附于瓶底，并恢复贴壁形状，代谢开始旺盛，出现细胞分裂及增殖，但生长缓慢。对数生长期此期几乎所有的细胞都在进行分裂，细胞数目迅速增长。期细胞倍增时间等于细胞周期时间长度。这期常用细胞倍增时间及细胞分裂指数来判定。平衡期平坦期这期细胞数目虽然在增加，但其增加速度在减慢，直至细胞数量不再增加，处于平衡状态。原代细数量不再增加，处于平衡状态。原代细胞培养的传代细胞由培养瓶内分离再培养称之为传代,进行次分离再培养称之为传代。原代培养的首次传代是建系的关键时期，细胞需覆盖大部分瓶底后再传代。首次传代时细胞接种数量要多些，使细胞能尽快适应新环境而利于细胞生存和增殖。细胞传代方法贴壁生长的细胞用消化法传代部分贴壁生长的细胞用直接吹打即可传代悬浮生长的细胞采用离心分离后传代，贴壁细胞传代步骤吸除瓶内旧培养液加入消化液或室温消化分钟显微镜下进行观察，发现胞质回缩细胞间隙增大后直接加少许含血清的培养液，终止消化细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液计数，分别接种在新的培养瓶内。悬浮细胞的传代直接传代即让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清洗掉，然后用吸管吹打形成细胞悬液后，再传代。离心法离心除上清，加新的培养液，然后传代接种。部分贴壁生长细胞直接吹打传代或需消化后传代细胞系的维持是通过换液传代和细胞冻存实现的建立档案记录组织来源，生物学特性，培养液要求传代换液时间和规律，细胞的遗传学标志，生长形态，常规病理染色的标本等。细胞系的维持防细胞之间的交叉污染，传代时所用器械要编号或做好标记每种细胞系都应有充足的冻存储备，以防绝种另外二倍体细胞等有限细胞系如果暂时不用最好冻存以免传代太多，造成细胞衰老或发生改变培养细胞的纯化自然纯化自然纯化即利用种类细胞的增殖优势，而排除其它细胞生长，靠自然的增殖潜力最后留下生长优势细胞，去除其它细胞，达到细胞纯化的目的。人工纯化利用人为手段造成对细胞生长有利的环境条件，抑制其它细胞的生长，从而达到纯化细胞的目的。酶消化法酶消化法由于上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同成纤维细胞先脱壁，而上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁，利用这种差异采用多次差别消化方法将上皮细胞和成纤维细胞分开。机械划除法机械划除法上皮细胞和成纤维细胞多数都同时出现，混杂生长常常分区呈片，采用机械的方法去除不需要的细胞区域，而保留需要的细胞。反复贴壁法成纤维细胞和上皮细胞相比，其贴壁过程快，大部分细胞常能在短时间内大约完成附着过程但不定完全伸展而上皮细胞大部分细胞在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起，这样可以利用此差别来纯化细胞克隆法将细胞分成单个细胞，使之分别生长成克隆，然后对每克隆进行测试，选择出所需要的克隆。培养基限定方法些细胞在生长过程中必须存在或必须去除种物质，否则将无法生长。而其它细胞与之相反，可以利用这种技术来纯化细胞。如杂交瘤技术常用的培养液，就用来筛选杂交瘤细胞而抑制其它细胞。细胞的冻存冻存细胞要缓慢冷冻。减少细胞内冰晶的形成是减少细胞损伤的关键。