TOP30【毕业设计】HCV核心区基因片段C70-140的原核表达.doc文档免费在线阅读

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湖南理工学院本科毕业论文材料和方法材料与方法材料实验仪器电子天平，恒温磁力搅拌器，金坛院本科毕业论文前言针对上述检测中存在的些不足之处，我们通过大肠杆菌中表达并纯化核心蛋白，构建个原核表达载体，用于抗体和核心抗原的联合检测，使感染的窗口期缩存在。

所以抗不适合作为感染的早期诊断指标。

而的检测方法虽然具有早期敏感和特异等特点，但该方法在技术和设备上要求较高，费时，检出率低，难以在常规工作或基层实验室推广。

湖南理工学断有重大意义。

当前，医疗机构主要通过对血清中抗和的检测来筛查丙肝。

但感染后到抗抗体的出现有个平均为周周的窗口期，即使患者被高度感染，抗体检测技术也较难检测的对丙肝认知水平也较低，调查过程中，约的公众不知道丙肝。

丙肝，市场上既没有非常明确的药物，也缺少有效的疫苗加以预防和阻止其进步传播。

因此，的早期诊断对于筛查的传染源指导临床治疗和预后判转化膜重排及免疫逃逸等的调节分子发生相互作用。

目前，国内公众对丙肝流行现状缺乏全面准确的了解。

据统计，在的有丙肝高危险因素的人群中，仅有检测过丙肝。

并且对丙肝治疗尚未完全纳入医保，公众抑制型和帽依赖型的翻译。

所以，的核心蛋白可被看作个多功能蛋白，能够影响多种细胞信号转导途径，激活多种病毒及细胞基因启动子，具有广泛的反式激活作用还可与宿主细胞中参与凋亡转录调控对病毒感染的防御反应，参与细胞中的多条信号转导通路，调节细胞的生长周期等。

等在对自我调节机制的研究中发现，核心蛋白可以通过与内部核糖体进入位点的结合，特异性的和非结构蛋白，。

的核心蛋白不仅作为结构蛋白包裹病毒核酸形成病毒的核衣壳，而且可以通过多种途径，抑制宿主个区端的非翻译区个长的多蛋白读码框，端的非翻译区，。

翻译区的多蛋白读码框可以翻译出多种结构蛋白个区端的非翻译区个长的多蛋白读码框，端的非翻译区，。

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所以，的核心蛋白可被看作个多功能蛋白，能够影响多种细胞信号转导途径，激活多种病毒及细胞基因启动子，具有广泛的反式激活作用还可与宿主细胞中参与凋亡转录调控转化膜重排及免疫逃逸等的调节分子发生相互作用。

目前，国内公众对丙肝流行现状缺乏全面准确的了解。

据统计，在的有丙肝高危险因素的人群中，仅有检测过丙肝。

并且对丙肝治疗尚未完全纳入医保，公众对丙肝认知水平也较低，调查过程中，约的公众不知道丙肝。

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因此，的早期诊断对于筛查的传染源指导临床治疗和预后判断有重大意义。

当前，医疗机构主要通过对血清中抗和的检测来筛查丙肝。

但感染后到抗抗体的出现有个平均为周周的窗口期，即使患者被高度感染，抗体检测技术也较难检测的存在。

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分子量标准核酸电泳分子量标准和蛋白质电泳分子量标准蛋白均购自达核心区基因片段，本研究拟构建核心蛋白的原核表达载体并将表达蛋白进行纯化，用于丙型肝炎核心抗原和丙型肝炎抗体联合检测。

多项研究均表明核心蛋白能够导致肝细胞恶变和肿瘤的发生，除了参与病毒核衣壳的形成，核心蛋白还能调节基因转录，影响细胞分化，细胞信号转导途径，抑制宿主免疫反应等。

核心蛋白氨基酸序列上有多个和细胞的抗原表位，能诱导不同病毒株的交叉免疫应答，并具有调控多种细胞基因影响细胞生长增生及凋亡的能力，可能是引起宿主细胞癌变的重要因素。

因此，核心蛋白具有的多种功能促使人们从不同角度对其进行研究，以期探讨的致病机制，为预防和治疗感染提供新的策略。

本研究旨在在大肠杆菌中原核表达核心基因片段，通过逆转录扩增核心区基因片段，将其连接到经同样酶切的原核表达载体中，转化大肠埃希氏菌，以诱导，鉴定。

结果表明，将目的基因与表达载体进行连接，得原核表达载体，该载体转化大肠埃希氏菌后可诱导表达出分子量约为的重组蛋白。

以目前广泛使用的原核表达系统大肠埃希菌来构建核心基因的表达载体。

同真核表达系统相比，大肠埃希菌具有较多的优点，其表达目的蛋白快速高效经济。

其本身繁殖力强。

但由于原核细胞缺乏真核细胞所特有的翻译后加工修饰系统，如糖基化等，使不少具有生物活性的糖蛋白不能利用原核表达系统表达而且蛋白的高水平表达常形成包涵体，而包涵体的溶解纯化步骤繁琐，也正因为如此，以包涵体形式表达的重组蛋白的分离纯化以及融合蛋白的复性成为了原核表达系统应用过程中遇到的主要障碍之。

本研究还可以优化地方，如工程菌在大肠杆菌中诱导时间的优化，可以选择多个时间段诱导比较蛋白表达量，从而选择个最佳的诱导时间湖南理工学院本科毕业论文实验讨论诱导时的浓度优化，本实验中加入的对蛋白表达量的影响不明显，还可以在这个基础上增加或减少其浓度，比较结果，从而选取个最佳的浓度。

湖南理工学院本科毕业论文参考文献参考文献中华医学会肝病学分会，中华医学会传染病与寄生虫病学分会丙型肝炎防治指南中华肝脏病杂志陈广灿，李威，曾永明的基因结构功能与肝细胞癌相关性研究进展中华肿瘤防治杂志翟友刚，史朋核心蛋白致细胞癌变机制的研究进展国外医学病毒学分册焦成松，周永兴丙型肝炎病毒蛋白研究进展国外医学病毒学分册李克，王琳，成军，等丙型肝炎病毒核心蛋白基因的表达载体构建及在酵母中的表达军医进修学院学报，湖南理工学院本科毕业论文参考文献